RESUMO - TECNICA DE DIAGNPSTICO 2

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DATA: 02/09/2021 Juliana Oliveira – T. IV-B 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Perguntas da aula anterior 
 
1- Qual é o propósito da PCR (reação da cadeia de polimerase)? É necessária uma grande quantidade de 
DNA para realizar esse procedimento? Justifique. 
A reação em cadeia da polimerase, ou PCR, é uma técnica para fazer muitas cópias de uma 
região específica do DNA, in vitro (em um tubo de ensaio, ao invés de um organismo). Não é necessário 
utilizar uma quantidade grande, só uma parte específica, pois está prática possibilita a amplificação de 
sequências de DNA. 
 
2- Porque não se amplifica (ou se replica) todo o genoma de um organismo durante a PCR? Quem 
garante a especificidade da sequência a ser amplificada? 
Não se amplifica todo o genoma durante a PCR, apenas a parte desejada. O Primer é 
complementar a região genica e dá a especificidade, identificando a região a qual vai ser utilizada. 
 
3- Durante o processo de replicação do DNA na célula eucariota, a enzima helicase rompe as pontes de 
hidrogênio, como essa separação da dupla hélice é feita durante a PCR? 
Durante a PCR a separação ocorre através da elevação da temperatura entre 94º a 98º, 
ocorrendo à desnaturação. 
 
4- Na PCR utilizamos primers (iniciadores) obtidos a partir de sequências de DNA já conhecidas, empresas 
habilitadas confeccionam esses elementos. Na célula viva ocorre essa etapa? Quem produz os 
primers e por que os primers são necessários? 
Técnicas de diagnostico molecular e polimorfismo 
Objetivos de aprendizagem 
 
 Compreender as principais técnicas de 
biologia molecular utilizadas para diagnóstico 
− Extração de DNA 
− PCR 
− Eletroforese 
− Sequenciamento 
 Correlacionar os resultados obtidos 
através das técnicas de biologia molecular 
com um provável resposta clínica 
Bibliografia 
 
Aula 05 - Prof. Estela Araujo Costa 
 
 
DATA: 02/09/2021 Juliana Oliveira – T. IV-B 
 
Sim, ocorre e durante a replicação do DNA em células, os primers são produzidos pela ação da RNA-
polimerase especial (primase), sendo necessário pois limitada o início de onde vai ocorrer a transcrição. 
 
5- Podemos afirmar que a enzima DNA polimerase utilizada para as reações de PCR é diferente da DNA 
polimerase presente em nossas células? Por qual motivo? 
 É diferente, pois na PCR é utilizada a Taq polimerase, é uma bactéria resistente a altas temperaturas 
o qual a fita precisa sofrer para ocorrer a separação da dupla hélice. 
 
 SEQUENCIAMENTO DE DNA 
 
 
 
 
 SEQUENCIAMENTO DO GENOMA 
 
❖ CONCEITO 
− Total da informação genética de um organismo, podendo ser nuclear (comossomos) e mitocandrial 
− O sequenciamento é um processo de determinação da ordem precisa de nucleotídeos em um pedaço 
de DNA (A, G, C, T), sendo o primeiro passo para obter uma descrição completa da composição molecular de 
cada organismo, já que todas as informações necessárias para construção de um indivíduo estão presentes 
no DNA. 
− O gene possui regiões codificadoras (EXYONS) e não codificadoras (INTRONS) 
− A ccmparação de genomas de diversos indivíduos permite correlacionar características, síndromes e 
mutações de determinados lócus do genoma. 
− Esse sequenciamento é feito através de um equipamento e precisa de componentes para sua 
realização, sendo eles o material genético, arcabouço e nucleotídeos. 
 
❖ PORQUE SE SEQUENCIAR UM GENOMA? 
 
− É o primeiro passo para obter uma descrição completa da composição molecular de cada organismo 
poiS todas informações necessária para construção estão presentes no DNA genômico 
− A ccmparação de genomas de diversos indivíduos permite correlacionar características, síndromes e 
mutações de determinados lócus do genoma. 
− É o processo de determinação da ordem precisa de nucleotídeos na molécula de DNA. Inclui qualquer 
método de tecnologia que é usado para determinar a ordem das quatro bases nitrogenadas: A, T, C e G 
 
Entender a importância da relação da 
função proteínas genes, 
 
 
 
 
 
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 TECNOLOGIAS DE SEQUENCIAMENTO DE DNA/METODOS 
Para localizar a sequencia existem diversos metodos: 
 
- PRIMARIO OU SEQUENCIAMENTO DE PRIMEIRA GERAÇÃO: Interrupção da cadeia (ddNTPs) Sanger 
 
➢ METODO 
▪ Baseia-se no principio em que, num dado momento da extensão (semelhante à PCR), 
uma pequena porcentagem de moléculas irá incorporar um ddNTP e neste caso a reação de 
alongamento da cadeia será automaticamente interrompida naquele sítio. 
▪ DdNTP: nucleotídeos modificados - didesoxiribonucleotídeos, é quando acaba a extensão 
do deslacamento da cadeia 
▪ Em cada reação, um ddNTP é incorporado aleatoriamente na posição do dNTP 
correspondente - provocando a terminação da polimerização 
 
➢ APLICAÇÃO 
 
➢ COMPONENTES NECESSÁRIOS 
▪ DNA 
▪ Enzima (Taq Pol) 
▪ Primer 
▪ ddNTP (dideoxinucleotideotrifosfato) 
o dATP (desoxiadenosina trifosfato) 
o dTTP (desoxitimidina trifosfato) 
o dCTP (desoxicitosina trifosfato) 
o dGTP (desoxiguanosina trifosfato) 
o ddNTP (dideoxinucleotideotrifosfato) 
 
➢ PROCEDIMENTO 
 
 
- SEQUENCIAMENTO DE NOVA GERAÇÃO 
➢ METODO 
▪ Baseado no princípio de detecção dos raios luminosos emitidos dos diferentes PPi 
liberados a partir da síntese do DNA. 
▪ Ocorre a obtenção de um grande número de sequências em um menor tempo, já que 
ocorrem muitas reações de sequenciamento simultaneamente; 
 
 
DATA: 02/09/2021 Juliana Oliveira – T. IV-B 
 
▪ É uma forma mais barata; 
▪ As reações são pequenas e muitas podem ser realizadas de uma vez em um chip; 
▪ Pelo fato de as reações serem feitas em paralelo, os resultados são obtidos muito 
mais rápido; 
▪ Não utiliza ddNTP (interrupção da cadeia), pois se baseia no comprimento de onda 
emitido pelos fluorocromos 
▪ O sequenciador utilizado é muito tecnológico e possui geralmente o tamanho de um 
pendrive. Além de possuir uma velocidade cerca de 20.000 vezes maior que o método 
Sanger. 
 
➢ APLICAÇÃO 
▪ Esse método é utilizado para análise do sequenciamento de genomas (vírus, bactérias). 
Foi utilizado este tipo para o estudo do Sars-Cov2, no projeto da vacina contra a Covid-19. 
 
 
erísticas de um indivíduo, podemos tratá-lo melhor porque conhecemos sua 
disposição especial para contrair doenças. Esse benefício é enorme para a sociedade, até porque economiza 
 
pesquisas do Einstein, sobre o sequenciamento do genoma humano.