Relatório sobre Meios de Cultivo, Semeadura e Coloração de GRAM.

Prévia do material em texto

RELATÓRIO
AULA PRÁTICA
INTRODUÇÃO
Os meios de cultivo, são mistura de substâncias, (polímeros sintéticas, carboidratos,
proteínas e etc.) que se destinam ao cultivo artificial de micro-organismos.
As técnicas de semeadura permitem que o cultivo destes micro-organismos nos meios de
cultura seja eficiente e que as seguintes finalidades sejam atingidas: crescimento bacteriano,
isolamento bacteriano, estudo da morfologia colonial, pesquisa de patogenicidade e pesquisa
das características bioquímicas.
A partir deste meios de cultivo, foi feita a coloração de gram, que é uma técnica de coloração
na qual a diferença no envoltório celular divide a classificação de bactérias em dois grupos:
Gram-positiva e Gram-negativa. Essa técnica recebeu este nome em homenagem ao médico
Dinamarquês Hans Cristian Joaquim gram. Por volta de 1884, Hans gram observou, que após
bactérias serem tratadas com diferentes corantes elas adquiriram cores diferenciadas. Desta
forma, as que ficavam roxas foram classificadas como Gram-positiva e as que ficam
avermelhadas/rosadas, foram classificadas como gram negativas.
OBJETIVO
O principal objetivo desta prática foi, aprender a realizar um meio de cultura, aprender as
técnicas de semeadura, realizar a retirada da colônia do meio de cultura, sendo ele líquido ou
sólido, também aprendemos a fixar a lâmina no bico de Bunsen. Além disso, foi ensinada a
forma correta de se realizar a coloração de GRAM, a identificação ,classificação das
bactérias e também aprendemos a reconhecer e utilizar as vidrarias e utensílios utilizados
para cultivo de microrganismos.
MATERIAIS E MÉTODOS
- Bactéria
- Alças bacteriológica
- Lâminas de microscopia
- Conjunto para coloração de gram
- Água destilada
- Bico de Bunsen
- Ágar-ágar e caldo knorr para o meio de cultura
- Bactéria retirada do smartphone
METODOLOGIA
Para iniciar, nós preparamos um meio de cultura caseiro, que foi feito com ágar-ágar e caldo
knorr, após isso, com o auxílio de uma haste flexível umedecida, passei em meu celular e
passei no meio de cultura que fizemos, utilizei a técnica de cultivo de estria simples.
Após esse processo, deixei descansar por 7 dias. Logo após, com auxílio de uma alça
bacteriológica flambada, toquei na colônia de minha preferência e coloquei na lâmina
fazendo movimentos circulares. Sendo assim, fixei essa lâmina no bico de bunsen, passando
por ela 3 vezes.
Na etapa de coloração, é iniciada com um corante primário que é o cristal de Violeta, foi
coberta a lâmina com a solução e deixou-se corar por 1 minuto.
Após esse tempo, é a etapa do Mordente que é o Lugol, foi adicionado e deixado reagir
durante 30 segundos.
Na etapa do descolorante é aplicado o Álcool-Acetona na lâmina inclinada de forma a lavar
o resíduo do corante e logo em seguida é lavada com água destilada.
Na última etapa é adicionado o corante secundário, a fucsina, e deixado por 30 segundos.
Depois lavei a lâmina e deixei secar. Após isso, já estava pronta para ser observada no
microscópio.
RESULTADOS
O meio de cultura que eu fiz, foi do tipo semi-sólidos, ele foi um meio enriquecido.
Infelizmente não obtive uma presença de proliferação (bolor) de bactérias definida na técnica
de estria simples que eu utilizei, porém, apesar disso, foi possível visualizar as bactérias ao
microscópio.
Na minha amostra identifiquei a presença principalmente de bactérias gram negativas, mas
também observei as que são do tipo gram positivas, identifiquei a maioria delas como sendo
bacilos.
Fotografia 1: Meio de cultura Fotografia 2: bactéria visualizada no microscópio
CONCLUSÃO
A partir desta prática, foi possível identificar a parede celular dos microrganismos utilizados,
pois as bactérias Gram-positiva são bactérias que possuem um envoltório celular formado por
membrana citoplasmática e uma espessa camada composta por peptidioglicano, ficando
assim com uma coloração roxa.
Já as Gram-negativa, (que foi as que eu identifiquei em maior quantidade) são bactérias que
tem sua parede celular composta por uma delgada camada de peptidoglicano e com uma
membrana plasmática externa, ficando com uma coloração avermelhada/rosada.