a) Para determinar as espécies presentes em cada patamar (zona tamponante), devemos considerar os valores de pK. No primeiro patamar, onde o pH é menor que pK1, a espécie predominante é o ácido completamente protonado (H3A). No segundo patamar, onde o pH está entre pK1 e pK2, temos a presença tanto do ácido protonado (H3A) quanto do íon monoprotonado (H2A-). No terceiro patamar, onde o pH é maior que pK2, a espécie predominante é o íon diprotonado (HA2-). b) A partir da curva de titulação, podemos determinar o valor de pKa de cada grupo ionizável da histidina observando os pontos de inflexão da curva. Cada ponto de inflexão corresponde à ionização de um grupo ácido. Portanto, podemos determinar o pKa de cada grupo ionizável identificando os valores de pH nos pontos de inflexão. c) O ponto isoelétrico da histidina é o pH no qual a carga líquida da molécula é igual a zero. Para determinar o ponto isoelétrico, devemos considerar os grupos ionizáveis presentes na histidina. No caso da histidina, temos dois grupos ionizáveis: o grupo amino (pKa ~ 9,17) e o grupo imidazol (pKa ~ 6,0). O ponto isoelétrico ocorre quando ambos os grupos estão completamente protonados, ou seja, quando o pH é igual à média dos valores de pKa desses grupos. Portanto, o ponto isoelétrico da histidina ocorre em torno de pH 7,6.
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