A técnica de coloração de Gram é amplamente utilizada na microbiologia para diferenciar bactérias em Gram-positivas e Gram-negativas. Aqui está uma descrição geral de como preparar a lâmina do esfregaço e as etapas da técnica: 1. Preparação da lâmina do esfregaço: - Pegue uma lâmina de vidro limpa e esterilizada. - Com uma alça bacteriológica esterilizada, coloque uma pequena quantidade da amostra bacteriana na lâmina. - Espalhe a amostra uniformemente na lâmina, formando uma fina camada. 2. Etapas da técnica de coloração de Gram: - Fixação: Deixe o esfregaço secar ao ar ou fixe-o suavemente passando a lâmina sobre a chama de um bico de Bunsen por alguns segundos. Isso ajuda a fixar as bactérias na lâmina. - Cristal Violeta: Cubra o esfregaço com cristal violeta por cerca de 1 minuto. O cristal violeta cora todas as células bacterianas de roxo. - Lavagem: Lave suavemente o esfregaço com água corrente para remover o excesso de corante. - Lugol: Cubra o esfregaço com solução de Lugol (iodo) por cerca de 1 minuto. O Lugol forma um complexo com o cristal violeta nas células Gram-positivas, tornando-as de cor roxa intensa. - Lavagem: Lave suavemente o esfregaço com água corrente para remover o excesso de corante. - Decoloração: Adicione álcool-acetona (ou álcool etílico) ao esfregaço até que o corante pare de sair (geralmente alguns segundos). Isso remove o corante das células Gram-negativas, tornando-as incolores. - Lavagem: Lave suavemente o esfregaço com água corrente para remover o excesso de corante. - Safranina: Cubra o esfregaço com safranina por cerca de 1 minuto. A safranina cora as células Gram-negativas de rosa ou vermelho. - Lavagem: Lave suavemente o esfregaço com água corrente para remover o excesso de corante. - Secagem: Deixe o esfregaço secar ao ar antes de observá-lo ao microscópio. Reagentes utilizados: - Cristal violeta - Solução de Lugol (iodo) - Álcool-acetona (ou álcool etílico) - Safranina Lembre-se de seguir as boas práticas de segurança e esterilidade ao realizar essa técnica.
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