ATIVIDADE PRESENCIAL 02 Disciplina: Bioquímica Clínica Unidades Temáticas do Material Didático: Unidade II Professor(a): Eleandro Aparecido Tronchini Atividade - Solicitar com antecedência aos técnicos do laboratório que deixem as aulas práticas montadas na bancada, contendo os materiais e reagentes necessárias. - Recepcionar os alunos no laboratório de Bioquímica clínica; - Solicitar aos alunos para lavarem as mãos antes de iniciar a atividade; - Cobrar o uso de EPIs (sapato fechado, touca, máscara, jaleco, óculos e luva); - Cada bancada deve apresentar um roteiro da aula prática; - Dividam os alunos em grupos, com no máximo, 02 alunos por bancada. Conteúdos Os conteúdos abordados nesta atividade são referentes a técnica de determinação de Colesterol Total e Determinação de Triglicerídeo. É de suma importância que os alunos assistam as aulas gravada das unidades II e III da disciplina Bioquímica clínica. - Espectrofotômetro; - Centrifuga; - Pipetas automática; - Ponteiras; - Estantes para tubos; - Banho maria; - Etiqueta para identificação; - Seringa e agulha para coleta de sangue; - Garrote; - Tubo de coleta de sangue – tampa vermelha (soro) - Kit enzimático para determinação de colesterol total e triglicerídeos; Objetivo da atividade - Promover ao aluno a associação dos conhecimentos teóricos das disciplinas juntamente com a prática. - Tornar os acadêmicos do curso aptos a desenvolver a rotina de trabalho dentro do contexto do laboratório de análises clínicas, permitindo assim uma boa atuação no mercado e prestar uma boa qualidade dos serviços. Importância do Conteúdo Espera-se que ao final desta atividade, os acadêmicos sejam capazes de: - Identificar os equipamentos usados no laboratório para determinação das dosagens sanguínea de colesterol total e triglicerídeos; - Compreender a importância da rotina de trabalho dentro do laboratório de análises clínica; - Compreender a importância de cada etapa para o desenvolvimento do exame a ser realizado; - Entender a interpretação dos exames em questão; Contextualização e preparação para o estudo Prezado acadêmico, iremos iniciar o estudo da nossa atividade pratica, com a determinação de Colesterol Total na parte I e determinação de Triglicerídeos na parte II, desejo um excelente estudo a todos! É importante destacar importante que o processo de coleta de sangue é uma etapa inicial muito importante para um resultado seguro da determinação do colesterol total e triglicerídeos. A dosagem do colesterol no sangue, juntamente com a de triglicérides e de colesterol HDL, é empregada principalmente na avaliação de risco de doença arterial coronariana e no monitoramento de pacientes com hipotireiodismo, diabéticos e obesos. Descrição da atividade Coleta de sangue Escolher um aluno e realizar a coleta de sangue para obtenção do soro para as analises de colesterol total e triglicerídeos; OBS: Deixar o soro armazenado na geladeira em epeendorf e identificado para o dia seguinte, para realizar a dosagens de triglicerídeos; PARTE I Determinação de Colesterol Total Amostra: Soro Procedimento Técnico Manual Espectrofotômetro (leitura entre 490 e 510 nm); Tubos e Pipetas; Banho-Maria a 37°C; Cronômetro. Kit enzimático para determinação do colesterol total; Procedimento Manual A – Condições do Teste Leitura: Comprimento de onda 500 nm; Medida: Contra o Branco; Tipo de reação: Ponto final; B-Técnica de Análise 1-Identificar 3 tubos de ensaio com “Branco”,” Teste” e “Padrão” e proceder: Tubos Branco Teste Padrão Soro --------- 10 µL -------- Padrão (1) ------- ----- 10 µL Reagente de Cor (2) 1000 µL 1000 µL 1000 µL 1- Homogeneizar e incubar em banho-maria a 37°C por 10 minutos. O nível de água do banho-maria deve ser superior ao nível dos reagentes nos tubos. 2 - Fazer as leituras fotométricas do Padrão (AP) e do Teste (AT), zerando o aparelho com o Branco em 500 nm (490 a 510 nm). A cor é estável durante 1 hora. Valores de Referência Substituem os valores de referência e são determinados a partir de dados epidemiológicos, calculados estatisticamente, que relacionam os níveis do colesterol com a prevalência de doença arterial coronariana (DAC). Colesterol Total (Adulto) Colesterol Total (Criança e adoslecente) Valor desejável: <200 mg/dL Valor desejável: < 170 mg/dL Valor limítrofe: 200 a 239 mg/dL Valor limítrofe: 170 a 199 mg/dL Valor Elevado: Valor elevado: Parte II Determinação de Triglicerídeos Aplicação Clínica A dosagem dos Triglicérides no sangue, juntamente com o Colesterol e suas frações, é empregada principalmente para avaliar os riscos de Doença Arterial Coronariana (DAC). Amostra: Soro Procedimento Técnico Manual Espectrofotômetro (leitura entre 490 e 250 nm); Tubos e Pipetas; Cronômetro; Banho- Maria. Kit par dosagem de triglicerídeos; Procedimento Manual 1- Identificar 3 tubos de ensaio com "Branco", "Teste" e "Padrão" e pipetar: Tubos Branco Teste Padrão Amostra --------- 10 mL --------- Padrão --------- --------- 10 mL Reagente de Cor 1000 mL 1000 mL 1000 mL 2- Homogeneizar e incubar os tubos durante 10 minutos a 37ºC. O nível da água do banho-maria deve ser superior ao nível dos reagentes nos tubos. 3- Ler a absorbância do Padrão (AP) e do Teste (AT), zerando o aparelho com o Branco em 505 nm ou filtro verde (490-520 nm). A cor é estável por 1 hora. Valores de Referência Adultos Valor desejável < 150 mg/dL Limiar elevado 150 – 199 mg/dL Valor elevado 200 – 499 mg/dL Valor muito elevado > 500 mg/dL Valores de Referência Menores de 10 anos De 10 a 19 anos Valor desejável < 100 mg/dL < 130 mg/dL Valor elevado > 100 mg/dL > 130 mg/dL OBS: O processo correto de pipetarem as amostras é de suma importância para o resultado do exame. Portanto fiquem atentos a este processo. Atividade Prática Presencial : (Para O Acadêmico Entregar) 1) Descreva a técnica de determinação do colesterol e triglicerídeos. 6. Fontes de pesquisa. - Aulas conceituais da Disciplina Bioquímica clínica – Unidade II: Disponível no Ambiente Virtual de Aprendizagem. 10. Referências bibliográficas MOTTA, V. T. Bioquímica clínica: princípios e interpretações. 3ª edição. 2000 VIEIRA, A. D. C. et al. Bioquímica clínica: líquidos corporais. Porto Alegre: SAGAH, 2021. ATENÇÃO - Os roteiros devem ser enviados, impreterivelmente, 15 dias antes do início da disciplina, visando possibilitar que todos os envolvidos realizem a preparação necessária para o desenvolvimento da atividade. No momento do envio para o Coordenador de Curso, copie no e-mail o tutor mediador da disciplina e a secretária do núcleo a qual o curso pertence. - No segundo encontro presencial de cada semana deve ser dada continuidade ao desenvolvimento da atividade presencial proposta neste roteiro, esclarecendo dúvidas, discutindo resultados, estimulando a interação entre os alunos, etc.