Vamos analisar cada alternativa: a) O método de Sanger revolucionou o sequenciamento de DNA pela não utilização de substâncias radioativas marcando os ddNTPs, e ficou conhecido como sequenciamento da segunda geração. - Correto. O método de Sanger revolucionou o sequenciamento de DNA pela utilização de ddNTPs marcados, não radioativos. b) Após o término da reação de sequenciamento, ela é submetida à eletroforese capilar. Todos os fragmentos recém-sintetizados, cada um terminado em um nucleotídeo diferente e cada um marcado com um diferente fluoróforo, são separados pelas respectivas cores. - Correto. Após a reação de sequenciamento, os fragmentos são separados por eletroforese capilar. c) Após a etapa de desnaturação do DNA, é colocado um primer na extremidade 5¿ de uma das cadeias e, com a ajuda de uma DNA polimerase, sintetiza-se a cadeia complementar por completo. - Incorreto. O primer é colocado na extremidade 3' para a síntese da cadeia complementar. d) Os métodos de sequenciamento têm base na produção de fragmentos de DNA de comprimento crescente, que começam em um ponto comum e possuem todos os quatro tipos de nucleotídeos nas respectivas extremidades. - Correto. Os métodos de sequenciamento produzem fragmentos de DNA de comprimento crescente com os quatro tipos de nucleotídeos nas extremidades. e) Os nucleotídeos empregados nessa técnica são quimicamente modificados de forma que não apresentam um terminal hidroxila (3´-OH), impedindo a inserção de um novo nucleotídeo pela DNA polimerase. - Correto. Os nucleotídeos são modificados para impedir a adição de novos nucleotídeos pela DNA polimerase. Portanto, as alternativas corretas são: a), b), d) e e).
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