Vamos analisar as afirmações uma a uma: 1. "Ct (ciclo threshold) pode ser determinado pela intersecção da linha A do limiar de detecção da reação threshold, com a linha da amplificação gênica de cada amostra." - Correto. O Ct é o ponto em que a fluorescência da amostra ultrapassa o limiar de detecção, indicando o início da amplificação detectável. 2. "O aumento da fluorescência indica que a amplificação da sequência-alvo está ocorrendo, pois a cada ciclo, durante a desnaturação da dupla fita, ocorre liberação da fluorescência." - Incorreto. A fluorescência aumenta durante a extensão, não na desnaturação. A liberação da fluorescência está associada à atividade da polimerase durante a síntese da nova fita. 3. "A linha paralela ao eixo referente ao número de ciclos, na altura em que se inicia a fase exponencial da amplificação gênica, denominado threshold, representa falsos sinais positivos por contaminação das amostras por DNA genômico." - Incorreto. O threshold é um valor definido para distinguir sinal real de ruído, não representa falsos positivos. 4. "A análise comparativa das duas amostras deve ser realizada a partir da estabilização da amplificação, que ocorre na fase platô, sendo alcançada no ciclo 28 para a amostra e no ciclo 40 para a amostra." - Incorreto. A análise é feita na fase exponencial, não na fase platô, pois na fase platô a amplificação já não é proporcional à quantidade inicial. 5. "O maior Ct (26) é observado no início da fase exponencial de amplificação em células não neoplásicas e indica maior expressão comparativamente às células neoplásicas (Ct = 17), não sendo esta sequência-alvo um bom marcador tumoral." - Incorreto. Ct menor indica maior expressão; portanto, Ct 17 indica maior expressão que Ct 26. Resposta correta: a) Ct (ciclo threshold) pode ser determinado pela intersecção da linha A do limiar de detecção da reação threshold, com a linha da amplificação gênica de cada amostra.