Método de GRAM? Como funciona?

A técnica de Gram, também conhecida como coloração de Gram, é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), em 1884, o qual permite diferenciar bactérias com diferentes estruturas de parede celular a partir das colorações que estas adquirem após tratamento com agentes químicos específicos. O método consiste em tratar sucessivamente um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, etanol-acetona e fucsina básica. As bactéricas que adquirem a coloração azul violeta são chamadas de Gram-positivas e aquelas que adquirem a coloração vermelho são chamadas de Gram-negativas.

Passo a passo :

1. Confeccionar o esfregaço;
2. Corar com violeta de cristal por 60 segundos;
3. Lavar com esguicho de água destilada;
4. Cubrir com Iodo de Gram ou Lugol por 60 segundos;
5. Lavar com esguicho de água destilada;
6. Descorar com álcool a 95%, ou acetona, 10-20 segundos;
7. Lavar com esguicho de água destilada;
8. Corar com safranina por 60 segundos
9. Lavar com água destilada, secar e observar ao microscópio.

Procedimento: Colete amostras para colocá-las no microscópio. Faça a propagação com uma vara de madeira. Deixe secar em temperatura ambiente e conserte-os usando um isqueiro. Fixar a amostra com metanol por um minuto ou aquecer (inflamar aproximadamente três vezes). Adicione o azul violeta (cristal de genciana violeta ou violeta) e aguarde um minuto. Enxágüe com água não diretamente na amostra Adicione lugol e aguarde aproximadamente um minuto. Adicione álcool acetona e aguarde de 5 a 30 segundos, dependendo da concentração do reagente (parte crítica da coloração). (o grama - descolora, o grama + não) Enxágüe com água. Contraste a coloração adicionando safranina ou fucsina básica e espere um minuto. Este corante deixará bactérias gram-avermelhadas-avermelhadas. Lave levemente com água.