trabalho de tecnologia

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CRIAÇÃO DA FACULDADES METROPOLITANAS UNIDAS LIBERDADE
BIOMEDICINA
Kellen Fernandes Costa Corchog RA: 4731287 Leandra Vitória Ruechel Santos Malaquias RA:7517515 
Luana Aparecida Barrionuevo dos Santos Sarrecchia RA:1682265
Marcelly Soares Rosal RA: 1477370
Rosimary Souza Gomes RA: 1680079 Viviane Silvestre da Silva Cavalcante RA: 8275830
Extração de DNA
Monografia/Dissertação/Tese
São Paulo
13 de outubro de 2021
Kellen Fernandes Costa Corchog RA: 4731287 Leandra Vitória Ruechel Santos Malaquias RA:7517515
Luana Aparecida Barrionuevo dos Santos Sarrecchia RA:1682265
 Marcelly Soares Rosal RA: 1477370
Rosimary Souza Gomes RA: 1680079 Viviane Silvestre da Silva Cavalcante RA: 8275830
Extração de DNA
Trabalho de conclusão de curso apresentado como requisito parcial para a obtenção do título de Bararel em Biomedicina pela Criação da Faculdades Metropolitanas Unidas FMU, Câmpus Liberdade
Orientador: 
Coorientador: Charllote
São Paulo
13 de outubro de 2021
Dedico este projeto à minha família e amigos que sempre estiveram presentes direta ou indiretamente em todos os momentos de minha formação.
Agradecimentos
Agradeço a todos que participaram deste evento e confiaram no sucesso do projeto.
O único lugar onde o sucesso vem antes do tra- balho é no dicionário.
Resumo
O detergente permitiu uma emulsificação, ou seja, este penetra na 
estrutura das membranas e separa as grandes moléculas de fosfolipídios, provocando assim a destruição das membranas. Como consequência, o conteúdo nuclear dispersa-se na solução. 
 O sal proporcionou ao D NA um ambiente favorável, contribuindo 
com iões positivos que neutralizam a carga negativa do DNA, assim 
estabilizando-o. Adicionalmente, as moléculas de DNA agregam -se, 
formando filamentos espessos e compridos, de constituição gelatinosa e cor 
esbranquiçada. 
 O álcool etílico foi utilizado a temperaturas baixas porque desta 
forma o DNA não se dissolve nele. Como Resultado, o DNA precipitou - se e separou-se da solução, tornado assim possível a sua visualização e recolha. 
 O álcool torna- se o fluido s obre nadante porque é menos denso 
que a água, ficando assim a flutuar sobre esta. Já o DNA flutua na superfície 
do álcool pois é menos denso que a água. 
Sumário
1	INTRODUÇÃO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
1.1 Preparação da amostra . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
1.2 Características da molécula de DNA:	. . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
1.3 As aplicações dos estudos com DNA no diagnóstico e na pesquisa científica: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
2	Objetivos	. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 
3 Materiais e Métodos (quais foram os métodos aplicados? descrição
da metodologia, incluindo os materiais utilizados);	11,12
Resultados e Conclusão	13
Referências	13
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1 Introdução
Histórico do DNA:
A estrutura tridimensional da molécula de DNA - a dupla hélice - foi descoberta em 1953, por Francis Crick, James Watson e Maurice Wilkins, quando trabalhavam em Cambridge, no Reino Unido. Eles construíram modelos de cartolina e arame para entender e descrever o DNA, e o resultado foi publicado em duas páginas da revista Nature, em 25 de abril de 1953, há pouco mais de 50 anos. O texto de 900 palavras era acompanhado de um esboço simples da famosa dupla hélice e atraiu pouca atenção da comunidade científica. O estudo só ganhou destaque em 1957, quando cientistas demonstraram que o DNA se auto-replica, como os dois autores haviam previsto. O prêmio Nobel lhes foi outorgado em 1962. Sem dúvida, como em outras descobertas, tributo deve ser feito a alguns predecessores como Gregor Mendel, cujas pesquisas sobre hereditariedade ficaram esquecidas por mais de 30 anos, até serem redescobertas em 1900, assim como Charles Darwin e sua teoria da evolução de 1958.
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1.1 Preparo da amostra do fígado de Boi para extração do DNA
Realizar a paramentação necessária, lavagem das mãos e calçar as Luvas. Separar todos os equipamentos que serão utilizados e higienizar equipamentos e bancada.
Calibrar as pipetas conforme necessidade na utilização. 
Materiais: luvas, aventais, ponteira, pipetas, tubos de eppendorf, amostra do fígado de Boi, Buffer A, SDS 10, NACL.
Descrição;
1. Com o auxílio do bastão, adicionamos 10 mg do fígado de boi no micro tubo (eppendorf) e macerar a amostra até fragmentar.
1. Na amostra macerada no microtubo (eppendorf), incluimos 500ul de Buffer A e homogeneizamos por um minuto. 
1. Pipetamos 50ul de SDS 10 e incluímos na amostra, homogeneizamos por um minuto.
1. Aplicar na amostra 300ul de NACL na amostra e homogeneizar por um minuto.
Reservar e permanecer em repouso de uma ou duas horas antes da centrifugação.
(No nosso caso foi dado continuidade na semana seguinte)
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1.2 Características da molécula de DNA:
Os ácidos nucleicos, que podem ser DNA ou RNA, são constituídos por uma pen- tose, um ácido fosfórico e uma base nitrogenada. No caso do DNA, a pentose é do tipo desoxirribose e as bases nitrogenadas são adenina, citosina, guanina e timina.
1.3 As aplicações dos estudos com DNA no diagnóstico e na pesquisa científica:
Desde o descobrimento da sua estrutura química, em 1953, o DNA é uma das moléculas mais estudadas do mundo. Devido o importante papel do DNA para os seres vivos, o conhecimento sobre o sequenciamento de DNA pode ser útil em praticamente qualquer área da biologia como: estudos evolutivos e filogenéticos, busca da base genética de doenças, clonagem gênica e reprodução.
Na medicina o sequenciamento de DNA pode ser útil para identificar, diagnosticar e desenvolver tratamentos para doenças genéticas. Em pesquisas envolvendo patógenos, o sequenciamento pode levar a tratamentos para doenças contagiosas.
A biotecnologia pode utilizar as facilidades do sequenciamento para desenvolver produtos e serviços. A metagenômica aprimora estudos filogenéticos sobre o potencial biotecnológico de microrganismos antes desconhecidos, ao analisarem comunidades microbianas diretamente do ambiente natural, independentemente do isolamento e cultivo dos microrganismos.
O primeiro passo para a utilização das tecnologias atuais voltadas para a saúde humana foi o sequenciamento completo do genoma pelo Projeto Genoma Humano, realizado com muito esforço entre 1990 e 2000.
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2 Objetivos
A partir da extração do DNA, será possível verificar o aspecto do DNA, observar que o DNA pode ser encontrado em diversos tipos de células e debater e aprofundar questões científicas relacionadas à genética.
3 MATERIAIS E MÉTODOS (quais foram os métodos aplicados? descrição da metodologia, incluindo os materiais utilizados);
Método utilizado: Salting out
Materiais: luvas, aventais, ponteira, pipetas, tubos de eppendorf, centrífuga, Etanol, Etanol absoluto, tubo Falcon.
Descrição do método:
1) Centrifugar a amostra a 8.000 rpm por 5 minutos, 
2) Transferir o sobrenadante para um tubo limpo (cerca de 400 uL);
3) Adicionar o dobro do volume de Etanol Absoluto gelado à amostra (800 uL) e homogeneizar por inversão por 1 minuto;
4) Centrifugar a amostra a 8.000 rpm por 5 minutos e descartar o sobrenadante. Reservar no pellet.
5) Adicionar 500 uL de Etanol 70% ao pellet e homogeneizar até o pellet descartar.
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6) Centrifugar a amostra a 8.000 rpm por 5 minutos e descartar o sobrenadante. Secar o pellet por 20 minutos;
7) Adicionar 200uL de H2O miliq ao pellet e homogeneizar até a sua dissolução completa. 
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4 RESULTADOS E CONCLUSÃO
Nossos achados nos permitem concluir que, em qualquer dos dois métodos empregados (fenol ou sílica), a etapa de digestão enzimática foi fundamental na obtenção de DNA genômico de material fixado em formol e embebido em parafina. A otimização desta técnica de extração de DNA nos permitiu utilizar esse ácido nucléico na reação da PCR com resultados satisfatórios.A utilização desta metodologia é possível e viável de ser utilizada em laboratórios de patologia, e a opção por uma delas fica a critério do laboratório, na dependência de fatores como custo e adaptação à técnica.
5 Referências
scielo.br/j/ramb/a/kMWr3VJcPHS8dNrqNnY5PWx/?lang=pt https://blog.neoprospecta.com/o-papel-do-sequenciamento-de-dna-para-a-ciencia