RELATÓRIO AULA PRÁTICA: AVALIAÇÃO DA QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DE ÁGUA PARA CONSUMO HUMANO

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CENTRO UNIVERSITÁRIO CATÓLICA DE SANTA CATARINA
CURSO DE BIOMEDICINA
DISCIPLINA CIÊNCIA DOS MICRORGANISMOS
LUIZA PELLEGRINI
SARA VICTORIA HUDLER
RELATÓRIO AULA PRÁTICA: AVALIAÇÃO DA QUALIDADE
MICROBIOLÓGICA DE ÁGUA PARA CONSUMO HUMANO
JOINVILLE, 2021
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SUMÁRIO
1. INTRODUÇÃO x
2. OBJETIVO GERAL x
3. MATERIAIS E MÉTODOS x
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO x
5. CONCLUSÕES x
REFERÊNCIAS x
Observação: formatação de acordo com o manual de normalização de
trabalhos acadêmicos da Católica-SC
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1. INTRODUÇÃO 
A água é uma substância essencial para todos os seres vivos, está
presente no corpo humano, nos alimentos, está associada a processos
industriais, na agricultura e até mesmo em técnicas tecnológicas. O uso mais
comum da água é para o consumo humano, e para isso, a água precisa seguir
um padrão de potabilidade, ou seja, apresentar a ausência de microrganismos
patogênicos e contaminação fecal. Assim, é possível garantir uma segurança
para quem está consumindo (HELLER; PÁDUA, 2006).
Como já mencionado, a água é uma substância que está envolvida em
diferentes processos, especialmente os de ordem natural do homem e dos
animais. Diante disso, a água é um veículo de transmissão de doenças, já que
pode estar contaminada por diferentes microrganismos pelo contato com fezes
de pessoas ou animais infectados, normalmente provocado pela falta de
saneamento básico. Muitas doenças possuem como o seu principal meio de
transmissão a via fecal-oral. Dessa forma, a presença de contaminação fecal
em água para o consumo humano oferece um risco para a população local
(HELLER; PÁDUA, 2006).
A contaminação fecal pode ser identificada através de bactérias do
grupo coliforme, sendo a bactéria Escherichia coli a principal utilizada como
indicador biológico. A E. coli é uma bactéria termotolerante e fermentadora de
lactose. Além da contaminação fecal, a presença dessa bactéria indica a
possibilidade de existência de microrganismos patogênicos aos seres
humanos. Assim, diversos testes microbiológicos em amostras de água são
realizados para detectar a presença desses microrganismos (PINTO;
OLIVEIRA, 2011).
A portaria n° 2.914/2011 do Ministério da Saúde dispõe sobre o controle
microbiológico da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade.
De acordo com a portaria, as amostras de água coletadas de determinados
pontos que possuem distribuição para o consumo humano devem apresentar
contagem zero de coliformes totais e da bactéria Escherichia coli, ou seja, a
ausência desses microrganismos indica a qualidade da água própria para
consumo (BRASIL, 2011).
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 Na microbiologia existem diversas análises que podem ser realizadas
com o objetivo de identificar a presença de certos microrganismos em amostras
de água. A técnica para análise que pode ser utilizada é a do número mais
provável (NMP). Essa técnica consiste em três etapas, o teste presuntivo, o
confirmativo e o completo, apesar do completo normalmente não ser
empregado. A partir desse teste, é possível estimar o número de coliformes
totais e termotolerantes na amostra e identificar a presença de Escherichia coli
(APHA, 2018).
Sendo assim, a seguir discorremos sobre a análise microbiológica
realizada em amostra de água através do método do número mais provável e
seus respectivos resultados.
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2. OBJETIVO GERAL
Avaliar a qualidade microbiológica para consumo humano de amostra de
água coletada da Sala de Preparo dos Laboratórios de Saúde do Centro
Universitário Católica de Santa Catarina em Joinville.
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3. MATERIAIS E MÉTODOS
A fim de determinar a qualidade microbiológica de uma amostra de
água, bem como identificar a presença de Escherichia coli, foi utilizado o
método do número mais provável (NMP). A amostra de água passou pelo teste
presuntivo, pelo teste confirmativo e posteriormente pelo isolamento e
identificação da bactéria E. coli em placa com meio de cultivo. 
A primeira ação realizada foi a coleta da amostra de água. A água
coletada foi da torneira da pia da Sala de Preparo dos laboratórios de Saúde do
Centro Universitário Católica de Santa Catarina em Joinville. Primeiro foi feita a
assepsia do local, limpando com papel toalha e álcool 70% toda a torneira e ao
redor. Após isso, a torneira foi acionada e foi deixada a água corrente ligada
por 2 minutos. Após os 2 minutos, foi coletada a amostra de 100 ml em um
frasco de vidro.
O primeiro teste realizado foi o teste presuntivo, que busca verificar a
presença de bactérias do grupo coliforme. Para a realização desse teste, foram
utilizados 9 tubos com 10 ml em cada de caldo lauril triptose (triptose 20 g/L,
lactose 5 g/L, cloreto de sódio 5 g/L, lauril sulfato de sódio 0,1 g/L, fosfato
potássio dibásico 2,75 g/L e fosfato potássio monobásico 2,75 g/L), contendo
tubo Duran em todos. Dos 9 tubos utilizados, 6 possuíam concentração simples
(CL 1x) e 3 tubos com concentração dupla (CL 2x). Com auxílio de uma
micropipeta (100 - 1000 uL) e ponteiras estéreis, em 3 tubos com concentração
simples foram adicionados em cada um deles 1 ml da amostra de água
(diluição 1:10) e nos outros 3 tubos foram adicionados 0,1 ml da amostra de
água (diluição 1:100). Utilizando uma pipeta de vidro estéril de 10 ml e uma
pêra, para os 3 tubos restantes com concentração dupla, foram adicionados em
cada um deles 10 ml da água coletada (diluição 1:1).
Após esse procedimento, todos os tubos foram incubados em estufa a
35° C durante 24 a 48 horas. Após a incubação, foi realizada a leitura dos
resultados obtidos. Tal leitura foi feita observando a presença de gases no
interior dos tubos, especialmente no tubo Duran. Nos tubos em que foi
identificado a presença de gases, foram considerados positivos e os que não
apresentaram gases foram considerados negativos. Para os tubos positivos, a
análise seguiu para o teste confirmativo.
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O teste confirmativo busca confirmar a presença de coliformes totais e
termotolerantes e assim, os tubos cujo resultado no procedimento anterior foi
positivo foram repicados para tubos com caldo bile verde brilhante (bile de boi
20 g/L, lactose 10 g/L, peptona 10 g/L e verde brilhante 0,0133 g/L) e tubos
com caldo Escherichia coli (triptose 20 g/L, lactose 5 g/L, cloreto de sódio 5 g/L,
fosfato dipotássio 4 g/L, fosfato diidrogênio de potássio 1,5 g/L e sais biliares n°
3 1,5 g/L), todos com tubo Duran. Cada um dos tubos que apresentou
resultado positivo no teste presuntivo foram repicados para 1 tubo de caldo bile
verde brilhante (CBVB) e 1 tubo com caldo Escherichia coli (CEC). Nesse caso,
o meio CBVB é utilizado para verificar coliformes totais e o meio CEC para
coliformes termotolerantes, também chamados de fecais.
O repique foi realizado perto da chama do Bico de Bunsen e com o
auxílio de uma alça de platina. O primeiro passo realizado foi ressuspender os
tubos, para evitar o acúmulo apenas no fundo. Para o primeiro tubo positivo, a
alça de platina foi flambada, foi coletada uma amostra do tubo e passada para
o tubo com caldo CBVB. Posteriormente, a alça foi flambada, foi coletada uma
nova amostra e passada para o tubo com caldo CEC. Assim se seguiu para
todos os tubos positivos no teste presuntivo.
Os tubos de CBVB foram incubados em estufa a 37° C durante 24 a 48
horas e os tubos de CEC foram incubados em estufa a 44,5° C por 24 a 48
horas. Para a leitura dos resultados, o método utilizado foi o mesmo do teste
anterior. Caso houvesse formação de gases o resultado era positivo e se não
houvesse o resultado era negativo. Nesse caso, os resultados positivos dos
tubos gerou uma combinação de números para chegar ao resultado final em
NMP/100 ml e por sequência a confirmação da presença de E. coli em placa..
Para chegar no resultado final do NMP/100 ml para coliformes totais e
coliformes termotolerantes,foi realizada a combinação de números referentes
aos tubos positivos de cada diluição. Aqueles que apresentaram resultado
positivo em cada um dos testes confirmativos, sendo para coliformes totais e
coliformes termotolerantes, foram considerados para formar e combinação
numérica. A partir da combinação dos números, foi realizada a verificação do
número mais provável de acordo com tabela que expressa o valor em NMP/100
ml da Fundação Nacional de Saúde (FUNASA).
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Para os tubos de caldo EC positivos, ainda foi necessário realizar mais
um teste, com o objetivo de isolar e identificar a bactéria E. coli. Esse teste
consiste na inoculação das amostras na placa de ágar EMB (COMPOSIÇÃO).
A placa com ágar EMB foi divida em três partes e em cada uma das partes foi
inoculada a amostra de um dos tubos através da técnica de zigue-zague. A
placa foi incubada em estufa a 35° C durante 24 a 48 horas e depois foi feita a
leitura do resultado, sendo o verde metálico na placa a característica
determinante da presença de E. coli.
A partir dos resultados obtidos foi possível verificar se a amostra de
água coletada se enquadra nos parâmetros de potabilidade para consumo
humano.
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4. RESULTADOS E DISCUSSÃO
4.1 COLETA DA AMOSTRA
O primeiro cuidado a ser tomado no início e realização dessa análise é a
assepsia e os protocolos de limpeza que devem ser seguidos para a coleta da
amostra. Como os testes buscam analisar a presença de microrganismos em
uma determinada amostra de água, a não realização da limpeza ou feita de
forma incorreta pode acarretar em resultados falsos (RUFFO; HILUEY, 2014).
Com os devidos cuidados, a amostra pode seguir para análise desejada.
4.2 TESTE PRESUNTIVO
Para observar a presença de bactérias do grupo coliforme em uma
determinada amostra, é possível analisar a presença de gases em um meio de
cultivo que contém lactose (BRASIL, 2004). Portanto, o uso de tubos com o
caldo lauril triptose (CL), que possui lactose em sua composição, e a presença
de tubo Duran formam o conjunto para proporcionar o crescimento bacteriano e
identificar a formação de gases, além da incubação em temperatura ideal. 
Diante dos fatos apresentados, no teste presuntivo, foi observado que os
3 tubos com CL de concentração simples em que foram adicionados 0,1 ml
(diluição 1:100) da amostra de água em cada um deles tiveram resultado
positivo. A presença dos gases no interior dos tubos de Duran podem ser
observados na Figura 1. Os outros 6 tubos restantes apresentaram resultado
negativo, portanto, não seguiram para a próxima etapa.
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Figura 1 - Tubos de ensaio com a presença de gás nos tubos de Duran
Fonte: Autores, 2021
4.3 TESTE CONFIRMATIVO
Na próxima etapa, no teste confirmativo, o meio CBVB buscou
coliformes totais e o CEC buscou coliformes termotolerantes. O caldo BVB
possui sais biliares, que coliformes conseguem realizar a fermentação e, por
outro lado, inibem o crescimento de bactérias gram-positivas. Quando a
amostra é passada para o tubo com CEC, o tubo é incubado em temperaturas
acima do normal. Dessa forma, apenas os microrganismos que toleram
maiores temperaturas são capazes de sobreviver e se multiplicar. Assim, CBVB
e CEC auxiliam na exclusão de outros possíveis microrganismos e possibilitam
um resultado mais preciso, dentro da possibilidade fornecida por esse método
(BRASIL, 2004; BENATO; GALLO, 2007).
Em todos os 6 tubos, 3 tubos com caldo BVB e 3 tubos com caldo EC
apresentaram a formação de gases. Assim, pode-se concluir que todos tiveram
resultado positivo, os 3 tubos com caldo BVB e os 3 tubos com caldo EC.
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4.4 CONTAGEM MÉTODO NÚMERO MAIS PROVÁVEL (NMP)
A partir dos resultados obtidos, foi possível realizar a combinação dos
números de tubos positivos. A combinação obtida foi 003 para ambas as
análises, coliformes totais e coliformes termotolerantes. No quadro 1 e no
Quadro 2 há uma representação da combinação numérica formada.
Quadro 1 - Representação da Combinação Numérica para Realização
do Método do Número Mais Provável (NMP) para coliformes totais
Tubos 10 ml (diluição
1:1)
Tubos 1 ml (diluição
1:10)
Tubos 0,1 ml (diluição
1:100)
0 0 3
Fonte: Autores, 2021
Quadro 2 - Representação da Combinação Numérica para Realização
do Método do Número Mais Provável (NMP) para coliformes termotolerantes
Tubos 10 ml (diluição
1:1)
Tubos 1 ml (diluição
1:10)
Tubos 0,1 ml (diluição
1:100)
0 0 3
Fonte: Autores, 2021
A partir da combinação numérica, foi consultado o valor mais próximo
pela tabela da Fundação Nacional de Saúde (FUNASA) e o resultado final
obtido foi de 2 NMP/100 ml para coliformes totais e 2 NMP/100 ml para
coliformes termotolerantes. A tabela consultada está demonstrada na Tabela 1.
Tabela 1 - Tabela NMP para Combinação de Resultados positivos para
coliformes totais e coliformes termotolerantes. 
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Fonte: FUNASA, 2011.
O padrão de potabilidade da água para consumo humano não admite a
presença da bactéria Escherichia coli na amostra (BRASIL, 2011). Apesar dos
testes já realizados, não são testes que confirmam a presença ou ausência
dessa bactéria específica. Tal certeza só pode ser obtida através da
identificação da bactéria em placa com meio de cultivo. O ágar EMB utilizado
para este fim é um meio seletivo e quando a bactéria E. coli está presente, a
característica predominante é o verde metálico (SARDINHA, 2013).
Por fim, a presença de Escherichia Coli foi detectada na placa de ágar
EMB pela coloração verde metálico presente no meio de cultivo. Tal efeito pode
ser observado na Figura 2.
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Figura 2 - Presença de Escherichia coli na placa de ágar EMB
Fonte: Autores, 2021
5. CONCLUSÕES
A partir dos testes realizados e dos resultados obtidos, é possível
concluir que a água coletada da pia da Sala de Preparo dos Laboratórios de
Saúde do Centro Universitário Católica de Santa Catarina em Joinville não é
potável, pois não respeita os padrões de potabilidade de ausência de
coliformes. A água apresentou resultado positivo para coliformes totais,
coliformes termotolerantes, bem como apresentou a presença da bactéria
Escherichia coli. 
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REFERÊNCIAS 
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2011, p.105-114. Disponível em:
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BRASIL. Ministério da Saúde. PORTARIA Nº 2.914, DE 12 DE DEZEMBRO
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