PREPARO DE MEIO DE CULTURA E SEMEIO - MICROBIOLOGIA PRÁTICA

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MICROBIOLOGIA PRÁTICA
MICROBIOLOGIA PRÁTICA
PREPARO DE MEIO DE CULTURA E SEMEIO
MICROBIOLOGIA
· Preparo do meio e semeio
- Lembrar que o meio de cultura é o reagente do laboratório que tenta fornecer aos microrganismos para que ele cresça. É necessário que esse meio de cultura consiga abranger a maioria das exigências nutricionais que o organismo precisa.
- O meio de cultura fornece os nutrientes para que o microrganismo cresça de maneira satisfatória.
· Meio de cultura
Amostra de interesse
- Inóculo: é quando o mecanismo é colocado em um meio de cultura para crescimento.
OBS.: essa inoculação é importante pois não se sabe o que será encontrado na amostra.
Cultura:
- É o crescimento ou multiplicação dos microrganismos no meio de cultura.
OBS.: caso a amostra apresenta contaminações como bactérias e fungos, haverá um crescimento no meio de cultura.
EX.: Paciente com infecção de urina, essa infecção pode ser ocasionada com bactérias ou apenas um sintoma devido à baixa ingestão de água. Se na amostra não aparece nenhuma bactéria ou fungo, o meio de cultura não vai crescer, caracterizando um meio de cultura negativo.
· Técnicas de Semeadura
- Semear ou propagar ou disseminar
OBS.: você pega o inóculo (sua amostra de interesse) e vai espalhar/disseminar no meio de cultura. Existem formas de fazer isso, lembrando que o meio de cultura tem texturas diferentes, como: sólido, semissólido e líquido. Dependendo de como é o meio se espalha de forma diferente.
- Se você fez a cultura em Placa de Petri você pode espalhar em ziguezague - Estrias simples. Você espalha a amostra de interesse em uma única direção. A partir disso, você espera a amostra crescer, ex. 24, 48h.
- No método de Esgotamento há 3 direções de semeadura. Com a alça de platinum você inocula sua amostra em uma direção até 50% da placa. No sentido contrário, sem encostar na outra amostra, você faz outro estriamento 25%, sem pegar mais amostra. E depois outro estriamento 25%, sem pegar mais também. As duas que dividem são como uma diluição.
- No método Distensão há uma semelhança com o estriamento simples, mas ele possui duas direções, como uma malha. A placa fica mais preenchida de amostra. É um método importante para fazer antibiograma, que serve para ver a resistência de bactérias e fungos aos antibióticos. São inseridos pequenos discos de antibióticos nessa amostra, se a bactéria for resistente a um determinado antibiótico, o crescimento vai ser até abundante ao redor do disco. Já se ela for sensível haverá uma inibição do crescimento ao redor do disco do antibiótico. Quanto maio o poder de inibição maior será a eficácia do antibiótico para aquele paciente.
- Pode-se fazer meio de cultura em tubos, também. No método Picada Reta Central não se utiliza a alça de platinum com o loop na ponta, nesse caso utiliza-se a alça do tipo agulha, para facilitar a introdução no meio sólido. 
- No método Picada em Profundidade se o meio estiver inclinado, você introduz a agulha e puxa fazendo a semeadura, aproveitando a amostra.
- Se o meio de cultura for líquido pode usar o loop normalmente.
· Como preparar o meio de cultura?
- Você escolhe o ágar nutriente (pó). Na receita desse ágar, utiliza-se 1000ml para 28g de pó. Você faz a regra de 3 caso queira alterar a quantidade. Exemplo: para 100ml você precisa de 2,8g de pó.
- Leva para a balança a vidraria (Erlenmeyer) e coloque 2,8g de pó. Hidrate com água destilada. Você coloca um imã (pulga) no aquecimento da amostra, para evitar que queime ou solidifique o meio de cultura. O cozimento é até dar a consistência e aparência que você precisa. Depois que ele atinge o ponto, você veda o frasco e leva para a autoclave, aproximadamente 15 minutos a 121° para se tornar estéril. Após isso é levado para a placa. Escolha a placa de Petri, com material e tamanho adequado. Aconselha-se fazer isso perto do Bico de Busen ou dentro da cabine de fluxo. O ambiente deve ser o mais limpo possível para evitar ao máximo a contaminação da amostra. A bactéria cresce superficialmente, por isso não precisa exagerar na quantidade amostra (até a metade da placa é suficiente). Após isso, deixe a amostra solidificar (aproximadamente 30min). 
- Depois da solidificação você pode armazenar em geladeira. Lembrando que para armazenar você colocar de cabeça para baixo, evitando os precipitados de água na tampa.
- Ligue o Bico de Busen para que ele prepare a zona ao redor do Bico, esterilizando-a. 
- A mão dominante fica perto dos utensílios, e mão de apoio aparelha o suporte, para que você não tenha que atravessar a chama com os braços e, consequentemente, se queime.
- Pegue a alça de platinum e esteriliza-a em chama. Lembre-se de aguardar um pouco para não queimar a amostra quando você for introduzir. Pegue a amostra, introduz a alça e fecha a amostra. Em seguida pegue o meio e aproxima a ponta do tubo contendo o meio próximo a chama para descontaminá-la, depois disso você introduz a alça no meio de cultura, até chegar ao suporte, ao retirar você faz a semeadura lateralmente (não se esqueça de sair do raio da chama). Após isso flambe a ponta para descontaminar. Coloque a gaze para tampar e flambe a alça.
- O procedimento para a placa não é mito diferente. Flambar a ponta da alça e depois o suporte, retira para esfriar. Abre a amostra, pega e retira. Pegue a placa e não abra ela toda. Com ela semiaberta pegue a alça e incline ela, e assim vá fazendo o estriamento. Esteriliza a alça e guarde-a. Coloque para incubar.
· Fases de crescimento:
- LAG
- LOG
- ESTACIONÁRIA
- MORTE CELULAR