pop antibiograma

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PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
Emissão 
inicial 
Shinfay M. Liu Lourdes Pereira 
Ana Marina 
Campas de Faria 
 
ASSINATURA E CARIMBO 1 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
1. Introdução 
A realização do teste de sensibilidade aos antimicrobianos é uma fase crítica na rotina do 
laboratório de Microbiologia. Garantir a qualidade desse processo é de suma importância 
para a confiabilidade do resultado que guiará a equipe assistencial na interpretação e na 
possível escolha do tratamento. 
 
2. Objetivo 
Este procedimento Operacional Padrão foi elaborado pela Seção de Microbiologia e tem 
como produto final a realização de antibiograma pelo Método de Kirby-Bauer e Etest®. 
 
3. Campos de aplicação 
 Setor de Microbiologia 
 
4. Referências normativas 
 Resolução nº302, de 13 de outubro de 2005: Dispõe sobre Regulamento Técnico para 
funcionamento de Laboratórios Clínicos. 
 
5. Responsabilidade/ competência 
 Médico Patologista Clínico: orientar e avaliar o controle de qualidade dos discos de 
antibiograma. 
 Bioquímico: orientar e avaliar o controle de qualidade dos discos de antibiograma. 
 Biomédico: orientar e avaliar o controle de qualidade dos discos de antibiograma 
 Técnico em Patologia Clínica: realizar o controle de qualidade dos discos de 
antibiograma. 
 
6. Definições 
 Não se aplica. 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
Emissão 
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Shinfay M. Liu Lourdes Pereira 
Ana Marina 
Campas de Faria 
 
ASSINATURA E CARIMBO 2 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
 
7. Conteúdo do padrão 
7.1 Recursos necessários 
 Placas de ágar Mueller Hinton 
 Placas de ágar Mueller Hinton com 5% de sangue de carneiro 
 Salina estéril a 0,45% 
 Caldo de soja tríptica (TSB) 
 Capela de fluxo laminar 
 Estufa bacteriológica, a temperatura de 35 ± 2°C 
 Colorímetro com escala de turbidez de 0,5 de McFarland 
 Swab estéril com ponta de algodão ou rayon 
 Disco de papel filtro impregnado com antimicrobiano na concentração padronizada e 
fita Etest® com gradiente de antibiótico 
 Jarra de microaerofilia para bactérias de crescimento lento 
 Pinça anatômica estéril 
 Régua com graduação em milímetros 
 Tubos de ensaio (Khan) 12x75 mm estéreis 
 
 7.2 Principais passos 
A. Mnemônico(s): não se aplicam. 
B. Sinonímia: Teste de sensibilidade a antimicrobianos, teste de susceptibilidade a 
antibióticos, difusão em disco. 
C. Princípio: método que testa a sensibilidade / resistência das bactérias isoladas em 
amostras clínicas e possibilita a escolha de uma terapêutica antimicrobiana mais 
adequada. 
 
D. Fase analítica: 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
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Shinfay M. Liu Lourdes Pereira 
Ana Marina 
Campas de Faria 
 
ASSINATURA E CARIMBO 3 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
 
1. Preparo do inoculo e seleção dos meios de cultura para o teste de sensibilidade 
i. Método de suspensão direta de colônias: 
a. Indicação: recomendado para testar organismos fastidiosos (Haemophilus 
spp. e Neisseria spp.), estafilococos (detecção de resistência a meticilina ou 
oxacilina) e estreptococos. 
b. Usar apenas crescimento em ágar com 18 a 24h de incubação, em um meio 
não seletivo, como ágar sangue; 
c. Com auxílio de um swab coletar 3 a 5 colônias isoladas, com as mesmas 
características morfológicas, e transferi-las para uma solução salina a 0,45%; 
d. Agitar até a homogeneização; 
e. Ajustar a turbidez da solução para 0,5 de McFarland utilizando o colorímetro 
do Vitek 2. Se necessário, adicionar salina quando estiver muito turva ou 
acrescentando mais colônias quando a turbidez estiver inferior à ideal. O 
ajuste correto da turbidez do inóculo é essencial para assegurar que o 
crescimento resultante seja uniforme. 
 
ii. Método do crescimento: 
a. Indicação: pode ser utilizado como alternativa para realização do 
antibiograma de Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa e 
Acinetobacter ssp. isolados em placas de ágar com mais de 24 horas de 
incubação; 
b. Com auxílio de um swab coletar 3 a 5 colônias isoladas, com as mesmas 
características morfológicas, e transferi-las para um tubo de ensaio contendo 
4-5 mL de meio TSB; 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
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ASSINATURA E CARIMBO 4 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
a. Incubar a cultura a temperatura de 35 ± 2°C, ar ambiente, até atingir ou 
ultrapassar a turbidez do padrão 0,5 da escala de McFarland à leitura no 
colorímetro do Vitek 2 (normalmente, de 2 a 6 horas); 
b. Se necessário, ajustar a turbidez da cultura em crescimento ativo no caldo 
com solução salina estéril ou caldo TSB estéril, de modo a obter a turbidez do 
padrão 0,5 da escala de McFarland. Isso resulta numa suspensão contendo 
aproximadamente de 1 a 2 x 108 UFC/mL de E. coli ATCC® 25922. 
 
2. Inoculação em placas: 
a. Mergulhar um swab estéril no inoculo; 
b. Remover o excesso de inóculo apertando e rodando firmemente o swab 
contra a parede do tubo, acima do nível do líquido; 
c. Esfregar o swab sobre toda a superfície do ágar por três vezes, girando a 
placa num ângulo de 60º após cada aplicação, finalizando com o contorno 
das bordas externas da superfície do ágar; 
d. Deixar o inóculo secar por alguns minutos (máximo de 15 min) em 
temperatura ambiente, com a tampa fechada ou com a tampa semiaberta em 
cabine de fluxo laminar. 
 
 
a. Enterobacteriaceae 
Condições para o teste 
Meio: Ágar Mueller Hinton 
Inóculo: Método de crescimento ou suspensão direta de colônias; padrão 0,5 de McFarland 
Incubação: 35º ± 2º C; ar ambiente; 16 a 18 horas 
Recomendações de CQ 
Escherichia coli ATCC 25922 
Escherichia coli ATCC 35218 (para as combinações de -lactâmicos/inibidores de -lactamase). 
 
b. Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter spp. 
Condições para o teste 
Meio: Ágar Mueller Hinton 
Inoculo: Método de crescimento ou suspensão direta de colônias; padrão 0,5 de McFarland 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
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Shinfay M. Liu Lourdes Pereira 
Ana Marina 
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ASSINATURA E CARIMBO 5 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
Incubação: 35º ± 2º C; ar ambiente; P. aeruginosa: 16 a 18 horas; Acinetobacter spp.: 20 a 24 horas 
Recomendações de CQ 
Escherichia coli ATCC 25922 
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 
Escherichia coli ATCC 35218 (para as combinações de -lactâmicos/inibidores de -lactamase) 
 
c. Staphylococcus spp. 
Condições para o teste 
Meio: Ágar Mueller Hinton 
Inoculo: Suspensão direta de colônias; padrão 0,5 de McFarland 
Incubação: 33º a 35º C; ar ambiente; 16 a 18 horas (24 h para coagulase-negativo e cefoxitina / 24 h para 
oxacilina, meticilina, nafcilina e vancomicina). 
Recomendações de CQ 
Staphylococcus aureus ATCC 25923 
Staphylococcus aureus ATCC
 
29213 (CIM) 
Escherichia coli ATCC 35218 (para ascombinações de -lactâmicos/inibidores de -lactamase) 
 
d. Enterococcus spp. 
Condições para o teste 
Meio: Ágar Mueller Hinton 
Inoculo: Método do crescimento ou suspensão direta de colônias; padrão 0,5 de McFarland 
Incubação: 35º ± 2º C; ar ambiente; 16 a 20 horas (24 horas para vancomicina) 
Recomendações de CQ 
Staphylococcus aureus ATTC 25923 
Enterococcus faecalis ATCC 29212 (método de diluição) 
 
e. Streptococcus pneumoniae e Streptococcus spp. 
Condições para o teste 
Meio: Ágar Mueller Hinton com 5% de sangue de carneiro 
Inoculo: Suspensão direta de colônias; padrão 0,5 de McFarland 
Incubação: 35º ± 2º C; 5% de CO2; 20 a 24 horas 
Recomendações de CQ 
Streptococcus pneumoniae ATTC 49619 
 
f. Outras não Enterobacteriacea 
Condições para o teste 
Meio: Ágar Mueller Hinton 
Inóculo: Suspensão direta de colônias; padrão 0,5 de McFarland 
Incubação: 35º ± 2º C; ar ambiente; 16 a 20 horas 
Recomendações de CQ 
Escherichia coli ATCC 25922 
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 
Escherichia coli ATCC 35218 (para as combinações de -lactâmicos/inibidores de -lactamase) 
 
 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
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Shinfay M. Liu Lourdes Pereira 
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ASSINATURA E CARIMBO 6 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
g. Haemophilus influenzae e Haemophilus parainfluenzae 
Condições para o teste 
Meio: Haemophilus Test Medium (HTM) ou Thayer-Martin chocolate 
Inóculo: 
Suspensão direta de colônias; padrão 0,5 de McFarland; colônias de placa de ágar chocolate 
com 20-24 horas de incubação. 
Incubação: 35º ± 2º C; 5% de CO2; 16 a 18 horas 
Recomendações de CQ 
Haemophilus influenzae ATCC49247 
Haemophilus influenzae ATCC49766 
Escherichia coli ATCC35218 (para as combinações de -lactâmicos/inibidores de -lactamase) 
 
 
7.3 Cuidados especiais 
 Uso de EPI: Luvas e jaleco. 
 Manutenção preventiva do equipamento. 
 
8. Siglas 
 EPI: Equipamento de Proteção Individual 
 CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute 
 CIM: Concentração Inibitória Mínima 
 
9. Indicadores 
 Desempenho no controle externo da qualidade (CEQ). 
 
10. Gerenciamento de riscos 
Categoria de 
risco 
Falhas potenciais 
geradoras de 
riscos 
Evento 
Ações de 
prevenção 
Ações frente ao 
evento 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
Emissão 
inicial 
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Ana Marina 
Campas de Faria 
 
ASSINATURA E CARIMBO 7 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
Assistencial Desatenção Controle de 
Qualidade 
vencido/atrasado 
da autoclave 
Conferir 
semanalmente 
planilha de registro 
de controle de 
Qualidade (CG) 
Refazer ciclos após 
CQ aprovado 
Assistencial Desatenção Validade vencida 
do meio de cultura 
e antibióticos 
Conferir a validade 
do meio antes do 
teste 
Refazer teste com 
meio de cultura 
aprovado 
Ocupacional Desatenção Incubação/ inóculo 
inadequado no 
meio de cultura 
Treinamento Refazer teste 
Assistencial Desatenção Identificação do 
teste/placa 
incorreta 
Treinamento Verificar se teste já 
liberado; 
Refazer teste 
 
11. Referências 
 KONEMAN, E. W. et al. Diagnóstico Microbiológico: texto e atlas colorido. 6ª edição, Rio 
de Janeiro: Medsi, 2008. 
 OPLUSTIL, C. P. et al. Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica. 3ª edição, 
São Paulo: Sarvier, 2010. 
 CLSI - Clinical and Laboratory Standards Institute antimicrobial. M100-S27. Performance 
Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. Twenty-Third Informational 
Supplement. January 2017 
 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
Emissão 
inicial 
Shinfay M. Liu Lourdes Pereira 
Ana Marina 
Campas de Faria 
 
ASSINATURA E CARIMBO 8 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
12. Anexos 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
Emissão 
inicial 
Shinfay M. Liu Lourdes Pereira 
Ana Marina 
Campas de Faria 
 
ASSINATURA E CARIMBO 9 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
Ácido Nalidíxico NAL 30 22-28
Amicacina AMI 30 19-26
Amoxicilina+Ac.Clav. AMC 20 10 18-24
Ampicilina AMP 10 16-22
Ampicilina+Sulbactam SBA 10 10 19-24
Aztreonam ATM 30 28-36
Cefalotina CFL 30 15-21
Cefazolina CFZ 30 21-27
Cefepima CPM 30 31-37
Cefotaxima CTX 30 29-35
Cefoxitina CFO 30 23-29
Ceftazidima CAZ 30 25-32
Ceftriaxona CRO 30 29-35
Cefuroxima CRX 30 20-26
Ciprofloxacina CIP 5 30-40
Clindamicina CLI 2 -
Cloranfenicol CLO 30 21-27
Eritromicina ERI 15 -
Ertapenem ERT 10 29-36
Gentamicina GEN 10 19-26
Imipenem IPM 10 26-32
Levofloxacina LVX 5 29-37
Linezolida LNZ 30 -
Meropenem MER 10 28-34
Minociclina MIN 30 19-25
Nitrofurantoína NIT 300 20-25
Norfloxacina NOR 10 28-35
Ofloxacina OFX 5 29-33
Oxacilina OXA 1 -
Penicilina G PEN 10 units -
Pipe+Tazobactam PPT 100/10 24-30
Quino/Dalfopristina - 15 -
Rifampicina RIF 5 8 10
Sulfa+Trimetoprim SUT 23,75/1,25 23-29
Tetraciclina TET 30 18-25
Ticarcilina+Ac.Clav. TIC 10 75 24-30
Tobramicina TOB 10 18-26
Vancomicina VAN 30 -
Anexo POP LAB MIC - 031
Antibiótico
Conc. do 
disco
Lote/ Data de validade
E.coli 
ATCC 25922
Resultado
 Controle da Qualidade dos Discos de Antibiograma
 Testar mensalmente os discos e as cepas ATCC
Ágar Mueller Hinton - Lote:______________________________ Validade___________________
Data:______________________ Responsável:______________________
Conclusão/ObservaçãoSigla 
HGIP - SERVIÇO DE PATOLOGIA CLÍNICA 
E MEDICINA LABORATORIAL (SPCML) 
SETOR DE MICROBIOLOGIA
23M
 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
Emissão 
inicial 
Shinfay M. Liu Lourdes Pereira 
Ana Marina 
Campas de Faria 
 
ASSINATURA E CARIMBO 10 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
Ácido Nalidíxico NAL 30 -
Amicacina AMI 30 18-26
Amoxicilina+Ac.Clav. AMC 20/out -
Ampicilina AMP 10 -
Ampicilina+Sulbactam SBA 10/out -
Aztreonam ATM 30 23-29
Cefalotina CFL 30 -
Cefazolina CFZ 30 -
Cefepima CPM 30 -
Cefotaxima CTX 30 24-30
Cefoxitina CFO 30 18-22
Ceftazidima CAZ 30 -
Ceftriaxona CRO 30 22-29
Cefuroxima CRX 30 17-23
Ciprofloxacina CIP 5 -
Clindamicina CLI 2 25-33
Cloranfenicol CLO 30 -
Eritromicina ERI 15 -
Ertapenem ERT 10 13-21
Gentamicina GEN 10 16-21
Imipenem IPM 10 20-28
Levofloxacina LVX 5 19-26
Linezolida LNZ 30 -
Meropenem MER 10 27-33
Minociclina MIN 30 -
Nitrofurantoína NIT 300 -
Norfloxacina NOR 10 22-29
Ofloxacina OFX 5 17-21
Oxacilina OXA 1 -
Penicilina G PEN 10 units -
Pipe+Tazobactam PPT 100/10 25-33
Quino/Dalfopristina - 15 -
Rifampicina RIF 5 -
Sulfa+Trimetoprim SUT 23,75/1,25 -
Tetraciclina TET 30 -
Ticarcilina+Ac.Clav. TIC 75/10 20-28
Tobramicina TOB 10 19-25
Vancomicina VAN 30 -
Conclusão/Observação
Data:______________________ Responsável:______________________
Anexo POP LAB MIC - 031
 Controle da Qualidade dos Discos de Antibiograma
 Testar mensalmente os discos e as cepas ATCC
Ágar Mueller Hinton- Lote:______________________________ Validade___________________
Antibiótico Sigla 
Conc. do 
disco
Lote/ Data de validade
P.aeruginosa 
ATCC 27853
Resultado
HGIP - SERVIÇO DE PATOLOGIA CLÍNICA 
E MEDICINA LABORATORIAL (SPCML) 
SETOR DE MICROBIOLOGIA
23M.1
 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL 
PADRÃO 
 
POP LAB MIC - 031 
 
 
 
 
 
 
 
 
I - CONTROLE HISTÓRICO 
 
REVISÃO DATA Nº PÁGINAS 
HISTÓRICO 
ALTERAÇÃO 
ELABORAÇÃO VERIFICAÇÃO APROVAÇÃO 
00 15/01/2018 11 
Emissão 
inicial 
Shinfay M. Liu Lourdes Pereira 
Ana Marina 
Campas de Faria 
 
ASSINATURA E CARIMBO 11 
 
TÍTULO: CONTROLE DE QUALIDADE DOS DISCOS DIFUSÃO PARA ANTIBIOGRAMA 
Ácido Nalidíxico NAL 30 -
Amicacina AMI 30 20-26
Amoxicilina+Ac.Clav. AMC 20 10 28-36
Ampicilina AMP 10 27-35
Ampicilina+Sulbacta
m
SBA 10 10 29-37
Aztreonam ATM 30 -
Cefalotina CFL 30 29-37
Cefazolina CFZ 30 29-35
Cefepima CPM 30 23-29
Cefotaxima CTX 30 25-31
Cefoxitina CFO 30 23-29
Ceftazidima CAZ 30 16-20
Ceftriaxona CRO 30 22-28
Cefuroxima CRX 30 27-35
Ciprofloxacina CIP 5 22-30
Clindamicina CLI 2 24-30
Cloranfenicol CLO 30 19-26
Eritromicina ERI 15 22-30
Ertapenem ERT 10 24-31
Gentamicina GEN 10 19-27
Imipenem IPM 10 -
Levofloxacina LVX 5 25-30
Linezolida LNZ 30 25-32
Meropenem MER 10 29-37
Minociclina MIN 30 25-30
Nitrofurantoína NIT 300 18-22
Norfloxacina NOR 10 17-28
Ofloxacina OFX 5 24-28
Oxacilina OXA 1 18-24
Penicilina G PEN 10 units 26-37
Pipe+Tazobactam PPT 100/10 27-36
Quino/Dalfopristina - 15 21-28
Rifampicina RIF 5 26-34
Sulfa+Trimetoprim SUT 23,75/1,25 24-32
Tetraciclina TET 30 24-30
Ticarcilina+Ac.Clav. TIC 10 75 29-37
Tobramicina TOB 10 19-29
Vancomicina VAN 30 17-21
Conclusão/Observação
Data:______________________ Responsável:______________________
Anexo POP LAB MIC - 031
 Controle da Qualidade dos Discos de Antibiograma
 Testar mensalmente os discos e as cepas ATCC
Ágar Mueller Hinton - Lote:______________________________ Validade___________________
Antibiótico Sigla 
Conc. do 
disco
Lote/ Data de validade
S.aureus
ATCC 25923
Resultado
HGIP - SERVIÇO DE PATOLOGIA CLÍNICA 
E MEDICINA LABORATORIAL (SPCML) 
SETOR DE MICROBIOLOGIA
23M.2