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Fundação Centro de Ciências e Educação Superior a Distância do Estado do Rio de Janeiro Centro de Educação Superior a Distância do Estado do Rio de Janeiro CINÉTICA ENZIMÁTICA Universidade Federal do Rio de Janeiro Curso: Licenciatura em Química Docente: Luiz Felipe Santoro Aluna: Suélen Pereira Carminati Matrícula: 17114070084 Disciplina: Química V Realizada dia 09/02/2019 Nova Iguaçu - RJ 1. INTRODUÇÃO A cinética enzimática trata-se do estudo do mecanismo pelo qual as enzimas se ligam aos substratos, transformando-os em produtos. Dessa forma é importante o conhecimento dos fatores que interferem diretamente na velocidade das reações enzimáticas. Tais como: temperatura, pH, presença de catalisador, concentração e superfície de contato do substrato (NOVAES, 2013). As enzimas são catalisadores biológicos altamente eficazes que aumentam as velocidades das reações. As reações catalisadas por enzimas são caracterizadas pela formação de um complexo entre o substrato e a enzima denominado complexo enzima- substrato (ES). A função das enzimas e dos outros catalisadores é diminuir a energia de ativação, DG‡, da reação, aumentando, assim, a velocidade das reações. O equilíbrio da reação não é afetado pela enzima. Uma parte significativa da energia utilizada no aumento da velocidade das reações propiciadas por enzimas provém de interações fracas como ligações de hidrogênio e interações hidrofóbicas e iônicas entre substrato e enzima. O sítio ativo das enzimas é estruturado de modo tal que algumas dessas ligações fracas ocorrem preferencialmente no estado de transição, estabilizando esse estado (LEHNINGER, 2013). Existem regiões definidas da enzima que estão comprometidas com a catálise de um substrato específico, e a forma espacial assumida pela enzima é sumariamente importante para sua correta atividade. Desse modo, fatores que alterem a configuração espacial de uma enzima são fortemente correlacionados com a atividade enzimática desta, ou seja, existem faixas de temperaturas e de pH nos quais uma determinada enzima apresenta melhor atividade e fora dos quais ela pode estar pouco ativa e até mesmo inativa. À total perda de atividade enzimática, dá-se o nome de desnaturação. Desse modo, uma enzima desnaturada não é capaz de catalisar a reação a que se destina (NOVAES, 2013) 2 2. QUESTIONÁRIO 2.1. Influência da concentração do reagente na velocidade da reação 1. Em qual dos casos, na batata exposta ao ar ou na água, a evolução da coloração foi mais rápida? Justifique. Na primeira parte do experimento, dois pedaços de batata foram submetidos a dois ambientes. O primeiro ficou exposto ao ar e o segundo ficou imerso em água. Conforme podemos observar na Fig. 1 o pedaço de batata exposto ao ar ficou mais escuro que aquele imerso em água. O escurecimento mais rápido da batata exposta ao ar deve-se ao fato de a polifenoloxidase (PFO), enzima presente na batata, ser responsável pela oxidação de compostos fenólicos em presença de oxigênio e a concentração deste na água é muito menor que no ar. O escurecimento da batata provém da ação enzimática oxidativa da polifeniloxidase em presença de oxigênio molecular nos compostos fenólicos naturais, formando quinonas. Estas, por sua vez, sofrem polimerização, formando pigmentos insolúveis de cor escura, denominados melaninas, ou reagem de modo não enzimático com aminoácidos, proteínas e 3 Figura 1: Experimento 1 - Influência da concentração do reagente na velocidade da reação outros compostos fenólicos, também formando melaninas. Conforme apresenta a reação na Fig.2. 2. Pedaços de banana e maçã escurecem quando ficam expostos ao ar. Qual a explicação para este fenômeno? A polifeniloxidase presente tanto na maçã quanto na banana é uma enzima compartimentalizada em células, ou seja, a enzima está mais exposta no caso da fruta cortada. Dessa forma, essas frutas também vão escurecer assim como ocorreu no experimento 1 com a batata cortada. 3. Alguns alimentos como o aipim, após serem descascados devem ser mantidas sob a água. Justifique o papel da água na conservação de tais alimentos. O aipim descascado é conservado quando imerso em água, pois o oxigênio é um reagente na catálise promovida pela enzima. Como a concentração de oxigênio na água é infinitamente menor do que no ar, a água mostra-se um conservante no sentido de impedir o escurecimento desse tubérculo. 4 Figura 2: Reação de oxidação enzimática de compostos fenólicos pela polifenoloxidase (PFO). 2.2. Influência da atividade enzimática na velocidade da reação 1. Em qual das experiências a reação ocorreu mais rapidamente? Justifique. A Fig. 3 apresenta 3 pedaços de batata. O primeiro (da esquerda para a direita) ficou exposto ao ar a temperatura ambiente, o segundo permaneceu por alguns minutos no freezer e depois ficou exposto ao ar. O terceiro pedaço foi cozido em água e depois exposto ao ar. Observa-se que os dois primeiros pedaços escureceram mais que o terceiro. Apesar de não estar tão evidente na figura, o pedaço de batata que passou alguns minutos no freezer escureceu mais rápido que os demais. 2. Por que na batata congelada a reação foi mais rápida? Qual o efeito do congelamento sobre a enzima? O corte exposto ao freezer teve o escurecimento mais rápido devido ao fato de a polifenoloxidase ser uma enzima citoplasmática. Assim, ao levar o corte de batata para o freezer, os cristais de gelo formados romperam as células e liberaram o conteúdo citoplasmático para o meio intersticial – que estava em contato direto com o oxigênio atmosférico. O rompimento da parede celular é resultado da menor densidade do gelo em relação à água, resultando numa expansão do volume com o resfriamento da massa de água. Dessa maneira, o maior escurecimento enzimático do corte submetido às baixas temperaturas é fruto de uma maior quantidade de enzima em contato com o oxigênio do ar. 5 Figura 3: Experimento 2 - Influência da atividade enzimática na velocidade da reação 3. Qual o efeito do cozimento sobre a ação da PFO na batata cozida? A polifeniloxidase tem sua atividade diminuída em função da desnaturação enzimática provocada pelo calor. Em temperaturas elevadas, como a de cozimento, a atividade enzimática é totalmente suprimida. Sendo assim, não houve escurecimento da batata submetida ao cozimento. 4. Qual foi o fator que interferiu na ação da PFO nesta experiência? A alta temperatura de cozimento foi o fator que interferiu na ação da enzima presente na batata. 6 2.3. Influência da presença de catalisador e inibidores na velocidade da reação 1. Em qual dos béqueres a reação ocorreu mais rapidamente? Justifique. A Fig. 4 apresenta o resultado observado no experimento 3. No béquer contendo a batata crua, observou-se liberação de gás enquanto no béquer contendo a batata cozida não houve nenhuma modificação aparente. Isso se deve ao fato de as enzimas estarem desnaturadas, ou seja, inativas no béquer onde as batatas estavam cozidas. 2. A que se deve a decomposição da água oxigenada na presença da batata-inglesa? A decomposição da água oxigenada (H2O2) é acelerada por metais, pela alcalinidade (aumento do pH), pelo incremento da temperatura, pela presença de catalisadores, dentre outros fatores. Neste caso a PFO é capaz de catalisar a decomposição do H2O2. Com o cozimento da batata, houve desnaturação e consequente inativação das enzimas. Sem as enzimas, essa reação não ocorre, pois a decomposição do H2O2 é extremamente lenta sem o uso destas. Por esse motivo, foi possível observar o desprendimento de gás no béquer contendo batata crua e não no béquer contendo batata cozida. 7 Figura 4: Experimento 3 - Influência da presença de catalisador e inibidores na velocidade da reação 3. A decomposição da água oxigenadaproduz um gás que é prontamente desprendido para o ar. Que gás é este? Escreva a equação balanceada da decomposição da água oxigenada. O gás trata-se de oxigênio (O2) conforme mostra a reação de decomposição do peróxido de hidrogênio a seguir H2O2(aq) → H2O(l) + ½ O2(g) + energia 4. Ao adicionarmos água oxigenada em um ferimento também há desprendimento de gás. Como isso ocorre? Qual o objetivo do uso da H2O2 em ferimentos? Como ela atua? Há o desprendimento do oxigênio, pois as células sanguíneas possuem a enzima catalase que também é capaz de decompor o peróxido de hidrogênio conforme a equação apresentada no item anterior. Como um corte ou um arranhão contem sangue e células danificadas, existe grande quantidade de catalase ao redor dessa região. O uso da água oxigenada é para promover a assepsia local, pois o processo de desprendimento do oxigênio instável da solução acaba eliminando grande parte das bactérias que poderiam provocar uma inflamação no ferimento. 5. Como os catalisadores interferem na velocidade das reações químicas? O catalisador é capaz de aumentar a velocidade de uma reação química, pois atua oferecendo um caminho alternativo para a reação onde a energia de ativação da reação seja menor do que a energia de ativação da reação original. À mesma temperatura, uma fração maior de moléculas reagentes pode cruzar a barreira mais baixa da trajetória catalisada e se transformar em produtos do que quando o catalisador não está presente. 6. O desprendimento de gás foi menor no béquer contendo a batata cozida. Justifique. Não foi possível observar desprendimento de gá no béquer contendo batata cozida. Com a desnaturação da enzima, não houve decomposição da água oxigenada e consequentemente não houve desprendimento de gás. 8 2.4. Influência da temperatura na velocidade da reação 1. Em qual dos procedimentos a reação ocorreu mais rapidamente? Justifique. A Fig. 5 apresenta os resultados obtidos no experimento 4. O pedaço de batata exposto ao ar teve o maior escurecimento, seguido pelo levado à estufa e o que menos escureceu foi o exposto à refrigeração. Ao pedaço refrigerado, não houve indícios de escurecimento enzimático. Já no caso do corte de batata exposto ao ambiente é facilmente observado o produto da reação enzimática. Menos visível é o aspecto do tubérculo exposto ao calor: a polifeniloxidase tem sua atividade diminuída em função da desnaturação enzimática provocada pelo calor. Em temperaturas elevadas, como a de cozimento, a enzima é desnaturada e não há atividade enzimática. 2. Por que a batata congelada escureceu menos que as demais? Justifique. A temperaturas abaixo das condições do ambiente são utilizadas para retardar as reações químicas e enzimáticas de forma que quanto menor for a temperatura, menor será a ação enzimática. 9 Figura 5: Experimento 4 - Influência da temperatura na velocidade da reação 3. Qual o efeito do congelamento sobre a ação da PFO na batata congelada? A batata congelada não escurece, pois quanto mais baixa a temperatura menor a ação da enzima PFO 4. Considerando o escurecimento de vegetais como a batata inglesa sob a ação de oxidases. Qual a maneira mais eficiente de armazenar tais vegetais? Á temperatura ambiente ou na geladeira? Justifique. De acordo com o que foi discutido no presente relatório, conclui-se que os vegetais que sofrem ação das oxidases devem ser armazenados a temperaturas mais baixas onde ação enzimática é menor. Entretanto, se o alimento não estiver descascado, não haverá escurecimento, pois a casca impede o contato da enzima com o O2. 10 3. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS [1] NELSON, DAVID L, LEHNINGER, ALBERT L. COX, MICHAEL M. Princípios de bioquímica de Lehninger. 6.ed. Nova Iorque: W.H.Freeman and Company., 2013. [2] NOVAES, F. J. M.; AGUIAR, D. L. M.; BARRETO, M. B.; AFONSO, J. C. Atividades experimentais simples para o entendimento de conceitos de cinética enzimática: Solanum tuberosum – um alternativa versátil. Química Nova na Escola, v. 35, n. 1, p. 27-33, 2013. 11