Testes diagnósticos

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Camila Mariana Castro de Oliveira 
 Medicina Nove de Julho 
 MAD 1 
 
Testes diagnósticos 
Diagnóstico complementar:
Não específico: 
➛ Laboratorial: 
 ✓ Hemograma 
 ✓ Enzimas hepáticas 
 ✓ Urina rotina 
 ✓ Proteína C reativa ou VHS – mostra um perfil 
inflamatório 
➛ Imagem: 
 ✓ Raio X, US, TC, RNM 
Específico: 
➛ Busca pelo agente etiológico 
➛ Pesquisa direta -> coloração específica 
➛ Cultura -> bactérias, fungos, vírus 
➛ Histopatológico -> processo inflamatório ou pesquisa 
direta de lesão tecidual 
➛ Molecular -> PCR tempo real – analise do genoma 
do patógeno – e quantificação do DNA (controle da 
doença) 
Testes imunológicos: 
➛ Resposta ao agente etiológico 
➛ Pesquisa de anticorpos (Ac) -> fase aguda e crônica 
(IgM e IgG) ou quantitativo (evolução) 
➛ Técnicas: 
 ✓ ELISA 
 ✓ Quimioluminescência 
 ✓ Imunofluorescência 
 ✓ Western Blot 
 ✓ Imunohistoquímica 
 ✓ Citometria de fluxo 
Sorologia: 
➛ Os anticorpos, assim como alguns antígenos, 
circulam pelos líquidos corpóreos e podem ser dosados 
e analisados de forma qualitativa e quantitativa 
➛ Anticorpos específicos podem ser utilizados para 
detectar ou identificar um antígeno de interesse 
➛ Por meio de detecção de anticorpos específicos no 
soro, é possível determinar se um indivíduo foi 
previamente exposto a um agente infeccioso 
 
A mensuração das interações Ag x Ac como propósito 
de diagnóstico é denominado sorologia 
 
ELISA: 
➛ É um dos métodos imunoenzimáticos mais utilizados 
para o diagnóstico de doenças infecciosas 
➛ Permite a detecção de anticorpos e antígenos 
específicos no plasma/soro sanguíneo 
➛ Aplicações: 
 ✓ Doenças infecciosas 
 ✓ Detectar alergias a alimentos 
 ✓ Identificação de antígenos 
 ✓ Doenças autoimunes 
 
➛ Características: 
 ✓ O teste é feito em placas de microtitulação, que 
indica e quantifica os antígenos ou anticorpos presente 
na amostra 
 ✓ A atividade enzimática é proporcional à 
concentração de Ag ou Ac da amostra 
 ✓ Produto final (cor) surge por ação da enzima que 
converte o substrato incolor em um produto colorido 
 Camila Mariana Castro de Oliveira 
 Medicina Nove de Julho 
 MAD 1 
 
Quimioluminescência: 
➛ Quantifica antígeno ou anticorpo presente em 
fluídos corporais 
➛ Método baseado na emissão de energia luminosa a 
partir de uma reação química 
➛ Automatizado: leitura é feita em luminômetro 
➛ Várias amostras e distintas moléculas podem ser 
analisadas de uma só vez 
Imunofluorescência: 
➛ É uma técnica que permite a detecção ou 
localização de antígenos em tecidos ou células a partir 
de uma marcação com anticorpos conjugados a uma 
molécula fluorescente (fluorocromos) 
➛ Aplicações: 
 ✓ Detecção 
direta de 
microrganismos 
(secreções, urina, 
cortes de tecidos) 
 ✓ Fenotipagem 
de células 
tumorais 
 ✓ Infecções 
virais 
Immunoblot ou Western blot: 
➛ Detecta proteínas ou 
anticorpos em fitas de 
nitrocelulose pelo peso 
molecular 
➛ É a técnica empregada na 
confirmação de testes positivos 
pela alta especificidade (ex: HIV) 
 ✓ No caso da HIV: gp160, 
gp120 e p24 
 
 
Diagnóstico do HIV – teste rápido: 
➛ Resultado em poucos minutos 
➛ Sangue, soro, saliva ou urina 
➛ Sensibilidade e especificidade >95% 
➛ Uso restrito: situações em que o diagnóstico é 
essencial para a conduta imediata 
➛ Regiões sem infraestrutura laboratorial ou de difícil 
acesso 
 
Imunohistoquímica: 
➛ Método que associa anticorpos com reagentes 
específicos para localizar estruturas em células e 
tecidos 
➛ O produto é analisado em microscópio em corte 
histológico 
➛ Resultado qualitativo – presença/ausência de 
determinado marcador 
➛ Muito importante em certos tipos de neoplasias 
➛ Classificação precisa de proteínas específicas 
expressas pelo tipo celular 
➛ Aplicações: 
 ✓ Proteína Ki67 – comum em neoplasias de mama 
 ✓ Muito presente nas células que estão se dividindo: 
<10% normal; 10-20% intermediário e >20% alto 
 
Imunofenotipagem – citometria de fluxo: 
➛ Células em suspensão tratadas com um fluorocromo 
➛ Células passam por um canal e intensidade de cada 
fluorocromo é mensurada 
➛ Identificação de constituintes normais -> neutrófilos, 
macrófagos, células de hemograma, etc 
➛ Identificação de células cancerosas de variados tipos 
 Camila Mariana Castro de Oliveira 
 Medicina Nove de Julho 
 MAD 1 
 
➛ Aplicação: estudos de avaliação funcional e 
diferenciação de populações (tipos) celulares; atividades 
enzimáticas; apoptose; receptores específicos; 
produção de citocinas, etc 
 
 
Técnicas de identificação morfológica: 
Coloração de Gram: 
➛ Destaca aspectos tintoriais e morfológicos 
➛ Importância prática: identificação 
➛ Divide bactérias em dois grupos: gram + e gram - 
 
Coloração de Ziehl-Neelsen: 
➛ Coloração diferencial 
➛ Diferenças químicas da parede celular: 
 ✓ Bactérias álcool-ácido resistentes (BAAR) 
 ✓ Bactérias não álcool-ácido resistentes 
 
Cultura bacteriana e fúngica: 
Meios de cultura: 
➛ São preparados especiais com finalidade de cultura e 
isolamento de microrganismos 
➛ Uma grande variedade de processo e de 
preparações nutrientes é utilizada para induzir o 
crescimento e as reproduções de microrganismos 
➛ Inespecíficos: 
 ✓ Ágar sangue: 
 - Isolamento não específico de microrganismos 
 - Verificação de hemólise causada pelos 
microrganismos, especialmente de Streptococcus sp. E 
Staphylococcus sp 
 ✓ Ágar chocolate: 
 - Isolamento não 
específico de 
microrganismos 
exigentes 
 - Sangue 
hemolisado: libera 
nutrientes 
fundamentais para o crescimento desses 
microrganismos 
 - Ex: Haemophilus sp., Neisseria sp 
Teste de susceptibilidade aos antimicrobianos 
(TSA): 
➛ Estudo in vitro da susceptibilidade bacteriana à ação 
das drogas antimicrobianas 
➛ A concentração inibitória mínima de um 
antimicrobiano (CIM) é definida como a concentração 
mais baixa do agente necessária para inibir o 
crescimento de um dado isolado microbiano 
➛ Um antibiograma é o resultado de um exame 
laboratorial para a sensibilidade de uma linhagem de 
bactéria isolada para diferentes antibióticos 
➛ Orientação da escolha da terapia antimicrobiana mais 
adequada 
➛ Importante ferramenta no monitoramento da 
evolução da resistência bacteriana