Prova Prática de Bioquímica

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Prova Prática de Bioquímica Eduarda Airoldi de Mello - Medicina - @dudairoldi
ESPECTROFOTÔMETRO: A espectrofotometria é um método que estuda a interação da luz com a 
matéria e a partir desse princípio permite a realização diversas análises. Cada composto químico 
absorve, transmite ou reflete luz ao longo de um determinado intervalo de comprimento de onda. A 
espectrofotometria pode ser utilizada identificar e quantificar substâncias químicas a partir da 
medição da absorção e transmissão de luz que passa através da amostra. Nas aulas práticas 
utilizamos a ABSORBÂNCIA que exprime a fração da energia luminosa que é absorvida por uma 
determinada espessura de um material. Ou seja, a capacidade de absorver a luz. 
 
 
•Observar se no visor do espectro já está com a absorbância selecionada, deve 
estar escrito Abs. Para selecionar a absorbância, apertar no A (número 8).
•Observar o comprimento de onda que é solicitado no protocolo, para alterá-lo 
basta selecionar λ (número 6) seguido do comprimento desejado e selecionar 
ENTRAR. 
Quando um feixe de luz monocromática atravessa a cubeta, parte da luz sofre 
refração, reflexão, absorção pelos reagentes e outras interações indesejáveis. 
Para eliminar tais interferências, deve-se zerar o aparelho com uma solução 
que é denominada “BRANCO”. O branco deve conter todos os constituintes do 
sistema, exceto a amostra a ser estudada. A cada conjunto de determinações, 
bem como após alterar o comprimento de onda, o aparelho deve ser sempre 
zerado e calibrado com o tubo que contém o branco. 
•Para calibrar o espectro com a solução branco, deve-se colocar o BRANCO e 
calibrar (apertar no Cal), no visor deve aparecer como absorbância zerada.
• Sempre observar onde está passando o feixe de luz para adicionar a 
cubeta. 
COMO O ESPECTRO FUNCIONA 
1. Uma amostra é colocada dentro do espectrofotômetro.
2. Há uma fonte de luz e um dispositivo chamado monocromador divide a 
luz em comprimentos de onda individuais. 
3. Uma fenda ajustável permite apenas um comprimento de onda 
específico através da solução de amostra.
4. O comprimento de onda da luz atinge a amostra, que está em um 
pequeno recipiente chamado de cubeta.
5. A luz passa através da amostra e é lida pelo detector. 
É muito importante não tocar na superfície óptica da cubeta. A utilização e limpeza 
corretas são a base de qualquer análise espectrofotométrica, ajudando a evitar erros 
de medição. 
• Não encostar nas faces lisas da cubeta pois pode ficar sujeira e alterar o resultado.
• Sempre passar um papel e limpar antes de usar, para garantir um resultado correto.
• Colocar o BRAND (em destaque na foto) virado para o mesmo lado; como padrão, 
no laboratório de bioquímica usamos virado para a porta de emergência ou para as 
capelas/janelas.
• O líquido deve ultrapassar a linha em destaque na imagem, não precisa ultrapassar 
muito. 
COMO USAR O ESPECTRO 
1. SELECIONAR ABSORBÂNCIA 
2. INSERIR O COMPRIMENTO DE ONDA 
3. ADICIONAR O BRANCO NA CUBETA E CALIBRAR O APARELHO (DEPOIS DE 
CALIBRAR NÃO É NECESSÁRIO APERTAR EM MAIS NADA) 
4. DEVOLVER O LÍQUIDO PARA O TUBO DE ENSAIO 
5. LAVAR A CUBETA E SECAR COM PAPEL 
6. ADICIONAR O CONTEÚDO DOS OUTROS TUBOS E ANOTAR A 
ABSORBÂNCIA, SEMPRE LAVANDO E DEVOLVENDO AO TUBO DE ENSAIO 
APÓS A LEITURA. 
PIPETAS: