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CONTROLE DE MICRORGANISMOS INTRODUÇÃO O controle de microorganismos sempre foi um grande desafio para a humanidade, a busca por técnicas que garantam formas de armazenamentos de alimentos reportam as civilizações mais antigas do mundo. Antes de Cristo os Egipicios já procuravam secar os cereais antes do armazenamento. Na época dos descobrimentos os navegadores adotavam a salga como técnica de preservação de carnes e peixes. INTRODUÇÃO O controle dos agentes patogenicos causadores de doenças que acometem humanos e animais de produção sempre foi um grande desafio para as ciências. Na agronomia o controle de microorganismos, causadores de doenças de plantas estão intriscicamente ligados ao sucesso produtivo. Com o avanço tecnolóico hoje disposmos de várias práticas que são utilizadas no controle de agentes microbianos. Estas práticas podem ser por processos químicos ou físicos, consoante a finalidade e dentro de cada prática encontramos várias técnicas que estudaremos nesta aula. O CONTROLE DE MICRORGANISMOS VISA: Prevenir a transmissão de doenças em humanos e animais; Evitar a decomposição de alimentos; Evitar a contaminação da água e do ambiente. FATORES QUE INFLUENCIAMO CONTROLE DE MICRORGANISMO Tamanho da população; Natureza da população; Concentração; Tempo de exposição; Temperatura; Condições ambientais; TERMINOLOGIAS Esterilização; Desinfecção; Antissepsia; Degerminação; Sanitização; Assepsia. MECANISMOS DE AÇÃO DE ALGUNS DOS PRINCIPAIS AGENTES ANTIMICROBIANOS DE PROCARIOTOS * Principais alvos: - Parede celular - Membrana plasmática - Processos biossintéticos: síntese de proteínas síntese de ác. nucléicos Fonte: Madigan et al., 2010 Eritromicicina (macrolídeo) Síntese Protéica (inibidores de 50S) Síntese Protéica (inibidores de 30S) ESTERILIZAÇÃO É a destruição ou remoção de todos os microrganismos num material ou objeto. DESINFECÇÃO É a redução dos microrganismos patogênicos a um número onde eles não apresentem nenhum risco de causar doença. ANTISSEPSIA É um agente químico que pode seguramente ser usado externamente em tecidos vivos para destruir microrganismos ou para inibir seu crescimento. DEGERMINAÇÃO É a remoção de microrganismos da pele por meio de remoção mecânica ou pelo uso de antissépticos. SANITIZAÇÃO É o processo que leva a redução dos microrganismos a níveis seguros de acordo com os padrões de saúde pública (99,9% das formas vegetativas). ASSEPSIA É a remoção de detritos e impurezas na pele. Os sabões e detergentes removem mecanicamente parte dos microrganismos. Tem como função prevenir a entrada de microrganismos. AGENTES FÍSICOS Calor seco Calor úmido Pasteurização Congelamento Dessecação Liofilização Radiação Pressão osmótica Filtração Defumação Apertição Branqueamento Tindalização CALOR SECO É a forma mais simples de esterilização. Ela pode ser dividida em três técnicas: Incineração ( carcaças animais) Flambagem ( instrumentos odontológicos Estufas esterilizantes( instrumentos cirúrgicos) CALOR ÚMIDO Mata os microrganismos pela coagulação das proteínas. A esterilização por calor úmido: Fervura ( água potável) Vapor de fluxo livre ( limpeza de estofados) Autoclave( esterilização) FERVURA Mata as formas vegetativas dos patógenos bacterianos, quase todos os vírus e os fungos e seus esporos (~ 10 min.).endósporos bacterianos resistem a este processo. VAPOR DE FLUXO LIVRE Equivalente a água fervente. Não mata os endosporos bacterianos e alguns vírus. Muito utilizado em limpezas de estofados carpetes e cortinas visando o controle de ácaros causadores de alergias. AUTOCLAVE Esterilização mais confiável: temperatura acima da água fervente (através do vapor sob pressão). Trinômio: tempo, temperatura, pressão. PASTEURIZAÇÃO Louis Pasteur: Descobriu um método prático de prevenir a deterioração da cerveja e vinho através de um aquecimento leve (suficiente para matar microrganismos que causavam a deterioração sem alterar o sabor do produto). PASTEURIZAÇÃO Este processo é utilizado quando: Tratamento térmicos mais elevados causam danos á qualidade do produto; Um dos objetivos é a destruição e microrganismo patogênicos; Os microrganismos sobreviventes são controlados por outros meios de conservação; Eliminam agentes competitivos, permitindo uma fervura benéfica. PASTEURIZAÇÃO TIPOS DE PASTEURIZAÇÃO Pasteurização lenta LTLT ( Low Temperature Long Time) 63°C por um tempo de 30 minutos Pasteurização rápida HTST (High Temperature and Short Time) 72°C por um tempo de 15 segundos Pasteurização muito rápida UHT (Ultra High Temperature) 130°C a 150°C de três a cinco segundos MÉTODOS DE CONSERVAÇÃO COMPLEMENTARES A PASTEURIZAÇÃO Embalamento a vácuo, refrigeração ou congelamento. RESFRIAMENTO Temperaturas entre 0° e 7° (Refrigeradores comuns) reduz a taxa metabólicas das maiorias dos micróbios impedindo sua reprodução ou a síntese de toxinas. Efeito Bacteriostático. Psicótrofos crescem em baixas temperaturas DESSECAÇÃO Técnica usado por vikings e romanos a milênios Interrupção do metabolismo dos microrganismos através da remoção da água que inibe a ação da enzimas . A resistência á desidratação varia de acordo com o microrganismo LIOFILIZAÇÃO É o método mais efetivo para conservação prolongada de culturas microbianas, a água é removida por alto vácuo em baixa temperatura. Neste processo ocorre a redução das reações químicas e possíveis alterações nas proteínas. RADIAÇÃO Radiação tem vários efeitos sobre as células, dependendo no seu comprimento de onda, intensidade e duração. Dois tipos de radiação: Radiação Ionizante Radiação Não-Ionizante RADIAÇÃO IONIZANTE São radiações de pequeno comprimento de onda e portanto de alta energia e penetrabilidade. É através da ionização da água, que forma radicais hidroxila altamente reativos. Estes radicais reagem com componentes orgânicos, especialmente o DNA (destroem as pontes de H, duplas ligações). PRESSÃO OSMÓTICA Processo que utiliza altas concentrações de sais e açucares. Altas concentrações dessas substâncias criam um ambiente hipertônico que ocasionam a saída de água microbiana. Utilizado na conservação de carnes (Sal) E conservação de frutas (Açúcar) RADIAÇÃO NÃO-IONIZANTE A radiação não-ionizante não tem poder de penetração, age apenas sobre a superfície onde os raios incidem e não atravessam tecidos, líquidos, vidros, nem matéria orgânica. A luz UV danifica o DNA das células expostas, produzindo ligações entre as timinas adjacentes nas cadeias de DNA. Estes dímeros de T = T inibem a replicação correta do DNA. FILTRAÇÃO É a passagem de um líquido ou gás através de filtros que retêm os microrganismos, este método pode ser empregada na remoção de bactérias e fungos, entretanto, passar a maioria dos vírus. DEFUMAÇÃO É a ação prolongada da fumaça a baixa temperatura, impregnando o produto lentamente com o calor e os princípios emanados da destilação da madeira e, também empregada a quente, que se traduz por um cozimento intermediário durante a operação. PROPRIEDADES DA FUMAÇA Inibe o crescimento microbiano ( aldeído fórmico); Retarda a oxidação das gorduras; Fornece aroma às carnes COMPONENTES DA FUMAÇA Ácidos fórmico, acético, butírico, caprílico, Dimetoxifenol, furfural, metanol, etanol, octanol; Acetaldeido, diacetil, acetona, diacetil, acetona, 3-4 benzopireno, etc. DEFUMAÇÃO À QUENTE O produto é defumado e cozido ao mesmo tempo. O tempo de defumação depende: • Do tipo de produto; • Da intensidade da fumaça; • Da temperatura no interior da câmara. PRODUTO TEMPO (HORAS) E T°C INTERNA DO PRODUTO Linguiças 3 a 4h, 65 – 70 ºC; Mortadela 9 a 13h, 70 - 80 ºC; Lombo 6 a 8h, 70 - 80 ºC. DEFUMAÇÃO A FRIO Temperaturano interior da câmara 40 ºC. Queijos provolone e carne cozida anteriormente. APERTIÇÃO É o aquecimento do produto já elaborado (esterilização comercial), envasados em latas, vidros, plásticos autoclaváveis e relativamente isentos de ar. BRANQUEAMENTO É um processo térmico de curto tempo de aplicação, pois funciona como um pré-tratamento, sendo o início de outros processos. É usado para inativar enzimas de frutas e verduras que sofrerão processo de congelamento e hidratação. AÇÕES DO BRANQUEAMENTO Produz a inativação de enzimas; Ajuda a limpeza do alimento; Amolece e incha os tecidos vegetais; Elimina quase a totalidade de ar e gases contidos nos tecidos vegetais; Favorece a fixação da coloração de certos pigmentos vegetais. TINDALIZAÇÃO É o aquecimento intermitente em que um recipiente fechado por alguns minutos à temperatura de 60 °C a 90ºC, isto é, neste aquecimento são eliminados os microrganismos que estão na forma vegetativa. Após o aquecimento os produtos são resfriados, neste momento os esporos que por ventura não foram destruídos, passam para a forma vegetativa, quando é feita um novo aquecimento, destruindo estes microrganismos. AGENTES QUÍMICOS Álcool O álcool é utilizado para desinfecção de superfícies e antissepsia da pele. Tem ação contra bactérias, fungos e alguns tipos de vírus. Atua na desnaturação das proteínas e solubilização de lipídios. Pode haver efeitos secundários na interferência do metabolismo e eventual lise das células. AGENTES QUÍMICOS Aldeídos Ação – Desnaturação das proteínas É usado para desinfecção de equipamentos médicos. Ex: Glutaraldeído e Formaldeído AGENTES QUÍMICOS Fenóis (ácido carbólico): primeiro agente químico usado para o controle microbiano * Joseph Lister (1865): efetivo agente antisséptico em hospitais; * solução a 5% mata células vegetativas, mas não os endósporos AGENTES QUÍMICOS Halogênios iodo, cloro, bromo * iodo e compostos relacionados: agente oxidante, combina-se com a tirosina, inativando proteínas * cloro: formação de ácido hipocloroso liberando radicais de oxigênio MATERIAIS PESADOS Ação: Desnaturação das enzimas. Os metais pesados como a prata e o mercúrio são germicidas ou anti-sépticos. O nitrato de prata pode ser usado para prevenir as infecções oculares gonocócicas; o mercurocromo desinfeta a pele e as mucosas; o sulfato de cobre é um algicida Compostos de mercúrio: acetato fenil mercúrio, oxicloreto etoxi etil mercúrio (para tratamentos de sementes), cloreto de mercúrio e etc. Cloreto de mercúrio: tem historia mais longa no uso como desinfetante. Uso limitado devido toxidade, usado em tintas para evitar mofo. METAIS PESADOS E COMPOSTOS METAIS PESADOS E COMPOSTOS Compostos de Cobre: vários fungicidas de uso generalizado em agricultura, como a calda bordalesa e sulfato de cobre este usado também no controle de algas em piscinas. METAIS PESADOS Outros exemplos: Chumbo, zinco, prata, cobre, mercúrio Combinam-se com proteínas, provocando sua inativação AGENTES OXIDANTES A propriedade comum destes agentes é a liberação de oxigênio nascente, que é extremamente reativo e oxida, entre outras substâncias o sistemas enzimáticos indispensáveis para a sobrevivência dos microorganismos Os agentes oxidantes combinam-se de forma irreversível com as proteínas atuando provavelmente pela oxidação dos grupamentos. AGENTES OXIDANTES VANTAGENS É efetivo contra grande número de bactérias Bastante efetivo contra esporos Relativamente barato AGENTES QUÍMICOS AGENTES DE SUPERFÍCIE: tem grande utilidade nas desinfecções e anti- sepsias. Ação: alteram a permeabilidade da membrana, inibem a respiração e a glicólise de formas vegetativas das bactérias, tendo também ação sobre fungos, vírus e esporos bacterianos. ANTIBIÓTICOS Definição: Agentes antimicrobianos produzidos por microrganismos (bactérias e fungos) exibindo função de inibir ou matar outros microrganismos. Ganhadores do Premio Nobel em Fisiologia e Medicina de 1945 “Descoberta da Penicilina e seus efeitos curativos em várias doenças infeciosas" Sir Alexander Fleming Ernst B. Chain Sir Howard Florey CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS ANTIBIÓTICOS Amplo ou pequeno espectro de ação; Rápida absorção e eliminação; Preço e disponibilidade; Sensibilidade do MO ao agente antibacteriano; Reação do hospedeiro ao antibiótico. MECANISMO DE AÇÃO O modo de ação depende do antibiótico em questão A penicilina inibe a síntese da parede celular bacteriana, O cloranfenicol inibe a síntese de proteínas MECANISMO DE AÇÃO A rifampicina inibe fortemente a RNA polimerase bacteriana, impedindo a transcrição; A estreptomicina, produzida pelo microrganismo do solo Streptomyces griseus inibe a síntese de proteínas. Como a estreptomicina age genericamente, inibindo a síntese de proteínas, ela é um antibiótico de largo espectro, pois atinge várias espécies de microrganismos. CONSERVANTES TRADICIONAIS Açúcar: Bactéria que entram neste ambiente de alta concentração de açúcar morre rapidamente por desidratação. Sal – Cloreto de sódio: O principio de conservação pelo sal é basicamente o mesmo que com o açúcar. CONSERVANTES TRADICIONAIS ÁCIDO ACÉTICO Como conservante ele é pouco eficaz, sendo eficiente apenas contra alguns mofos. Deve-se utilizar algum outro tratamento conjunto para estabilizar o produto, como por exemplo, pasteurização, ou a combinação do ácido acético com outros conservantes. OUTROS CONSERVANTES Presente em alguns vegetais, e fabricado quimicamente para uso como conservante alimentício. Possui a vantagem tecnológica de ser ativo em meios pouco ácidos e não ter praticamente sabor. Seu principal inconveniente é o preço alto em relação aos outros conservantes. Perdem em parte quando submetidos à ebulição. São muito eficazes contra fungos e mofos, mas tem pouco resultado contra bactérias. OUTROS CONSERVANTES Sorbato é utilizado: • Bebidas • Derivados de carne • Queijos • Azeitonas em conservas • Doces de leite com frutas • Manteiga, etc OUTROS CONSERVANTES Os sorbatos são os menos tóxicos de todos os conservantes; Autorizado no mundo todo; No metabolismo se comporta como os demais ácidos graxos, é absorvido e utilizado como fonte de energia. OUTROS CONSERVANTES NITRITOS E NITRATOS Conservação da carne evitando a alteração e melhorando a cor; O uso de nitratos e nitritos como aditivos apresenta inquestionavelmente certos riscos; O nitrito (2g podem causar a morte de uma pessoa); Capaz de se ligar à hemoglobina no sangue. ÁCIDO BENZÓICO O ácido benzóico é ó conservante mais usado em todo o mundo; Na natureza pode ser encontrado em plantas como canela e outros vegetais O ácido benzóico é especialmente eficaz em alimentos ácidos Conservante barato, eficiente contra fungos, mofo e menos eficiente contra bactérias Inconvenientes é que sabor adstringente ÁCIDO BENZÓICO Podem ser utilizados em bebidas, sucos para uso industrial, alguns produtos lácteos, em alguns vegetais em conserva. Inconvenientes é que sabor adstringente Podem ser utilizados em bebidas, sucos para uso industrial, alguns produtos lácteos, em alguns vegetais em conserva. Não tem efeito acumulativo nem é mutagênico ou carcinogênico. Ésteres do ácido para-hidroxi-benzóico Especialmente úteis contra mofos, fungos, e menos contra bactérias. São absorvidos rapidamente no intestino, eliminando-se também rapidamente na urina, sem que se acumule no organismo ÁCIDO BENZÓICO SULFITOS É um aditivo auto limitado em seu uso, no sentido que acima de certas doses altera as características gustativas do produto; É especialmente eficiente em meios ácidos, inibindo bactérias e mofos; Muito utilizados para a conservação dos sucosde uvas, molhos e vinhos, assim como para conservar sidra e vinagre. Além de sua ação contra os microorganismos os sulfitos atuam: Como antioxidante, inibindo especialmente as reações de escurecimento produzidas por certas enzimas em vegetais e crustáceos OBS: Os sulfetos não apresentam efeito teratogênico nem cancerígenos e não apresenta risco à maioria das pessoas, nas quantidades presentes nos alimentos. SULFITOS CONCLUSÃO Apesar da vasta gama de processos de controle de microorganismos existentes atualmente é extremamente importante que se tenha conhecimentos técnicos e científicos sobre estes agentes e os malefícios que eles podem causar e consoante a natureza das necessidades realizar a escolha do procedimento de controle de modo que os resultados sejam satisfatórios para o homem e que estes resultados não gerem impactos sociais e ambientais. REFERÊNCIAS Microbiologia, Fundamentos e Perspectiva; BLACK, Jacquelyn G.; 4.ed; Editora. Guanabara Koogan S.A; RJ 2002. Microbiologia; TORTORA, Gerard J. et. al.; 08.ed.; Editora Artmed, Porto Alegre, 2005.
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