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Atividade prática Microbiologia Enf 2 e 3 Fases

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Atividade prática Microbiologia – Enfª 2 e 3 Fases
 1)A coloração de Gram diferencia as bactérias pelas propriedades químicas e físicas de suas paredes celulares. As bactérias Gram-positivas têm uma camada espessa de peptideoglicano na parede celular que retém a coloração primária (cristal violeta). As bactérias Gram-negativas têm uma camada mais fina de peptideoglicano que permite que o cristal violeta seja removido com a adição de etanol. Com base na sua aprendizagem prática no laboratório virtual, assine a alternativa que responda corretamente qual etapa deve ser realizada antes da adição do etanol. 
a) Após a coloração com cristal violeta, a próxima etapa é a adição de lugol com a função de se ligar ao cristal violeta, aumentando sua afinidade pela parede celular e formando um complexo insolúvel (CV-I) JUSTIFICATIVA: O lugol age como mordente e agente de aprisionamento, para reter o corante na parede celular bacteriana por meio da formação de um complexo formado entre cristal violeta e iodo.
 b) A adição do lugol após a primeira coloração é importante para formar um complexo insolúvel (CV-I) e aprisioná-lo na parede celular de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. No entanto, apenas as bactérias Gram-positivas permanecem com a coloração roxa/violeta;
 c) Logo após a coloração com cristal violeta, utiliza-se o álcool. O álcool age diluindo a membrana lipídica externa de bactérias Gram-negativas, permitindo que a coloração roxa/violeta seja perdida e que apenas as Gram-positivas apresentem essa cor. 
2)Você foi responsável por analisar, por meio da metodologia de Gram, duas amostras recebidas no laboratório. Logo após a realização dos procedimentos, você observou as seguintes imagens: De acordo com seu conhecimento adquirido por meio do laboratório virtual, marque a alternativa que representa o seu diagnóstico preliminar desse teste. 
a) A primeira imagem representa, com certeza, a presença de S. aureus, uma vez que ela é Grampositiva e está corretamente corada em roxo/violeta por meio do cristal violeta JUSTIFICATIVA: Após as quatro etapas da coloração de Gram, o diagnóstico preliminar obtido é de que a cor roxa/violeta representa o grupo de bactérias Gram-positivas, e a cor vermelha/rosa, Gram-negativas
b) A imagem corada em roxo/violeta representa a presença de bactérias Gram-positivas na amostra analisada. Por sua vez, a imagem corada em vermelho/rosa representa a presença fiel da bactéria E. coli, pertencente ao grupo das bactérias Gram-negativas; 
 c) As amostras recebidas em laboratório passaram por quatro etapas – coloração primária, adição de lugol, descoloração com álcool e contracoloração – até se chegar à obtenção dessas imagens. A cor roxa/violeta representa a presença de bactérias Gram-positivas na amostra, enquanto a cor vermelha/rosa representa a presença de bactérias Gram-negativas. 
3)Antes de utilizar os reagentes para a metodologia de Gram com a finalidade de corar as bactérias, há a necessidade de primeiro fixar a amostra por meio do calor. Esse procedimento é realizado passando a lâmina por cima da chama azul em um bico de Bunsen algumas vezes. No laboratório virtual você realizou esse procedimento. Mas, afinal, por que você faz isso? 
a) Para que ocorra alteração na morfologia bacteriana; 
b) Para que a bactéria reaja à coloração com mais facilidade; 
c) Para que as bactérias não sejam eliminadas durante as etapas de coloração JUSTIFICATIVA: Caso as bactérias não sejam fixadas por meio do esfregaço em lâmina, quando ocorrer a adição do corante cristal violeta, do lugol, do álcool e da safranina e retirada dos excessos, não haverá mais amostras na lâmina.
 4)A coloração de Gram apresenta diversas etapas, que se iniciam com o esfregaço. Após a amostra estar fixada na lâmina, iniciam-se as etapas de coloração primária, adição de lugol, descoloração e contracoloração. Todo o procedimento é finalizado com a visualização da lâmina com o auxílio de um microscópio óptico. No experimento realizado no laboratório virtual, você percorreu todas as etapas. Levando em consideração o seu conhecimento prático e teórico adquirido, qual etapa é crucial na coloração de Gram? 
a) O esfregaço bacteriano; JUSTIFICATIVA: O esfregaço é a primeira etapa; se nãofor realizado de forma correta, não terá como realizar as demais etapas e obter um diagnóstico preliminar correto
b) A adição do lugol; 
c) A coloração primária com cristal violeta. 
5)Cada reagente utilizado na coloração de Gram apresenta uma função definida. O cristal violeta age como um corante primário, corando todas as bactérias. O iodo (presente no lugol) age formando um complexo com o cristal violeta, prendendo-o no interior das bactérias. O álcool age diluindo a membrana lipídica de bactérias Gram-negativas, liberando o cristal violeta para fora delas. A contracoloração com safranina age corando as bactérias Gram-negativas de vermelho/rosa. Após a realização desse procedimento experimental no laboratório virtual, qual a função do mordente na reação de Gram? 
a) Fixar o corante primário (cristal violeta) na parede celular de bactérias Gram-positivas e Gramnegativas; JUSTIFICATIVA: O lugol age como um agente mordente eaprisionador. Isso ocorre com a formação de um complexo insolúvel entre iodo e cristal violeta, ficando retido na parede celular das bactérias.
 b) Fixar o contracorante safranina nas bactérias Gram-negativas;
 c) O agente mordente é o álcool, o qual promove a remoção do corante primário de bactérias Gram-negativas pela diluição da membrana lipídica externa. Porsua vez, não promove a remoção do corante primário de bactérias Gram-positivas. 
6) Qual é o objetivo da coloração de Gram? 
A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e classificação inicial das bactérias. Afinal, esse método de coloração permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, uma vez que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua estrutura
7) Porque é necessário a etapa do álcool-acetona na coloração de Gram?
O álcool-acetona extrai os lipídeos, aumentando a porosidade/permeabilidade da parede celular das bactérias Gram-negativas. O complexo cristal violeta-iodo (CVI) pode ser retirado e as bactérias Gram-negativas são descoradas
 8) Porque devemos utilizar o óleo de imersão para a visualização das colônias?
O óleo de imersão é um recurso geralmente utilizado com a objetiva de maior aumento, sua função é atuar como uma interface entre a lâmina e a lente frontal da objetiva, melhorando a qualidade da imagem visualizada.
 9) Após observar o esfregaço bacteriano no microscópio óptico utilizando o aumento 100X. Esquematize através de um desenho, as estruturas observadas na imagem visualizada.
É O DESENHO QUE FIZEMOS EM AULA;

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