Exercícios avaliativos diagnóstico molecular

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Curso: Biomedicina Disciplina: Biotecnologia 
Turno: Noite Professor(a): Letícia da C. Braga 
Nomes: Anna 
Carolina, Fabienne 
Michelline, Kamila 
Soares, Marcela 
Xavier, Tamara 
Fernandes e Thais 
Amanda 
 
 
 
 
Questão 01- Leia o texto abaixo e responda as questões seguintes. (0,5) 
 
A hemofilia A é a mais comum desordem hereditária recessiva, que afeta um em cada cinco mil 
nascimentos do sexo masculino em todo o mundo. Pessoas com deficiência com hemofilia A 
apresentam baixa atividade do Fator VIII de coagulação do sangue, assim a formação da coagulação é 
interrompida antes da produção do coágulo e, por essa razão, os sangramentos demoram muito mais 
tempo para serem controlados. Na maior parte dos indivíduos afetados com hemofilia A nenhuma 
mutação comum é facilmente identificável. Contudo, Dubey e colaboradores (2010) descrevem que esta 
limitação foi ultrapassada pela utilização de marcadores de DNA polimórfico aplicados ao diagnóstico 
genético da doença. Após a amplificação de uma região polimórfica de 608 pb de comprimento, a 
digestão com HindIII produz diferentes tamanhos de fragmentos. Em condições homozigóticas (+ / +) 
foram obtidas três bandas de 427, 100 e 81 pb e na outra condição homozigótica alélica negativo (- / -) 
foram obtidas duas bandas de 427 e 181 pb. 
J Nat Sci Biol Med. 2010 Jul-Dec; 1(1): 25–28. 
 
a) Qual o tipo de marcador utilizado na identificação da hemofilia A neste caso? R: Marcadores de 
DNA polimórfico, DArT. 
 
 
b) Qual a técnica usada pelos autores para o diagnóstico desta doença. R: Após a amplificação de 
uma região polimórfica de 608 pb de comprimento, a digestão com HindIII produz diferentes 
tamanhos de fragmentos. 
 
 
c) Esquematize nas linhas abaixo os alelos: selvagem e mutantes identificados pela técnica, 
indicado os sítios de restrição e o tamanho dos fragmentos de DNA gerados para cada um dos 
alelos. 
 
 
608 pb 
 
(+) Em condições homozigóticas (+ / +) foram obtidas três bandas de 427, 100 e 81 pb. 
 
 (-) condição homozigótica alélica negativo (- / -) foram obtidas duas bandas de 427 e 181 pb. 
 
 
d) Faça o esquema do resultado esperado considerando um indivíduo homozigoto para a mutação 
de ponto que causa a hemofilia A e de um indivíduo heterozigoto. R: 
 
 
Questão 02- O que é polimorfismo genético? (0,1) R: O polimorfismo genético são variações na sequência de DNA 
que podem criar ou destruir sítios de reconhecimento de enzimas de restrição e parecem estar associados a apenas 
uma base. A frequência de alelos heterozigotos para o polimorfismo genético ocorre em mais de 2% da população. 
 
 
Questão 03- Identifique o tipo de marcador molecular apresentado por suas características descritas abaixo: (0,1) 
a) É o Marcador mais abundante no genoma: SNPs 
b) Corresponde a uma sequência curta de 1 a 9 pares de bases repetidas em tandem: Microssatélites (SSR –
 Simple Sequence Repeat) 
c) Apresenta baixa reprodutibilidade e não permite distinguir heterozigotos: PCR 
d) Seu exame é feito por meio da diferença no tamanho de fragmentos de restrição em um seguimento de 
DNA específico: RFLP 
 
Questão 04 - Cite duas vantagens dos marcadores genéticos-moleculares sobre os marcadores morfológicos 
(isoenzimas)? (0,1) R: Analisar simultaneamente várias regiões do genoma e alta reprodutibilidade. 
pb 
 
700 
 
 
600 
 
 
 
 
400 
 
 
427 
 
250 
 
200 
 
 
181 
 
 
100 
 
 
81 
(+/+) 
(-/-) 
 
Devido ao alto valor informativo, esses marcadores permitem acessar diferenças genéticas entre indivíduos, 
populações e espécies. 
 
 
 
Questão 05 - Correlacione cada uma das seguintes trocas de sequências ou efeitos fenotípicos com os possíveis 
métodos de análise que poderiam ser usados para identificá-los. Escolha o melhor método para identificar cada 
uma das mutações: (0,2) 
(1) Troca de G>A no éxon 2 do gene PAX3 que resulta na substituição da valina 60 por uma metionina no 
mesmo produto gênico. C 
(2) Deleção de 3 pb no éxon 6 do gene BRCA1. D 
(3) Substituição dos nucleotídeos A>T que troca o códon da arginina 214 (AGA) pelo códon finalizador (TGA) 
no éxon 7 do gene MITF. A 
(4) Troca C>A em um sítio de splicing na extremidade do éxon 4 do gene PAH , que codifica a fenilalanina 
hidroxilase hepática. B 
(5) Deleção de um nucleotídeo no éxon 5 do gene HYP, em um menino com hipofosfatemia (condição 
dominante ligada ao X), o que gera um sítio de restrição para enzima AvaII. E 
 
(a) Amplicação por PCR, verificar a presença/ausência do produto. 
(b) Amplificação por PCR, seguida de RFLP. 
(c) Amplificação por PCR, seguida de sequenciamento. 
(d) Amplificação por PCR verificar o tamanho do produto. 
(e) Amplificação por PCR, seguida de transferência de DNA e hibridização por oligonucleotídeo alelo-
específico. 
 
 
QUESTÃO EXTRA - ENADE 2008 - Leia o texto a seguir e assinale a alternativa correta. Em seguida, justifique sua 
resposta. 
Há sete anos, em uma cidade da região rural do sul do país, foi registrado o desaparecimento de uma criança de 
dois anos de idade que brincava no quintal de sua casa. Durante as investigações, foram encontrados vestígios 
biológicos no local do desaparecimento, que foram coletados e submetidos a análises de biologia forense, que 
revelaram a presença de sangue humano contendo vários tipos celulares, como hemácias, neutrófilos e linfócitos, 
além de contaminação com células animais de outra espécie. Além desses exames, foram realizados estudos de 
vínculo genético entre as amostras de sangue humano encontradas no local do desaparecimento e as dos pais 
biológicos da criança desaparecida. Recentemente, foi encontrada uma criança de nove anos de idade que 
apresenta um sinal na pele muito semelhante ao da criança desaparecida. Foram colhidas amostras de sangue e 
realizadas análises comparativas com o material obtido sete anos atrás, que confirmaram tratar-se da mesma 
pessoa. 
 
Considere que, para realizar as análises descritas no texto, estivessem disponíveis no laboratório de biologia forense 
as técnicas de PCR (reação em cadeia da polimerase), eletroforese e sequenciamento automático de DNA, indicadas 
 
para analisar marcadores genéticos dos tipos SNPs (polimorfismo de nucleotídeo único) do DNA mitocondrial, STR 
(repetições curtas em série) nucleares e SNPs nucleares. Acerca desse assunto, assinale (V) para as alternativas 
verdadeiras e (F) para as falsas, justificando suas respostas. (0,2) 
A) Caso a amostra contenha apenas hemácias, a análise de marcadores genéticos SNPs do DNA mitocondrial 
não poderá ser utilizada. V 
 
 
B) Para que se possa usar a técnica de PCR, é necessário acrescentar ao sistema microrganismos que 
secretem a enzima DNA polimerase. F 
 
 
C) Para a obtenção de um perfil genético individual, é necessária a análise de regiões genômicas do tipo STRs 
que apresentem repetições de sequências maiores que 1.024 bases. F 
 
D) Para se realizar a PCR, deve-se, antes, separar a amostra por eletroforese e(ou) sequenciamento 
automático. F 
 
E) As técnicas mencionadas são independentes e, portanto, não podem ser combinadas entre si. F 
Justificativa: A alternativa B está incorreta, pois a enzima DNA polimerase é obtida através de micro-
organismos, mas é isolada e encontra-se disponível para compra já purificada. A alternativa C está incorreta, 
pois os STRs são porções do genoma que apresentam grande variação e são muito utilizados nos estudos de 
identificação genética, mas suas unidades de repetições de sequências atingem tamanhos que variam de 2 a 6 
pares de bases .A alternativa D é incorreta, pois tanto a eletroforese, que serve para separar fragmentos de 
DNA de tamanhos diferentes, quanto o sequenciamento, que é utilizado para definir a ordem das bases 
nitrogenadas em uma sequência específica de DNA, são técnicas de biologia molecular utilizadas após se obter 
as sequências específicas de DNA por PCR. As técnicas mencionadassão independentes, conforme afirmativa 
da alternativa E e, portanto, podem ser combinadas. Muitas vezes estas técnicas se complementam. Por 
exemplo, para analisar os resultados obtidos na PCR é necessária a utilização da eletroforese. Tanto para saber 
se a reação funcionou quanto para saber que quantidades (concentração) de DNA foram amplificadas.