PCC Biologia Molecular - Johny Johnson Ribeiro Boccuzzi RA D3990B0

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LICENCIATURA EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
PRÁTICA COMO COMPONENTE CURRICULAR (PCC)
BIOLOGIA MOLECULAR
Enzimas de Restrição
Aluno: Johny Johnson Ribeiro Boccuzzi
RA: D3990B-0
Polo Santos Rangel
2022
JOHNY JOHNSON RIBEIRO BOCCUZZI
PRÁTICA COMO COMPONENTE CURRICULAR – PCC:
Enzimas de Restrição
Trabalho apresentado à Universidade
Paulista – UNIP, referente ao curso
De graduação em Ciências Biológicas, como
Prática de Componente Curricular – PCC da disciplina
Biologia Molecular
Polo Santos Rangel
2022
1 ENZIMAS DE RESTRIÇÃO
As enzimas de restrição são endonucleases que clivam em sequências específicas do DNA. Quase todas as enzimas de restrição reconhecem sequência palindrômicas, isto é, quando uma das fitas for lida de 5’ 3’ e a outra no mesmo sentido, elas serão as mesmas. 
Exemplos:
1) A enzima EcoRV reconhece a seguinte sequência: 5’ GATATC 3’
 
 3’ CTATAG 5’
2) A enzima TaqI reconhece a seguinte sequência: 5’ TCGA 3’
 
 3’ AGCT 5’
A enzima 1 foi isolada da Escherichia coli (Eco) e a enzima 2 foi isolada de Thermus aquaticus (Taq). A sequência reconhecida pela enzima de restrição é chamada de sítio de restrição.
As enzimas de restrição são muito utilizadas em laboratórios de Biologia Molecular.
2 ATIVIDADE
A sequência abaixo foi obtida de um banco de dados que armazena sequências. Essa sequência é fita simples e está representada seguindo a convenção, ou seja, de 5’ 3’.
GCCTTCAATGGCAAGCGGTCTGGAATCCTACTTCTTGAATCGGCACGGTGTCATTACGGGCGGGGGCCAGAACAACGTCCCTGGACATCACACCTAGCCCGTGCGACGGCGGAAACCTTCGCCGGCGCAGGCTTCGACGTGACCCTCATCGCGGAACCCTCCCCCACCCCAGTGTTGGCGTGGCTGGTGCGCTCACGGCGAATGGACGTGGGCGTGCAGATCACCGCCTCGCACAATCGAATTCAGGACAACGGCTACAAGCTGTACCTGGACGGCGGCTCTCAGCTGGTCTCCCCCGCCGACCGGCAGATCGAGGAGCACATTGCCGCCCAGCCAACTGACGCGGCGAAGATCCCCCGCTCCGAGGCGAAGTCTGTAGACCTGTCCGTAGTCTCCGGCTATGTCACCGAGCTAAGTACCCTGGTGGCCACCGGCCGCCAATCCGAGCTGGCGCCGCGGCGGAAGCTGAAGATCCTCTACACCCCCATGCACGGCGTGGGCGGCAATGCCCTGGAGTGGGCCTTACGTGAATTCGGCTTCGGCAACGTGCACGCGGTGGCCTCGCAGCGCTGGCCGGACCCGACCTTCCCGACTGTGGACTTCCCCAACCCTGAGGAGCCGGGTGCCACCGACGCGCTGCTGGAAGAAGCCCGCGCCATCGATGCGGACCTGCTGATCGCCCTGGATCCGGATGCGGACC
Sabe-se que a enzima de restrição BamHI corta um DNA fita dupla do seguinte modo e no seguinte sítio (veja figura).
a) Quantos sítios de restrição existem nessa sequência? 
R: A primeira linha contém 10 sítios de restrição. Na sequência apresentada existe um desalinhamento que dificulta um pouco a localização. Não é possível se seguir com a sequência por esta não completar os pares.
b) Faça uma pesquisa sobre os tipos de cortes das enzimas de restrição. Descreva-os e classifique o corte da enzima BamHI.
R: Existem três tipos de enzimas de restrição: I, II ou III. A maioria das enzimas utilizadas hoje em dia são do tipo II, as quais possuem o modo de ação mais simples. Estas enzimas são classificadas como nucleases, e por cortarem o DNA em uma posição interna da cadeia, ao invés de iniciar a sua degradação a partir de uma das pontas, são chamadas endonucleases. BamHI é uma enzima de restrição, isolada de Bacillus amyloliquefaciens. Sua sequência de reconhecimento é (GGATCC), e origina uma extremidade coesiva.
c) O gel abaixo apresenta, na canaleta 1, um padrão de peso molecular onde as bandas representam sequências com 50bp, 80bp, 200bp e 1000pb. Suponha que o DNA acima tenha sido clivado pela enzima PvuII e represente, na canaleta 2, os fragmentos resultantes do corte. 
 1 2
R: O sitio de clivagem identificado por PvuII: 5’ CAGCTG 3’. Existe apenas um sitio de restrição na sequência acima, o que divide a fita simples em duas partes. O fragmento menor tem cerca de 280 bases nitrogenadas, portanto 140pb, ficando entre as sequencias 80 e 200pb. O fragmento maior tem em torno de 410 bases, ou seja, 205 pb, ficando um pouco depois dos 200 pb.
REFERÊNCIAS
ZAHA, Arnaldo.; FERREIRA, B., Henrique.; PASSAGLIA, M.P., Luciane. Biologia molecular básica. Porto Alegre: Grupo A, 2014. 9788582710586. Disponível em: https://integrada.minhabiblioteca.com.br/#/books/9788582710586/. Acesso em: 04 maio. 2022.