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Foi utilizado Tampão PADRÃO: Solução de Glicose 100 mg/dL. MATERIAIS NECESSÁRIOS Luvas de Procedimento! 3 tubos de ensaio! Enzima para quebrar a glicose ! Reagente Padrão (Glicose)! Amostra de Sangue Centrifugada (soro ou plasma)! Banho Maria 37 º! Pipeta de 1000 microlitos ! Pipeta de 100 microlitros! 3 Cubetas ! Espectofotometro AMOSTRAS BIOLÓGICAS SORO OU PLASMA O soro e o plasma devem ser separados até 30 minutos após a coleta para evitar a glicólise. Se armazenado sob refrigeração 2 a 8 °C, a glicose é estável por até 24 horas. PROCEDIMENTO DO TESTE Foi separado 3 tubos de ensaio, com as iniciais B (branco) , P (padrão) e T (teste) No Tubo Branco foi adicionado 1 ml de reagente GOD-PAP (enzima que quebra a glicose) No Tubo Padrão foi adicionado 1 ml de reagente GOD-PAP e 10 microlitros de gli- cose (reagente padrão) 100 mg/dL. E no Tubo de Teste adicionado 1 ml de reagente GOD-PAP e 10 microlitros do Soro ou Plasma da amostra de Sangue do Paciente. Foi homogeneizado os 3 tubos, e após homogeneizar deixar em banho maria na temperatura de 37º por 5 minutos, esse processo se chama REAÇÃO DE PONTO FINAL, realizado esse processo o lateral ficará estável por até 2 horas. O nível de água no banho-maria deve ser superior ao dos reagentes nos tubos; 2. Termostatizar o reagente Ajustar a temperatura do banho-maria para 37 °C. A temperatura deve permanecer constante durante a realização do teste. Leitura do teste Comprimento de onda: 540 nm , mas cada fornecedor da amostra fornece o núme- ro de comprimento que deve ser utilizado. Cubeta: Colocar a cubata branca no espectrofotômetro e zerar o equipamento . Colocar a cubeta padrão e anotar o valor da leitura. Colocar a cubata teste e anotar o valor da leitura! Cálculos para Dosagem da Amostra Tubo Padrão = 0,214 de absorvância Tudo Teste = 0,236 de absorvância Regra de 3 0,214 ABS ———————- 100 mg/dl 0,236 absorvância ——— x 0,236 x 100! —————— = 110,28 ! 0,214 ! Valor da concentração de glicose no paciente - 110, 28 mg/dl
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