relatorio de estagio bioquimica

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CENTRO UNIVERSITÁRIO CLARETIANO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Relatório do estágio supervisionado – Bioquímica 
 
 
 
 
Inaê Fernanda de Luccas Magalhães Lima 
8064525 
 
 
 
Biomedicina 
6º Semestre 
 
 
 
Rio Claro 
2021 
 
Introdução 
A bioquímica clínica, que consiste nas ciências mediadoras da química e da 
patologia, é responsável pelo estudo de substâncias orgânicas, como sangue e urina, 
resultados refletem como mudanças metabólicas que levam ao desenvolvimento de 
doenças. É importante estabelecer valores de referência bioquímicos em orgânicos 
porque servirão como parâmetros para avaliar as mudanças necessárias, ajudando 
assim os médicos a reduzir a incerteza e fornecer o tratamento adequado e como definir 
de prognóstico. 
A bioquímica clínica distribuições de análises de como urina, sangue, líquido 
cefalorraquidiano, sêmen, líquido pleural, sinovial, ascite, secreções gerais etc., nas 
quais os valores de analitos importantes usados para controlar e manter a homeostase 
orgânica podem ser medidos. Incluindo vários exames no campo da bioquímica clínica, 
como avaliação de proteínas, aminoácidos, enzimas, lipídios, minerais, eletrólitos e 
aspectos bioquímicos da hematologia, como ferro sérico, hormônios, marcadores 
tumorais, fluidos corporais, sistema de material hepatobiliar e outros Analitos para 
análises quantitativas e / ou qualitativas. Muitos diagnósticos só podem ser 
determinados por meio dessas análises, confirmar a causa ou selecionar o tratamento 
adequado, por isso é muito importante racionalizar os testes diagnósticos adequados. 
Na maioria das opções laboratoriais, os resultados variam de laboratório para 
laboratório, então os usuários devem saber quais são usados por cada laboratório e 
entendido como diferenças devido à idade, sexo, altura e estado fisiológico (como 
gravidez, amamentação). Adequado para pacientes específicos. Atualmente, os 
exames bioquímicos têm aparecido em todos os ramos da medicina e estão fortemente 
inseridos na relação médico-paciente. Isso se deve principalmente às extensas 
informações atualizadas sobre testes e doenças, incluindo novas tecnologias, como 
monoclonais, reação em cadeia da polimerase, citometria de fluxo e outras tecnologias 
modernas que melhoram a especificação e os recursos de diagnóstico. 
Preparo de Soluções 
A preparação e diluição de soluções é parte da rotina de qualquer 
laboratório. Independentemente do tipo de experimento ou análise que você está 
realizando, o primeiro passo é preparar os reagentes. A maioria dos laboratórios 
armazena soluções em recomendadas mais altas para facilitar ou evitar a 
contaminação. Portanto, eles são diluídos de acordo com as necessidades e 
necessidades de um determinado experimento. É importante destacar que existem 
muitas formas de expressar a concentração de uma solução, por isso a padronização 
de métricas é tão importante. A obtenção de resultados reconhecidos requer uma 
compreensão dos conceitos básicos, que são essenciais para qualquer procedimento 
de análise. 
Curva de Calibração 
A calibração é geralmente considerada como um método para estabelecer a 
precisão de um sistema de medição, ou seja, o grau de consistência entre os sistemas 
de qualidade. O resultado medido e o valor verdadeiro acordado do valor medido. Na 
verdade, a calibração é um processo de comparação dos valores de dois ou mais 
sistemas de garantia. O primeiro é o sistema de referência ou laboratório, em segundo 
lugar, por exemplo, calibre o sistema de avaliação. 
A curva de calibração corresponde à relação gráfica entre o valor de absorbância 
e a concentração de uma substância específica. Através deste gráfico, a linearidade da 
reação pode ser verificada e o coeficiente de conversão do valor de absorbância da 
concentração pode ser limitada. Use calibradores de dieta para determinar suas 
absorbâncias, quanto maior a concentração da substância, maior a absorbância. De 
acordo com a lei de Lambert Beer, a espessura do meio absorvente aumenta, a 
intensidade da luz emitida exponencialmente. 
Diluição sérica 
A diluição em sérica é basicamente uma série de diluições simples que aumentam o 
fator de diluição. A fonte de amostra para cada etapa de diluição é da diluição 
anterior. Todas as diluições da série têm o mesmo fator de diluição, onde a amostra da 
diluição anterior é usada para diluições subsequentes. Por exemplo, se eu tiver uma 
diluição de 1/2, minha diluição é 2. Todas as diluições subsequentes serão multiplicadas 
por 2. 1/2 * 2 = 1/4 * 2 = 1/8 * 2 = 1/16. O objetivo desse tipo de diluição é reduzir 
gradualmente a quantidade de soluto (amostra) em relação ao diluente 
Dosagens bioquímicas 
A bioquímica do sangue e o exame clínico são de grande importância para 
auxiliar no diagnóstico e acompanhamento do tratamento. Testes bioquímicos são 
usados para avaliar a diversidade de funções metabólicas desempenhadas por órgãos 
e tecidos animais. Esses testes fornecem resultados imediatos e satisfatórios e são 
fáceis de interpretar. Os métodos bioquímicos gerais têm como objetivo: avaliar as 
funções do fígado, rim, pâncreas e coração; Evidência as mudanças no metabolismo 
mineral, água e eletrólitos; determina as mudanças no metabolismo endócrino e 
atividade muscular (esqueleto e coração); descobri uma patologia oculta, auxilia no 
diagnóstico diferencial e avalie a gravidade e o curso da doença. 
As dosagens bioquímicas podem ser feitas com soro, algumas das quais podem ser 
feitas com plasma, urina e / ou fluidos orais. Quando usado sem plasma, o tipo 
específico de anticoagulante deve ser verificado para cada dose necessária. 
Objetivo 
O principal objetivo do estágio supervisionado é preparar o aluno para o mercado 
de trabalho, estabelecendo uma relação dinâmica entre a teoria e a prática, ajudando 
assim a complementar a aprendizagem. Ensina o estagiário a executar e interpretar 
técnicas laboratoriais, controlar a qualidade dos exames e emitir relatórios 
necessários. Além de propiciar a utilização dos conhecimentos aprendidos no curso, o 
estágio de supervisão também é uma ferramenta que permite ao aluno o contato direto 
com o mercado de trabalho, pois para tanto, passaremos pelo mesmo processo que 
vivenciamos 
Materiais e Métodos 
Preparo de Soluções 
A preparação da solução exige cuidado. Eles estão diretamente relacionados à 
solubilidade limitada da maioria das substâncias, alterações sem volume da mistura e 
mudanças na temperatura da mistura. Ao preparar soluções desconhecidas, é 
conveniente consultar tabelas contendo dados de solubilidade. Isso evita o 
inconveniente de obter uma "solução" turva ou bifásica devido à adição insuficiente de 
soluto. 
Materiais: Balança de precisão, balança analítica, proveta, pipeta, balão 
volumétrico. 
 Conhecendo a concentração e o volume da solução a ser preparada, pode-se 
calcular a quantidade química do soluto que precisa ser diluída. Converta a 
quantidade química em massa ou volume e meça a massa ou volume 
 
 Após pesar o soluto sólido no vidro do relógio, transfira-o para um becker com 
capacidade não superior ao volume necessário e acrescente água destilada por 
meio de uma barra de alimentação para facilitar a diluição e, em seguida, lave o 
vidro do relógio para arrastar todas as partículas de soluto aderidas a ele (se 
necessário, o aquecimento pode ser usado para promover a dissolução 
completa do soluto). 
 
 Tomando os cuidados devidos, transfira a solução para um balão volumétrico 
cuja capacidade corresponda ao volume da solução a ser preparada através do 
funil e vareta. 
 
 Com a ajuda do bico, o volume de solução necessário é completado, e este é 
determinado pela linha de referência do balão (menisco) (cuidado para não 
ultrapassar esta linha). 
 
 A solução deve ser sempre transferida e armazenada em frasco apropriado e 
rotulado (se necessário, nome / fórmula do soluto / concentração/ dados de 
preparação / fases R e S). 
 
Curva de Calibração 
 A curva padrão corresponde à relação gráfica entre o valor de absorbância (A) e 
o valor de concentração. De acordo com a análise do gráfico, a linearidade da reação 
pode ser verificada e o fator de conversão do valor de absorbância para concentração 
pode ser válida. Quando queremos saber a concentração da solução, encontrar a 
densidade óptica, colocamos esses dados na curva e encontrar sua concentração 
imediatamente. 
Fator de calibração: Você também pode determinar a concentração da solução 
por meio da seguinte relação: Cd = Ad X FC 
Diluição seriada 
 Exemplo: suponha que você deseja diluir uma curva padrão de 7 pontos (de uma 
amostra pura) começando em 1/2. Isso significa que teremos 7 tubos rotulados da 
seguinte maneira: 1/2, 1/2, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64 e 1/128. 
Suponha que precisa de pelo menos 100 uL. Especificado volume adicional, 
como 20 uL, para compensar erros de pipetagem. Desta forma, colocaremos 120 µL de 
diluente em cada tubo de ensaio. 
Calcule o volume transferido de um tubo para outro: O volume de transmissão = 
120 uL / (2-1) = 120 uL. Calcule o volume total de mistura: Volume total de mistura = 
120 uL + 120 uL = 240 uL 
Prepare os tubos e despeje 120 μL de diluente em cada tubo. Usar 120 μL de 
amostra e 120 μL de diluente (já no tubo) para preparar a primeira diluição, que é 
1/2. Transfira 120 μl do tubo 1 (diluição 1/2) para o segundo tubo e misture bem. Faça 
o mesmo para todos os tubos subsequentes. Quando você chegar ao último tubo, retirar 
120 uL, para não ficar com240 uL. 
Se tiver certeza de que não precisa dos 120 uL restantes na pipeta, você pode 
descartá-la. Se você precisar deles para continuar a diluição em série, por favor, 
armazene-os no tubo de ensaio rotulado. Isso é importante porque economiza tempo e 
você não precisa começar do zero. 
 
Dosagens Bioquímicas 
Colesterol liquiform 
 Através de reação de ponto final, o sistema enzimático determina o colesterol 
total em amostra de soro 
 Materiais: kit para teste, banho maria a 37ºC, espectrofotômetro, pipeta e 
cronômetro. 
 Separar três tubos de ensaio (branco, teste e padrão) 
 Adicionar 1,0ml de reagente em todos os tubos, 0,01ml do padrão 
(apenas no tubo padrão), 0,01ml da amostra no tubo teste 
 Colocar em banho maria por 10’ 
 Para determina a absorbância do teste, utilizar 500nm 
 * A cor permanece estável por até 60’ 
 Prosseguir com os cálculos: colesterol(mg/dL) = Abs do teste/ Abs do 
padrão x 200 
Lactato 
 Determina a quantidade de lactato no plasma ou líquido cefalorraquidiano, por 
meio de sistema enzimático. 
 Materiais: banho maria, espectrofotômetro, pipeta, cronometro. 
 Separar três tubos de ensaio, branco, teste, padrão 
 Adicionar 1,0ml do reagente de trabalho em todos os tubos, no branco 
acrescentar 0,01ml de água, no teste 0,01 da amostra e no padrão 0,01ml 
do padrão. 
 Colocar em banho maria por 5’, depois determinar a abs do teste em 
550nm 
 A cor é estável por 30’ 
 Prosseguir com o cálculo: lactato (mg/dL) = abs do teste/abs do padrão x 
40 
CK-NAC Liquiform 
 Em modo cinético o sistema determina de forma qualitativa a Creatina Quinase 
Total no soro ou plasma. 
 Materiais: espectrofotômetro, cubetas, pipeta, cronômetro. 
 Separar dois tubos de ensaio, amostra e calibrador 
 Adicionar 1,0ml do reagente de trabalho nos dois 
 No tubo amostra acrescentar 0,2ml do soro, transferir para cubeta e 
aguardar 2’ 
 Registra a abs inicial e após 2’ registrar novamente a abs. 
 Realizar o cálculo: 
 
 
Lipase 
 Determinação quantitativa da lipase pancreática em soro ou plasma por meio de 
sistema enzimático 
 Materiais: espectrofotômetro, cubeta, pipeta e cronômetro. 
 Se possível ajustar a temperatura do espectrofotômetro a 37ºC 
 Zerar o aparelho com água deionizada 
 Em tudo pipetar 0,70mL do reagente 1 e adicionar 0,010ml da amostra 
 Transferir para cubeta e adicionar 0,40ml do reagente 2, 
simultaneamente disparar o cronômetro 
 Medir a abs aos 90 e 180 segundos 
 Cálculo: 
 
 
Ureia UV liquiform 
 Utilizando citometria de dois pontos através da fotometria ultravioleta e possível 
determinar a ureia na urina, para soro ou plasma é utilizado o sistema enzimático. 
 Materiais: espectrofotômetro, cubeta, pipeta, cronômetro. 
 Ajustar a temperatura do fotômetro em 37ºC, e o comprimento de ondas 
em 340nm. 
 Em tubo de ensaio colocar 1,0ml do reagente de trabalho, adicionar 
0,01ml da amostra e transferir para cubeta 
 Medir abs aos 30 e 90segundos 
 Calcular: uréia mg/dl= abs do teste/ abs do padrão x 70 
Creatinina K 
 A medição da creatinina em amostras de sangue e urina é um teste para avaliar 
a função renal. A determinação da concentração de creatinina no líquido amniótico é 
um dos parâmetros laboratoriais para avaliação da maturidade fetal. 
Materiais; Fotômetro com cubeta capaz de medir com exatidão a absorbância 
em 510 nm, Pipetas para medir amostras e reagente e Cronômetro. 
 Misturar 4 volumes de NaOH (nº 1) com 1 volume de Ácido Pícrico (nº 2). 
Estável 15 dias entre 2 e 8 ºC 
 Ajustar o espectrofotômetro em 510nm 
 Adicionar em tubo 0,1 de soro diluída a 1,0ml do picrato alcalino 
 Transferir para cubeta e medir abs em 30 e 92 segundos 
 Calcular: creatinina= abs do teste/ abs do padrão x 4mg/dl 
 
Magnésio 
 
Através de reação de ponto final é possível determinar o magnésio em amostra 
de soro, urina ou líquor. 
 
Materiais: espectrofotômetro, pipeta, cronômetro 
 Separar três tubos de ensaio, branco, teste, padrão 
 Adicionar 2,0ml do reagente de uso em cada tubo, 0,02ml de amostra 
apenas no tubo teste e 0,02ml do padrão no tudo padrão 
 Aguardar 2’ e realizar leitura da abs em 505nm 
 A cor permanece estável por 30’ 
 Calcular: Magnésio mg/dl: ABS do teste/ ABS do padrão x 2 
 
Coagulação TP 
O TP avalia a via extrínseca da coagulação, muito utilizado em rotina pré-
operatória para avaliar se há inibidores das vias extrínseca ou deficiência no fator VII 
 
 Materiais: Água deionizada, tudo de ensaio, pipeta, banho Maria, cronômetro. 
 inocular o reagente de uso em banho maria a 37°C por 10’ 
 Em tubo de ensaio adicionar 100ul do plasma e incubar a 37°C por 1’ 
 Em seguida pipetar 200ul do reagente TP e disparar o cronômetro 
 Registrar o tempo de coagulação do plasma em segundos 
 
Amilase 
Por meio de método cinético fixo, é possível determinar, a amilase no sangue e 
urina. 
Materiais: espectrofotômetro, pipeta, banho Maria, cronômetro. 
 Separar dois tubos de ensaio, teste e controle 
 Adicionar 0,5 ml de substrato em cada tubo e incubar em banho Maria por 
2’ 
 Colocar 0,1ml da amostra no tubo teste, incubar novamente no banho Maria 
por exatos 7’ e 30segundos 
 Acrescentar 0,5ml do reagente de cor em cada tudo e 4,0ml de água 
destilada. 
 Aguardar 5’, determinar ABS em 660nm 
 Calcular: amilase U/dl = ABS do controle – ABS do teste/ ABS do controle x 
800 
 
Coagulação TTPa 
O objetivo da coagulação do sangue é formar um coágulo no local da lesão de 
um vaso sanguíneo. Desde o início da formação, este coágulo atua como um tampão 
para prevenir o sangramento, O coagulante deve ser limitado à lesão, ou seja, não pode 
se espalhar pela lesão Sistema circulatório. O TTPa avalia a via intrínseca da 
coagulação, portanto avalia os fatores VIII, IX, XI e XII, bem como os fatores X, V II e I 
da via comum. 
 Materiais: Tubos de ensaio, pipeta, banho maria, cronômetro, recipiente para 
descarte. 
 Incubar o cloreto de cálcio em banho maria por 10’ 
 Em um tubo pipetar 100ul do plasma e incubar por 2’ em banho maria 
 Adicionar 100ul do reagente TTPa junto ao plasma, e incubar por 3’ em 
estufa 
 Adicionar 100ul do cloreto de cálcio e disparar o cronometro, registrar o 
tempo de coagulação em segundos. 
Glicose liquiform 
Determinação enzimática do conteúdo de glicose no sangue,por cinética ou 
método de ponto final. 
Materiais: Banho maria, espectrofotômetro, pipeta, cronômetro. 
 Separar três tubos de ensaio, branco, teste e padrão 
 Pipetar 1,0ml do reagente 1 em cada tubo 
 Adicionar 0,1ml no tubo teste da amostra 
 0,01ml do padrão no tubo padrão 
 Incubar em banho maria a 37º C por 10’ 
 Medir abs no fotômetro em 505nm 
 Calcular: glicose mg/dl= abs do teste/ abs do padrão x 100 
Cálcio liquiform 
 Por meio de reação de ponto final, o sistema determina o cálcio no sangue ou 
urina. 
 Materiais: espectrofotômetro, pipeta, kit teste. 
 Separar dois tubos de ensaio, teste e padrão 
 Adicionar 1,0ml do reagente de trabalho em cada 
 0,02ml da amostra no tubo teste, e 0,02ml de padrão no tubo padrão 
 Medir abs em 570nm 
 Calcular: cálcio mg/dl= abs do teste/ abs do padrão x 10 
 
Resultados e Discussões 
Diluição seriada 
As diluições em série são amplamente utilizadas em análises clínicas e 
pesquisas científicas. Em alguns testes com resultados positivos, como VDRL, Coombs 
indireto, ASO, PCR e fator reumatoide (aglutinação de látex), diluições seriadas são 
usadas para ver qual diluição da série apresentada o último sinal de reatividade. Por 
exemplo: Meu resultado VDRL é positivo. Realizei diluições em série e nota que a última 
reação ocorrida na diluição 1/256. Esse é o resultado do exame, que chamamos de 
título da resposta. 
Colesterol Liquiform 
 Através das seguintes reações é possível determinar o colesterol total: 
 
 A concentração de colesterol na amostra é sinalizada pela intensidade da cor 
vermelha formada na reação final. 
Resultados: Inaê - 145mg/dl, Jaqueline - 156mg/dL, Lorena – 156mg/dL 
*VR: <190mg/dL com ou sem jejum 
Lactato 
 Através das seguintes reações é possível determinar o lactato. 
 
 De acordo com a intensidade de cor da reação, determina-se a concentração do 
lactato na amostra. 
Resultados: Lorena – 82,5mg/dl, Jaqueline- 56,5mg/dL, Inaê- 41,7mg/dl 
*VR: 4,5-19,8 mg/dL 
* Os resultados estão fora dos padrões, porém deve ser levado em consideração que 
as amostras já haviam sido coletadas a mais de 7 dias* 
CK-NAC Liquiform 
 Por meio das seguintes reações a creatina quinase total é determinada: 
 
Resultados: Inaê – 142 U/L, Jaqueline – 137 U/L 
*VR: M: 26-155 U/L, H: 26-189 U/L 
Lipase 
 
Resultados: Inaê – 3,73 u/l, Lorena- 3,26u/l, Jaqueline- 1,58u/l 
*VR: >18 anos 13-60u/l 
* Os resultados estão foram dos padrões de referência, contudo deve ser levado em 
consideração que as amostras já haviam sido coletadas a quase 10 dias, possivelmente 
houve mal armazenamento* 
Ureia UV liquiform 
 A urease hidrolisa a ureia produzindo amônia e dióxido de carbono. 
 
Resultados: Inaê – 27mg/dl, Jaqueline – 38mg/dl 
*VR: Adultos 15 a 45mg/dl (soro ou plasma) 
Creatinina K 
Este método é baseado na observação de que a creatinina reage muito 
rapidamente com o picrato básico, enquanto o picrato reage lentamente com o 
cromóforo. Medir a resposta nos primeiros minutos pode determinar a creatinina. A 
creatinina e outros componentes do soro reagem com a solução de picrato em meio 
alcalino para formar um complexo vermelho, que pode ser medido por fotometria. 
Resultados: Jaqueline: 0,645 mg/dl, Inaê: 0,766mg/dl 
VR: M: 0,53 a 0,995mg/dl, H: 0,70 a 1,20mg/dl 
Magnésio 
Os íons magnésio reagem com magon sulfonado em meio alcalino. As 
colorações se apresentem azul e rosa 
 
Resultados: Inaê- 2,13mg/dL, Jaqueline- 1,87mg/dL 
VR: soro- 1,58 a 2,56mg/dL 
Coagulação TP 
O coagulante TP possuí ativador do fator VII, quando o reagente é adicionado 
no plasma do paciente o mecanismo de coagulação é ativado, e espera-se que se forme 
um coágulo dentro do tempo específico 
Resultado: Jaqueline- 15 segundos 
VR: 13 a 15 segundos 
Amilase 
Por meio da comparação com o controle, se determina a amilase, após a adição 
do iodo. 
Resultados: Inaê 77 u/dL, Jaqueline 92 u/dL 
VR: 60 a 160u/dL 
Coagulação TTPa 
 
A fim de formar um coágulo de fibrina através da via de coagulação intrínseca, 
ele deve contém lipídios plaquetários (fosfolipídios) e o cálcio, os fatores de coagulação 
I, II, V, VII, VIII, IX, X, XI e XII também devem estar presentes. Tempo de formação O 
coágulo de fibrina após a adição de cloreto de cálcio é medido em segundos, o que 
representa Tempo parcial de tromboplastina. 
Resultado: Jaqueline: 30 segundos 
VR: 24 a 39 segundos 
Glicose liquiform 
O peróxido de hidrogênio formado reage com 4-aminoantipirina e fenol. Sob a 
catálise da peroxidase, uma antipirilquinonimina vermelha é formada por meio de uma 
reação de acoplamento oxidativo. Sua intensidade de cor é semelhante à da glicose na 
amostra. A concentração é proporcional 
Resultados: Inaê 17,0 mg/dl, Jaqueline 17,59 mg/dl, Lorena 15,6 mg/dl 
VR: 65 a 99 mg/dl 
*Os valores apresentaram alterações pois o soro não foi coletado no dia do teste* 
Cálcio liquiform 
 
Resultados: Inaê 5,6mg/dl, Jaqueline 5,41 mg/dl, Lorena 6,2mg/dl 
VR: 8,8 a 11,0 
 
Referencias: 
1. BISPO, Michael L., FODY, Edward P., SCHOEFF, Larry (eds.). Química Clínica: 
Princípios, Procedimentos, Correlações, 5ª edição. Manole, 2010. 
 
2. BARBOSA, Gleisa Pitareli. Química Analítica – Uma Abordagem Qualitativa e 
Quantitativa. Érica, 2014. 
 
 
3. COMPRI-NARDY, Mariane B., STELLA, Mércia Breda, OLIVEIRA, Carolina 
de. Práticas de Laboratório de Bioquímica e Biofísica. Guanabara Koogan, 2009. 
 
4. KLUG, William S., CUMMINGS, Michael R., SPENCER, Charlotte A., PALADINO, 
Michel A. Conceitos de Genética. ArtMed, 2010. 
 
 
5. Skoog, Douglas A., Donald West, F. Holler, Stanley Crouch. Fundamentos de 
Química Analítica: Tradução da 9ª edição norte-americana, 2nd edição. Cengage 
Learning Editores, 2015. 
 
6. MOTTA, Valter T. Bioquímica Clínica para o Laboratório: Princípios 
e Interpretações. 4ªed. Porto Alegre: Editora Médica Missau; São Paulo: Robe 
editorial, EDUCS – Caxias do Sul, 2003. 
 
 
7. WALLACH, Jacques. Interpretação de Exames Laboratoriais. 7ª.ed. Rio de 
Janeiro: Editora Guanabara Koogan, 2000