Biomol P1 USP farmácia

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Biologi� Molecular
↪ Armazenamento e fluxo de
informação gênica:
cápsula protege da fagocitose do sistema
imune = virulenta
→ Princípio transformante:
bactérias s/ cápsula vivas + bactérias c/
cápsula mortas = bactérias com cápsula
recuperadas
↪ lisado divido em 3:
s/ DNA = não ocorre a transformação,
responsável por expressar o gene da
cápsula.
→ Fluxo:
Dogma central
→ DNA = dupla fita de nucleotídeos, 5´→3´.
antiparalela, C-G e A-T
→ mRNA: 5´→3´, a fita debaixo do DNA é a
complementar (molde)
A–U e C–G
trincas de bases = códons
→ Proteína = tradução das trincas/códons
em aminoácidos
→ código genético = relação entre a
sequência de bases do DNA e a sequência
de aminoácidos, não é sinônimo de
genoma
→ genoma: toda informação genética, toda
a sequência.
→ quando o vírus que possui RNA como
material genético, entra na célula e já
codifica proteínas, além de poder
autorreplicar o RNA para produzir mais
RNA
→ retrovírus:
RNA → (transcriptase reversa) → DNA → RNA
→ proteína
isso permite que o vírus se incorpore ao
DNA
→ replicação: duplicação do DNA a partir
de um DNA molde, catalisada por DNA
polimerases
→ Transcrição: síntese de RNA a partir do
DNA molde, RNA polimerases
→ Tradução: síntese de proteínas a partir
do código do mRNA, ocorre nos
ribossomos, tRNA carrega aminoácidos
⚠ todos os processos precisam de energia,
que advém do metabolismo
Exercícios:
1. Em 1928, Frederick Gri�th propôs a
existência do "princípio transformante” que
tornava bactérias avirulentas em bactérias
virulentas. Descreva o experimento que foi
realizado e descreva dois experimentos
que provaram que o princípio
transformante era DNA.
Bactérias sem cápsula foram injetadas em
camundongos e esses sobreviveram.
Depois, bactérias com cápsula e os
camundongos morreram. Em outra rodada
de testes, foram inoculadas células com
cápsula, mas inativadas por calor e essas
não afetaram os camundongos. Depois,
bact. com cápsula e bact. sem cápsula
foram misturas e inoculadas, provocando a
morte do camundongo, sendo proposto o
principio transformante.
Para provar esse principio, foi feito um
lisado de bactérias com e sem cápsula e
separado em 3 tubos de ensaio. O primeiro
tubo recebeu protease, o segundo, rnase e
o terceiro, dnase. Os camundongos
infectados com o lisados dos tubos 1 e 2
morreram, já o do terceiro, não. Provando
assim que o princípio transformante na
verdade era o DNA, que induzia as células
sem cápsula a expressarem genes para
formarem cápsula e se tornarem virulentas.
2. Explique o dogma central da Biologia
molecular, em sua forma original e
revisada.
O dogma central da biologia molecular se
baseia que uma molécula de DNA sofre
autorreplicação pela ação de DNA
polimerases, depois é transcrita para uma
fita de mRNA através de RNA polimerases e
por fim, é traduzida em proteína ou
enzimas.
↪ Estrutura de Ácidos Nucleicos DNA e
RNA
- são polímeros de nucleotídeos
- 5’ - fosfato
- 3’ - OH (hidroxila)
- ligação fosfodiéster
→ nucleotídeos:
Rna possui duas hidroxilas (3’ e 2’), por isso
sofre maior efeito da hidrolise (é mais
instável)
→ bases nitrogenadas:
- purinas = adenina e guanina
- pirimidinas = citosina, uracila e
timina
⚠ Bases no DNA podem sofrer
modificações químicas fisiológicas, como
metilação
→ ‘ serve para diferenciar os carbonos da
pentose
→ nucleotídeos podem ter até 3 fosfatos
(ex.: ATP), e quando não tem fosfato é
chamado de nucleosídeo
→ Regra de Charga�:
- A/T e C/G = 1
- A + G = T + C
→ DNA =
- duas fitas antiparalelas
- bases perpendiculares ao eixo
- 10,4 bases por volta
- fosfato e açúcar voltados para o
exterior
- carga negativa por causa do fosfato
→ as ligações de hidrogênio conferem
especificidade de ligação entre as fitas
A = T (duas ligações)
G ≡ C (3 ligações)
→ interações não covalentes conferem
estabilidade a dupla-hélice:
↪ interações hidrofóbicas entre os
pares de bases adjacentes
(empilhados)
↪ interações de atração de van der
waals entre as bases
→ Formas de dupla-hélice
- A-DNA = mais larga, gira para direita
- B-DNA = intermediária, gira para
direita
- Z-DNA = estreita, gira para esquerda
→ As ligações de hidrogênio podem se
desfazer, ocorrendo a desnaturação. Pode
ocorrer por aquecimento ou mudança de
pH. É reversível, devido a especificidade
das ligações
→ DNA desnaturado absorve mais porque
as bases estão mais expostas, assim, a
absorbância aumenta com a desnaturação
= Efeito hipercrômico
- maior a porcentagem de G+C, mais
dificil de desnaturar, aumenta Tm
→ Propriedade da desnaturação é
importante para a função de estoque e
transferência da informação genética
→ RNA:
- fita simples que pode formar
estruturas complexas, e cada
estrutura diferentes tem uma função
diferente
- 5’ → 3’
- fita simples pode se dobrar para
formar alças, grampos e parear
bases na mesma cadeia (pareamento
intracadeia)
- C-G; A-U
- tipos: codificadores de proteína
(mRNA) e não codificadores (ncRNA,
tRNA, rRNA)
Exercícios:
1. A sequência abaixo representa a fita
codificadora de um segmento de DNA
(5') ATGCCGTATGCATTGCATTC (3')
a. Escreva a sequência de bases da fita
complementar do DNA fita-dupla
Exprima, em porcentagem, a
composição de bases do DNA
fita-dupla
(3’) TACGGCATACGTAACGTAAG (5’)
b. Que tipos de interações químicas
estão envolvidos nas ligações entre
os nucleotídeos e entre as cadeias
de DNA na fita dupla? Faça um
esquema
Entre os nucleotídeos estão
presentes as interações de van der
waals. Já entre as cadeias, estão
presentes interações hidrofóbicas
c. Qual seria a sequência de um RNA
transcrito a partir deste segmento
de DNA?
(5’) AUGCCGUAUGCAUUGCAUUC (3’)
2. Um ácido nucléico tem a composição de
bases abaixo. O que você pode afirmar
sobre esta molécula?
C = 24,1%
G = 18,5%
T = 24,6%
A = 32,8%
DNA de fita simples, pois a proporção de
bases não está igual
3. A figura a seguir representa
conformações de DNA em diferentes
temperaturas (I, II, III). Qual conformação
tem absorbância relativa mais alta a 260
nm? Qual segmento da molécula tem
provavelmente maior conteúdo de guanina
e citosina? O aumento do segmento A em
relação ao segmento B teria algum efeito
sobre Tm na curva de fusão?
III terá a absorbância relativa mais alta, por
estar mais desnaturada, tendo suas bases
mais expostas. Provavelmente as
extremidades, por apresentarem maior
resistência à desnaturação. Sim,
aumentaria a Tm
4. Quais os diferentes tipos de RNA que
podem ser encontrados nas células e como
eles se diferenciam quanto à estrutura,
tamanho, abundância e função?
mRNA, tRNA, rRNA
RNA estrutura abu
ndâ
ncia
função
mRNA Fita
simples
1-5% transfere a
informação
genética do
DNA aos
ribossomos
rRNA fita dupla
por
pareame
nto
interno
75% Serve como um
esqueleto das
subunidades
ribossomais
tRNA tridimens
ional em
L
10-15
%
transporta os
resíduos
de aminoácidos
até os
ribossomos
5. Qual tipo de RNA está presente no
coronavírus que se assemelha ao RNA da
célula eucariótica? Explique essa
semelhança e uma diferença existente
entre eles.
mRNA.
semelhança = mRNA gera proteínas
diferença = não há replicação do RNA
6. Analisando as estruturas 1, 2 e 3
responda:
a. Quais as diferenças entre elas? Qual
poderia ser incorporada em uma
molécula de DNA?
O ligante à pentose e o número de
hidroxilas. A 2 poderia ser
incorporada , pois possui um fosfato
na posição 5’ e uma hidroxila na
posição 3’.
b. Qual poderia ser usada na formação
de uma molécula de RNA? Por que o
RNA é mais suscetível à degradação
que o DNA?
A 3 poderia se ligar ao RNA.
O RNA é suscetível à hidrólise
alcalina porque o açúcar ribose em
RNA tem um grupo hidroxila na
posição 2 ', o que torna RNA
quimicamente instável comparado
com DNA ( DNA tem hidrogênio na
posição 2 '). DNA é estável em
condições alcalinas.
c. O ácido desoxirribonucleico (DNA) e
o ácido ribonucleico (RNA) possuem
algumas diferenças estruturais que
são importantes para a função de
cada um deles. Cite 3 diferenças
entre essas macromoléculas.
RNA DNA
Fita simples Dupla fita
ribose desoxirribose
uracila timina
↪ Compactaçãodo Material Genético
O DNA pode ser enovelado
→ topoisomerases desmancha as tensões
do super enovelamento, mudando o grau
até a forma relaxada
↪ Tipo I = quebra uma das fitas do DNA
(na ligação fosfodiester), a fita
intacta é passada através da
quebrada, formando uma religação
↪ Tipo II = quebra as duas fitas, a fita
de baixo liga-se na parte de cima,
mudando o giro. Atua na replicação
do DNA. Requer ATP. DNA girase
→ O superenovelamento é um processo
regulado que influencia a replicação, a
transcrição, a recombinação e a
compactação.
→ Inibidores de DNA girase inibem a
replicação e transcrição bacteriana →
antibióticos
→ o material genético precisa estar
compactado para estar contido na célula
ou compartimento
→ cromatina = DNA cromossomal + proteína
estrutural (histona)
↪ NAPs = proteínas associadas ao
nucleóide, ajudam o DNA a se
compactar
↪ eucromatina = menos compactada,
regiões de genes com maior
atividade
↪ heterocromatina = mais compactada
↪ nucleossomo = 8 unidades de histona
+ duas voltas de DNA (146 pares de
base) = unidade fundamental da
organização da cromatina
→ histonas = proteínas pequenas de carga
líquida positiva
→ histona H1 = histona de ligação, fica
entre os nucleossomos para conectá-los,
aumentando o grau de compactação
→ plataforma nuclear formada por
proteínas a qual a cromatina se associa
para se organizar
⚠ a cromatina é dinâmica, variando de
eucromatina para heterocromatina,
dependendo de modificações nas histonas
por modificações covalentes ou
modificações no DNA
Exercícios:
1. O núcleo de uma célula humana tem 6m
de diâmetro e a extensão total do DNA dos
seus 46 cromossomos soma 1,8 m. Como é
resolvida a discrepância entre estas duas
grandezas? Descreva detalhadamente o
modo de compactação do DNA numa
célula eucariota, considerando as
proteínas envolvidas, suas características
e o grau de compactação
conferido por elas.
Através da condensação do DNA.
O DNA é enrolado em histonas, formando
nucleossomos. Esses nucleossomos são
compactados pela histona de ligação (H1)
em uma razão de 100x, formando uma fibra
de 30 nm. Depois disso, essa fibra formará
alças ligadas a proteínas da matriz nuclear.
Depois essa cromatina é condensada em
uma razão de 1.000 a 2.000x.
2. A figura ao lado mostra o resultado de
um experimento realizado em 1973 por
Hewish e Burgoyne. Eles isolaram a enzima
DNAse, que quebra ligações fosfodiéster
no DNA e a usaram para tratar uma
amostra de DNA nu (sem proteínas) e uma
amostra de cromatina, de maneira que o
DNA não era completamente degradado
até nucleotídeos, mas era quebrado em
fragmentos de diferentes tamanhos. Eles
encontraram que, enquanto o DNA nu era
degradado de maneira aleatória,
originando fragmentos de vários tamanhos
que formavam um rastro no gel, a
cromatina originava fragmentos que eram
múltiplos de 200 bp. Explique esse
resultado. Dica: veja a animação
do DNA learning center (link no
e-disciplinas).
A cromatina originava fragmentos com
múltiplos de 100 bp devido ao enrolamento
do DNA nas histonas.
3. Além da organização estrutural, que
outras funções podem ter as proteínas que
formam a cromatina?
Organização durante a divisão celular;
controle da transcrição
4. Qual é a importância do
empacotamento do DNA?
Melhor armazenamento e transporte
5. Quais afirmativas estão corretas?
Justifique todas.
a. As quatro histonas do cerne são
proteínas relativamente pequenas
com uma alta proporção de
aminoácidos com carga positiva;
essa carga positiva auxilia na forte
ligação ao DNA, não importando sua
sequência nucleotídica. ( V )
b. Os nucleossomos ligam o DNA tão
fortemente que eles não podem
alterar a posição em que foram
inicialmente estabelecidos. ( F )
O empacotamento do DNA é
dinâmico e reversível
c. Bactérias não tem histonas,
portanto não apresentam cromatina.
( F )
Bactérias possuem cromatina devido
a proteína H-NS (histone-like
nucleoid-structuring protein)
↪ Replicação do DNA
Material genético é copiado e transferido
para a geração seguinte.
→ É semiconservativa: A fita dupla se abre e
cada fita-mãe serve de molde para uma
fita-filha
→ Nucleotídeos complementares são
introduzidos por pareamento das bases
→ sintetizadas no sentido 5’ à 3’ da fita
nascente, o molde é de 3’ a 5’
→ Síntese =
produtos = DNA com uma base a mais e
liberação de 2 grupos fosfato
Ligações do tipo ATP são quebradas,
liberando grande quantidade de energia
→ DNA polimerase = sintetiza DNA, colocam
nucleotídeos na fita nascente. Precisa de
uma OH na posição 3’ para a adição de
nucleotídeos. Ela necessita de um iniciador
(primer) e de um molde de DNA.
Sentido 5’ → 3 ‘ da fita nascente.
↪ A E. coli possui 5 DNA polimerases
diferentes
↪ III = processividade, extremamente
veloz, complexo de 9 subunidades
(cada um codificado por um gene),
atividade de polimerase (adição de
nucleotídeos)
↪ I = atividade de exonuclease (retirada
do nucleotídeo da cadeia, em
qualquer sentido)
- forquilha de replicação = região do DNA
onde há transição do DNA parental de fita
dupla para as novas fitas duplas (parental _
filha). Tendo duas forquilhas por bolha de
replicação
- bolha de replicação = região onde o DNA
parental teve as fitas separadas a partir da
origem, delimitada por duas forquilhas
- origem de replicação (ori) = sequências
específicas (sítios de ligações de proteínas)
onde o DNA se desnatura e há a entrada
da DNA polimerase, região de abertura
↪ eucariotos possuem mais de uma
origem de replicação
↪ os sítios de ligação possuem regiões
de 9bp que serão ligadas a
DnaA-ATP, que formará vários
oligômeros, gerando torções que
relaxam as regiões de 13 bp. Nessas
regiões que já está fita simples, entra
a DnaB sendo carregada pela
DnaC-ATP.
↪ DnaB tem função de helicase, anel
de 6 monômeros, quebra ligações de
hidrogênio para a ação da DNA
polimerase
→ Início da replicação:
é controlado por metilação (modificação
da adenina) do DNA na oriC
- origem hemimetilada: inativa
- Dan metilase metila as filhas, origem
metilada ativa → impede a formação
de bolhas sem que tenha iniciado a
replicação
→ elongação:
- DNA polimerases precisam de uma
extremidade 3´OH livre para
adicionar novos nucleotídeos à
cadeia → Antes da ação da DNA
polimerase, um primer (iniciador) de
RNA é adicionado pela primase
- A síntese de DNA sempre se dá no
sentido 5´- 3´ → Replicação é
contínua numa fita (fita líder) e
descontínua na outra (fita
descontínua ou atrasada, que não
possui primer, para isso, é necessário
abrir mais para a colocação do
primer)
primer = os primeiros nucleotídeos
adicionados pela primase são RNA
- fragmento de okazaki = pequeno
fragmento de DNA (com um primer
de RNA no termino 5') criado na
cadeia atrasada durante a
replicação
⚠ a replicação é bidirecional
→ Replissomo = conjunto de proteínas
envolvidas na replicação do DNA -1
- DNA-topoisomerase II = vai na frente
da forquilha desenrolando as
torções
- helicase (DnaB) = abre as fitas de
DNA
- SSb = mantém as fitas simples
- DNA girase = desfaz a tensão do
superenrolamento
- Primase (DnaG) = sintetiza o primer
de RNA
- DNA polimerase II = 9 subunidades, 3
cernes catalíticos, catalisa a ligação
fosfodiester, alta processividade, alta
velocidade, revisão de erros pela
atividade de exonucleose
→ O molde da fita descontínua dá uma
volta na DNA polimerase para entrar na
orientação correta → modelo de trombone
→ RNase H = degrada RNA em fita dupla
com DNA (primers)
→ DNA polimerase I = preenche as lacunas
dos fragmentos de Okazaki com atividade
de polimerase 5’ → 3’, retira os primers de
RNA com atividade de exonuclease 5’-->3’
- parte da frente retira os primers e a
de trás coloca bases
→ DNA ligase = devido as polimerases não
serem substrato trifosfato, é necessário o
uso dessa enzima para formar as ligações
fosfodiéster, ligando os fragmentos de
Okazaki
→ A replicação do DNA tem fidelidade =
bases não pareadas não permitem a
ligação fosfodiéster, devido a
especificidade da DNA polimerase
↪ revisão de prova erros de
incorporação podem ser corrigidos
durante a replicação pelaprópria
DNA polimerase II (um passo para
trás para remover a base errada)
→ Terminação:
sítios de terminação se ligam à proteína
Ter que impede a passagem do replissomo
↪ ao final da replicação, os
cromossomos circulares estão
concatenados (ligados em uma
cadeia) → a topoisomerase II quebra
as duas fitas do DNA para separar os
cromossomos
→ terminação nos cromossomos lineares
de eucariotos
- telômeros = sequências repetidas
nas extremidades ajudam a
estabilizar o cromossomo, impedindo
o encurtamento
- telomerase = replica o DNA nos
telômeros, usando um RNA interno
como molde. Caminha nas
repetições, sintetizando DNA
colocando repetições. Mais expressa
nas células que são renovadas
constantemente → falta de atividade
= envelhecimento por encurtamento
- A cada vez que um cromossomo
linear termina a replicação, o primer
de RNA da ponta de uma das fitas (a
que seria 3'-5') é retirado e sobra uma
região de fita simples 5'-->3'. A
telomerase aumenta essa região de
fita simples, do 5' para o 3' e assim
um novo primer pode ser colocado
na ponta dela, fechando a lacuna
Exercícios:
1. Por que a estrutura do DNA fornece um
mecanismo para a hereditariedade?
Pois carrega um código genético
responsável de transmitir os genes de
geração para geração
2. Descreva o experimento de Mesenson e
Stahl que provou que a replicação é
semi-conservativa. Use os livros e veja a
animação em
http://www.dnaftb.org/20/animation.html
Primeiro, foi realizada um cultura de células
de E. coli na presença de N15. Conforme as
bactérias iam crescendo e se
multiplicando, esse isótopo de nitrogênio ia
sendo incorporado às bases nitrogenadas
do DNA. Depois, essa cultura foi transferida
para um novo meio sem o isótopo,
contendo N14 para ser incorporado.
Foram separadas 4 amostras, uma
contendo apenas células que cresceram na
presença de N15, 2 que foram transferidas
do meio N15 para N14 e uma que apenas
cresceu em meio N14.
As células que cresceram em dois meios,
apresentou ambos os isótopos de
http://www.dnaftb.org/20/animation.html
nitrogênio na sua composição, provando
que a replicação é semiconservativa.
3. Observe a figura ao lado, que mostra
duas fitas-filha de DNA sendo sintetizadas
no sentido das setas em uma forquilha de
replicação.
a) O esquema mostrado é correto?
Justifique, levando em conta a
estrutura do DNA, as propriedades
da DNA polimerase e a existência
dos fragmentos de Okazaki.
b) Os fragmentos de Okazaki podem
ser dispensáveis? Por quê?
c) Faça um novo esquema (ou
esquemas) incorporando todas as
informações levantadas para
responder os itens a e b.
4. Num experimento, um extrato de E. coli
for incubado com uma mistura de dATP,
dTTP, dGTP e dCTP, todos marcados com
32P no grupo fosfato da posição .
a) Se qualquer dos nucleotídeos for
omitido da reação, haverá
incorporação de radioatividade no
DNA? Explique.
Sim?
b) 32P seria incorporado no DNA se
somente dTTP fosse marcado?
Explique.
Sim
c) Radioatividade seria incorporada ao
DNA se 32P estivesse nas posições
ou dos desoxirribonucleotídeos?
Explique.
d) Esquematize a formação da ligação
fosfodiéster durante a replicação a
partir do nucleotídeo trifosfato livre
mostrando qual grupo fosfato é
incorporado.
e) Por que a evolução selecionou
apenas um sentido de síntese de
DNA?
5. Como se dá o início e o término da
replicação em um cromossomo
bacteriano? E num eucariótico?
Em um cromossomo bacteriano, o término
se dá pela ligação de sítios de terminação
à proteína Ter, que impede a passagem do
replissomo. Assim, ao final da replicação,
os cromossomos circulares estão
concatenados (ligados em uma cadeia) e a
topoisomerase II quebra as duas fitas do
DNA para separar os cromossomos.
Já nos eucariotos, a terminação é dada
pelo ação dos telômeros (?)
6. Qual a importância da metilação do DNA
no controle da replicação de E. coli?
É o que inicia a replicação e identifica qual
é a fita mãe e qual é a fita filha
7. Descreva a função das proteínas
presentes no replissomo de E. coli.
DNA-topoisomerase II = vai na frente da
forquilha desenrolando as torções
helicase (DnaB) = abre as fitas de DNA
SSb = mantém as fitas simples, impedindo a
formação de estruturas secundárias
DNA girase = desfaz a tensão do
superenrolamento
Primase (DnaG) = sintetiza o primer de RNA
DNA polimerase II = catalisa a ligação
fosfodiéster e realiza a revisão de erros
pela atividade de exonucleose
RNase H = degrada RNA em fita dupla com
DNA (primers)
DNA polimerase I = preenche as lacunas
dos fragmentos de Okazaki com atividade
de polimerase 5’ → 3’, retira os primers de
RNA com atividade de exonuclease 5’-->3’
parte da frente retira os primers e a de trás
coloca bases
DNA ligase = liga os fragmentos de Okazaki
8. Como a incorporação de bases erradas
no DNA é evitada?
A replicação do DNA tem fidelidade = bases
não pareadas não permitem a ligação
fosfodiéster, devido a especificidade da
DNA polimerase, assim, na revisão de
prova, erros de incorporação podem ser
corrigidos durante a replicação pela
própria DNA polimerase II (um passo para
trás para remover a base errada)
↪ PCR
É um método para amplificação
(multiplicação) seletiva de sequências de
DNA a partir de amostras puras ou
complexas contendo DNA ou RNA.
→ é necessário:
- DNA molde que será desnaturado
- Primers de DNA complementares a
sequencias na vizinhança da região
alvo a ser amplificada com 3’ OH livre
para adição de dNTPs
- DNA polimerase para sintetizar
novas cópias idênticas a região alvo
a ser amplificada
- dNTPs = substrato para síntese de
DNA
- Condições ideais para a enzima,
como temperatura e pH
→ Primers para PCR: oligonucleotídeos =
iniciadores
- Um para cada fita do DNA
- Sequências específicas e conhecidas
- 18‐24 bases complementares ao alvo
- Não devem formar estruturas
secundárias
- Tm semelhante entre o primer 1 e
primer 2
- Existem programas para
planejamento de primers (ex: Primer3)
→ Ciclo de 3 etapas:
1. etapa = desnaturação
2. anelamento dos primers direto e
reverso
3. extensão dos primers = síntese de
DNA = amplicons
→ Taq DNA polimerase = resistente a
variação de temperatura
→ corante sybr green
→ aplicações:
- genotipagem do DNA (diagnóstico
molecular)
- teste de paternidade
- diagnóstico de doenças genéticas
- detecção de infecção/contaminação
por bactérias, vírus ou fungos
Exercícios:
1. A técnica de PCR (polymerase chain
reaction ou reação da polimerase em
cadeia) é utilizada para obter grandes
quantidades de DNA a partir de amostras
contendo quantidades ínfimas de DNA.
Detalhe os princípios desta reação,
informando a enzima utilizada, os
componentes/substratos da reação,
etapas da reação e como o produto da
reação (amplicon) pode ser analisado.
2. Um pesquisador interessado em
amplificar o segmento de DNA
esquematizado abaixo utilizou os pares de
primers indicados em reações de PCR
(reação A, par de primers A; reação B, par
de primers B; reação C, par de primers C;
reação D, par de primers D). Qual será o
resultado que ele obteve em cada uma das
reações? Explique
Par de primers A: GACCTGTGGAAGC e
CATACGGGATTGA
Par de primers B: GACCTGTGGAAGC e
TCAATCCCGTATG
Par de primers C: CTGGACACCTTCG e
TCAATCCCGTATG
Par de primers D: CTGTGGAAGC e
ATCCCGTATG
Assinale a alternativa correta relativa à
amplificação do segmento de DNA
esquematizado acima.
a) Primers: 5’-GACCTGTGGAAGC-3’ e
5’-CATACGGGATTGA- 3´ Amplicon: 226 pb
b) Primers: 5’-GACCTGTGGAAGC-3’ e
5’-TCAATCCCGTATG-3’ Amplicon: 226 pb
c) Primers: 5’-GACCTGTGGAAGC-3’ e
5’-CATACGGGATTGA- 3´ Amplicon: 200 pb
d) Primers: 5’-GACCTGTGGAAGC-3’ e
5’-TCAATCCCGTATG-3’ Amplicon: 200 pb
e) Primers: 5’-CTGGACACCTTCG -3’ e
5’-TCAATCCCGTATG-3’ Amplicon: 226 pb
3. Aponte diferenças entre o ensaio de PCR
convencional e o ensaio de qPCR (PCR
quantitativo).
4. A distrofia muscular de Duchenne (DMD)
é uma das doenças genéticas mais
comuns. O gene da DMD localiza-se no
cromossomo X, possui mais de 2 x 106
pares de base e contém pelo menos 70
exons. 60% dos casos são devidos à
ocorrência de deleções grandes
concentradas em duas regiõesdo gene. 1/3
dos novos casos são devidos a novas
mutações no gene. A técnica de PCR-
multiplex é um método rápido e eficiente
no diagnóstico da DMD e pode detectar
aproximadamente 80% de todas as
deleções já conhecidas. Nesta técnica são
utilizados múltiplos pares de primers que
podem amplificar, em uma reação, 9
segmentos (de tamanhos diferentes) do
gene nas regiões onde as deleções
ocorrem mais frequentemente. Um exemplo
de análise por PCR-multiplex é
apresentado abaixo. Descreva as deleções,
se houverem, em cada um dos seis
pacientes de DMD analisados. Que
controle adicional você sugere para
5´GACCTGTGGAAGC CATACGGGATTGA-3
200 pb 3´CTGGACACCTTCG
GTATGCCCTAACT-5´ confirmar o
diagnóstico do paciente F? As setas
apontam os nove sítios amplificados pela
PCR. Normal equivale a um indivíduo do
sexo masculino não portador da DMD e O
é um controle negativo onde não foi
adicionado DNA à mistura de reação.
5. O que são STRs (Short Tandem Repeats)
e qual sua utilidade na determinação da
impressão digital de DNA humano?
6. Você gostaria de analisar os níveis de
expressão do oncogene Her2 em biópsias
de tecido normal e de tecido tumoral. Que
metodologia você poderia utilizar? Atente
que se trata da análise da expressão de
um único gene.
↪ Estrutura de genes e genoma
gene = um segmento de DNA que contém a
informação para um produto final, que
pode ser RNA ou proteína
- estão arranjados de maneira linear
nos cromossomos
- Informação sobre estrutura, função e
outros atributos biológicos de quem
o carrega, conferindo um fenótipo
5’ UTR e 3’ UTR são regiões não
codificadoras
região codificadora não é a fita molde
região regulatória é onde as enzimas
polimerases serão ligadas
→ genes procarióticos = podem se como
apresentar operons, tendo mais de uma
proteína codificada por um mRNA → um
mRNA corresponde mais de um gene,
região regulatória para mais de um gene
→ genes eucarióticos são interrompidos
por introns (maiores que os exons), que
serão retirados no processo de splicing
(são transcritos mas não traduzidos), cada
gene codifica apenas um produto
→ composição do gene:
- sequência codificadora,
correspondente ao produto final
- introns e exons (em eucariotos)
- sequência regulatória, que indica
onde e como o gene deve ser
codificado
- Sequências não traduzidas (UTR),
presente apenas em genes
codificadores de proteínas
→ genoma = Conjunto de toda a
informação genética do organismo (inclui
dna extranuclear), Inclui genes, regiões não
codificadoras de proteínas, regiões
regulatórias, regiões intergênicas
⚠ não é sinônimo de código genético
(sequência de códons que codificam
aminoácidos))
- Genes correspondem apenas a 25%
do genoma humano
→ Bactérias = têm alta densidade gênica
•1 cromossomo circular
• Genes em operons
• ~1000 pares de base/gene
• Regiões regulatórias curtas
• Poucas e pequenas regiões intergênicas
• Alta densidade gênica
• Poucas sequências repetidas
→ Eucariotos
•Vários cromossomos
• Cada gene tem sua região regulatória
• Genes com tamanhos muito variáveis
• Genes interrompidos por introns
• Regiões regulatórias longas e distantes
• Regiões intergênicas longas
• Muitas sequências repetidas
Exercícios:
1. Defina: gene, sequência codificadora e
sequência não codificadora.
gene = um segmento de DNA que contém a
informação para um produto final, que
pode ser RNA ou proteína
sequência codificadora = éxons
sequência não codif = íntrons
2. Como foi descoberta a relação um
gene-uma enzima? Como foi possível
desvendar a ordem das enzimas da via de
síntese da arginina?
https://www.dnalc.org/view/16360-Animation
-16-One-gene-makes-one-protein-.html.
A relação gene-uma enzima foi descoberta
no experimento que consistia em crescer
mutantes de Neurospora em um meio de
cultura mínimo e um meio com
aminoácidos e vitaminas. As Neurospora
que não cresceram no meio de cultura
mínimo foram colocados em dois tubos, um
com o meio + aminoácidos e outro com
meio + vitaminas. Não havendo
crescimento no tubo de aminoácidos,
conclui-se que a Neurospora não produzia
alguma vitamina, assim, foram feitos tubos
com uma vitamina cada e naquele que não
cresceu neurospora, conclui-se que não
havia produção dessa vitamina. Assim,
descobriu-se que a ausência da
codificação de um gene, não produzia a
vitamina, logo, um gene - uma enzima.
3. Cada proteína/enzima é codificada por
apenas um gene? Discuta e estabeleça
uma relação com o maior nível de
organização estrutural das proteínas.
Não, cada gene codifica um produto que
podem corresponder a diferentes partes
de uma mesma proteína, construindo uma
estrutura complexa.
4. Compare a estrutura de genes
bacterianos e eucarióticos e a
organização do genoma de bactérias e
eucariotos
Bacterianos Eucariotos
1 cromossomo
circular
Vários
cromossomos
Genes em operons Cada gene tem sua
região regulatória
~1000 pares de
base/gene
Genes com
tamanhos muito
variáveis
Regiões
regulatórias curtas
Genes
interrompidos por
introns
Poucas e pequenas
regiões
intergênicas
Regiões
regulatórias longas
e distantes
Alta densidade
gênica
Regiões
intergênicas longas
Muitas sequências
repetidas
↪ Recombinação e elementos
genéticos móveis
→ Recombinação = rearranjos no DNA
formando novas combinação, para
replicação ou reparo, requer homologia,
gera diversidade genética
- funções: clonagem, construção de
organismos recombinantes
(transgênicos, vacinas,
medicamentos)
Identidade = %
Similaridade = %
Homólogos = ancestral comum, mesma
função
→ recombinação homóloga = sequências
com homologia relativamente longas
- modelo de holiday (junção) ->
crossover ou patch (remendo,
apenas uma fita é trocada das
cromátides irmãs)
- Reparo de quebra de fitas duplas
evita bloqueio da replicação
→ recombinação sítio-específica =
sequência menores que são idênticas na
mesma molécula ou entre duas, específicas
que são reconhecidas por recombinases
específicas
- as recombinases cliva e religa o DNA,
trocando as fitas
- É o ciclo de replicação de alguns
vírus e plasmídeos
- Transferência horizontal de DNA
- Regulação de expressão gênica em
bactérias
- aumento de anticorpos (IgM)
embrionários
→ transposição = elementos móveis que
saltam entre moléculas de DNA
- transposons = elementos genéticos
móveis que podem saltar de uma
região a outra do DNA
- Carregam genes de interesse
- Sem duplicação = pula para um novo
sítio, direta e simples
- Replicativa = transposons faz uma
cópia para ser inserida em um novo
sítio
- Retrotransposons = exclusivo de
eucariotos, originário de retrovírus,
integrado a regiões não
codificadoras
- Efeito = silenciamento do gene, uma
mutação por inserção, perda de
função da proteína
- Origina 45% do genoma humano
→ Elementos genéticos móveis = aumentam
a variabilidade genética, rearranjos e
trocas que possibilita novas combinações
- episomos = replicação autônoma
- Integrado ao hospedeiro
- são plasmídeos, bacteriófagos e
transposons
→ Plasmídeos = moléculas circulares de
DNA extracromossomais, possui genes que
aumentam o repertório genético do
hospedeiro (adaptação)
- presentes em bactérias,
protozoários, leveduras
- Replicação autônoma (epissomos)
- Número de cópias controlado
- Partição entre células para impedir
que plasmídeos se percam na
divisão celular
- Podem ser transferidos por
transformação (incorporado do meio
extremo) ou conjugação (genes de
mobilização e transferência)
- Usados para clonagem de
fragmentos de DNA, expressão de
proteínas heterólogas, biossensores
→ Bacteriófago = são vírus que infectam
bactérias, 2 ciclos de vida; lítico (lise da
bactéria) e lisogênico (dna incorporado)
→ Transposons:
- transforma natural = requer aparato
de tomada de DNA (pilus) do meio
para o interior da célula, DNA pode
ser integrado no cromossomo
- Conjugação = Contato celular é
necessário, pilus conjugativo ou
poros entre as células
- Transdução = Transferência genética
entre bactérias que dispensa o
contato entre as células, mediada
por bacteriófagos que empacotam
parte do DNA das bactérias
Exercícios
1. Quais as funções da recombinaçãogenética?
clonagem, construção de organismos
recombinantes (transgênicos, vacinas,
medicamentos)
2. O que é recombinação homóloga?
Quando ela ocorre?
A recombinação homóloga ocorre entre
quaisquer duas sequências de DNA que
sejam iguais ou muito semelhantes.
Usualmente envolve a quebra de duas
moléculas de DNA na mesma região, onde
as sequências são muito semelhantes, e a
junção de um DNA ao outro, o que resulta
num processo de "cross-over". Ocorre
quando há pareamento dos cromossomos
homólogos durante a divisão celular.
3. O que é recombinação sítio-específica?
Cite exemplos e mostre as principais
diferenças em relação à recombinação
homóloga.
É uma recombinação orientada por
proteínas, as recombinases, não há
necessidade de homologia, e ocorre em
sequência menores que são idênticas na
mesma molécula ou entre duas, específicas
que são reconhecidas por recombinases
específicas, essas clivam e religam o DNA,
trocando as fitas. Exemplos dessa
recombinação estão presente no ciclo de
replicação de alguns vírus e plasmídeos, na
transferência horizontal de DNA e na
regulação de expressão gênica em
bactérias.
4. Transdução, conjugação e
transformação são formas de
transferência de material genético em
bactérias.
a. Quais elementos genéticos são
transferidos em cada um destes
processos? Descreva com detalhes.
transdução = transferência como
parte do genoma viral
conjugação = transferência de
plasmídeos ou parcial do
cromossomo através do contato
transformação = genoma parcial
transferido por captação de DNA do
meio
b. Que tipos de genes esses elementos
podem carregar?
Genes de resistência, maior
virulência etc
5. O que são transposons? Como eles
podem se mover dentro do genoma e
inter-genomas? Qual a importância deles
para a evolução?
elementos genéticos móveis que podem
saltar de uma região a outra do DNA,
através de replicação ou de modo sem
duplicação, carregando genes de interesse.
Eles são mediadores da transferência
genética horizontal, incorporando genes
importantes durante a evolução, como o
que permitiu a formação de placenta em
mamíferos.
6. O fato de bactérias patogênicas
estarem se tornando resistentes a um
grande número de antibióticos é um sério
problema de saúde pública. Uma cepa
bacteriana em um paciente que vinha
sendo tratado com um antibiótico pode
subitamente se tornar resistente não
apenas a este antibiótico, mas a outros
também aos quais não foi exposta.
Especule sobre a base molecular deste
problema.
As bactérias se comunicam através de um
mecanismo chamado Quorum Sensing,
permitindo que grupos de bactérias
alterem o comportamento de maneira
síncrona em resposta a mudanças na
densidade populacional. O sistema QS
regula vários processos celulares, que
envolvem principalmente a regulação da
luminescência bacteriana, fatores de
virulência, tolerância de desinfetantes,
formação de esporos, produção de toxinas,
motilidade. Quando a concentração das
moléculas sinalizadoras atinge um
determinado limiar com a densidade da
população bacteriana, a expressão de
certos genes específicos pode ser iniciada
para regular a adaptação da população
bacteriana. Em geral, as bactérias QS
produzem e liberam moléculas de sinais
químicos denominadas autoindutores (AIs).
Essa comunicação permite a adaptação ao
antibiótico, resultando em cepas
resistentes.
7. Qual a importância da transferência
horizontal de genes na evolução do
genoma humano? Dê exemplos.
Genes adquiridos através da transferência
horizontal permitiram o surgimento de
placenta, assim, a transferência horizontal
foi e é importante para adquirir genes úteis
para a evolução.
8. Bactérias apresentam um “sistema
imune” contra a infecção por
bacteriófagos, denominado CRISPR-Cas,
cujo mecanismo tem sido extensivamente
utilizado como uma ferramenta de
engenharia genética. Como ele funciona,
tanto nas bactérias quanto nas aplicações
práticas?
Esse sistema é composto pela porção
CRISPR, formado por repetições diretas e
palindrômicas (capazes de formar grampos
durante a transcrição) e espaçadores de
origem exógena. Além disso, para que seja
funcional, possui associação com as
proteínas Cas. Em uma espécie bacteriana,
as repetições são idênticas, enquanto os
espaçadores são distintos.
O processo se inicia após a entrada de um
DNA exógeno/invasor na célula procariota.
Esse ácido nucléico é reconhecido por
proteínas de reparo e posteriormente
processado, o que promove o seu
reconhecimento pelo complexo protéico
Cas1-Cas2. Logo após, ocorre a
incorporação dessa sequência exógena ao
locus cromossômico onde se localiza o
CRISPR, que é transcrito e passa a ter esse
DNA invasor como uma região espaçadora.
Durante o processo de transcrição do
CRISPR, ocorre a formação de grampos, por
conta das regiões palindrômicas, que são
reconhecidos/processados pelas enzimas
Cas 6 (no caso do CRISPR tipo I) ou pelas
enzimas RNAse tipo III (no caso do CRISPR
tipo II). O produto desse processamento é o
crRNA proveniente dos espaçadores, sendo
um ligante do patógeno que antes havia
liberado seu DNA dentro da célula. Caso
esse invasor infecte novamente, haverá a
ligação de seu material genético com o
crRNA através do reconhecimento de uma
sequência específica de 2-5 nucleotídeos
denominada PAM, que está presente de
forma upstream ou downstream ao
espaçador. Em seguida, acontece a
clivagem deste pela proteína Cas 9
associada ao sistema CRISPR.
↪ Danos, Mutações e reparos
Danos no DNA pode gerar mutações ou
bloqueio de replicação e morte celular
→ dano = alteração química que pode ser
reparada
→ mutação = mudança na sequência de
bases do DNA, que pode ser herdada,
danos não reparados
↪ de ponto = nucleotídeo alterado
↪ inserção = nucleotídeo a mais
↪ deleção = nucleotídeo a menos
→ efeitos:
↪ silenciosa = não afeta o aminoácido
codificado
↪ missense = troca de aminoácido
↪ nonsense = troca por um códon de
parada, impedindo a tradução
↪ mudança de quadro de leitura =
inserção ou deleção (não múltiplo de
3) de bases que muda a leitura de
códons, formando novos
aminoácidos
→ mutações espontâneas:
- hidrólise = quebra da ligação entre a
ribose e a base, gerando um sítio
abásico
- desaminação, leva ao pareamento
errado na replicação, citosina passa
a ser timina, amina passa a ser
hipoxantina, pareando com C. A
desaminação pode ser acelerada
pelo HNO2 (ácido nitroso), derivado
de embutidos.
- inserção ou deleção de bases por
deslizamento da DNA polimerase
(quando tem bases repetidas)
- modificações tautoméricas
(equilíbrio de isômeros das bases),
causam erros de pareamento
→ induzidas = danos causados por agentes
químicos ou físicos (raio X, UV)
↪ Teste de Ames = Salmonella mutante
que não sintetiza histidina são
expostas aos agentes a serem
testadas, se a célula passar a crescer
sem histidina a mutação é
comprovada.
→ agentes químicos =
- Agentes que causam desaminação
de bases (ácido nitroso)
- Espécies reativas de oxigênio e
nitrogênio = geram oxo-guanina por
estresse oxidativo, pareia com a
adenina ao invés da citosina
- Agentes alquilantes = modificam as
bases por adição de grupos metila
ou outros radicais
- Análogos de base = causam bloqueio
na replicação pelo impedimento do
pareamento ou ausência de 3’ OH
livre. São usado como antivirais ou
quimioterápicos
- Agentes intercalantes = causam a
inserção ou a deleção de bases entre
a dupla fita distorcendo-a.
→ físicos:
- UV = induz dímeros de pirimidinas,
Ligações covalentes entre bases
adjacentes
↪ Dímeros de timina causam
alteração na estrutura da
dupla-hélice que podem levar
ao bloqueio da replicação,
DNA polimerase não consegue
passar
↪ produtos de degradação da
melanina causam formação
dímeros de timina mesmo após
a exposição ao sol
→ Mecanismos de reparo
reparo eficiente = estabilidade genética
ineficiente = instabilidade, gerando câncer
e doenças hereditárias ou mutações para a
evolução
Atividades enzimáticas necessárias para o
reparo de DNA
→ Nucleases = cortam uma ligação
fosfodiéster
→ Helicases = quebram ligações de
hidrogênio entre as fitas
→ DNA polimerases = adicionam
nucleotídeos,podem ter atividade de
exonuclease
→ DNA ligase = religa quebras (fosfodiéster)
em uma fita
→ DNA glicosilases = Quebram a ligação
glicosídica entre base e desoxirribose, é
específica para cada base alterada
→ Tipos de sistemas de reparo:
- mismatch repair = acontece logo
depois da replicação, erros
corrigidos na fita nova e mantém o
molde, as diferencia por metilação
da fita velha
- Reparo por excisão de base (BER) =
remove bases estranhas do DNA
↪ DNA glicosilases – Retiram a
base modificada – específicas
para cada modificação
↪ AP endonuclease – Quebra
ligação fosfodiéster a 5’ do
sítio AP
↪ DNA polimerase I – Adiciona
novos nucleotídeos a partir do
3’OH livre criado pela AP
endonuclease
↪ DNA ligase – Sela a fita
- Reparo por excisão de nucleotídeo
(NER) = detecta e repara mudanças
estruturais do DNA, como dímeros de
timina ou adutos volumosos
↪ xeroderma pigmentoso e
síndrome de Cockayne
- Reparo direto =
↪ Foto-reativação enzimática de
dímeros de timina = Fotoliase =
quebra as ligações entre os
dímeros; ativada por luz visível;
ausente apenas em mamíferos
placentários
↪ Remoção de grupos alquil das
bases = O6 – metilguanina DNA
metiltransferase = transfere
grupo metil da mG para uma
cisteína em sua estrutura;
Reação não se reverte e a
proteína é degradada
- Reparo por síntese translesão (SOS) =
resposta a estresse
↪ ativado por lesões que
impedem a replicação, DNA
polimerase da família Y
(passível de erro) incorpora
nucleotídeos aleatórios,
estimulando a replicação.
Fonte de variabilidade
genética (resistência a
antibióticos)
- Reparo por recombinação = supera
bloqueios de replicação, depende de
uma molécula de DNA homóloga que
serve como molde
Exercícios
1. Cite exemplos de danos no DNA
causadas por:
a. agentes químicos
desaminação
b. oxidação por espécies reativas de
oxigênio
oxo-guanina
c. radiação ultravioleta.
dímeros de pirimidinas
2. Descreva o teste simples que usa uma
linhagem da bactéria Salmonella e permite
que compostos químicos sejam testados
quanto à sua capacidade de aumentar a
frequência de mutações.
Uma linhagem mutante de Salmonella que
não sintetiza histidina é colocado em uma
placa de petri e no meio dessa placa é
colocado um papel de filtro com o
composto a ser testado. Se esse composto
for mutagênico, este induzirá que essa
linhagem mutante cresce decido a
mutações que permitem a sintetização de
histidina.
3. Qual a diferença entre dano (ou lesão)
no DNA e mutação?
O dano ou lesão são erros que acontecem
durante a replicação, de maneira
espontânea, ou são induzidos por agentes
químicos ou físicos e serão reparados
pelos mecanismos de reparação. Já a
mutação é quando o dano ou lesão não foi
reparado de maneira eficiente, se tornando
permanente, podendo ser transmitido às
novas gerações.
4. Descreva os efeitos que diferentes tipos
de mutações em uma sequência
codificadora podem ter na sequência do
produto proteico.
silenciosa = não afeta o aminoácido
codificado
missense = troca de aminoácido
nonsense = troca por um códon de parada,
impedindo a tradução
mudança de quadro de leitura = inserção
ou deleção (não múltiplo de 3) de bases
que muda a leitura de códons, formando
novos aminoácidos
5. Faça um esquema da replicação de uma
molécula de DNA onde um resíduo de
adenina sofreu desaminação. Se não
houver reparo, qual será o efeito nas
moléculas “descendentes”? Que tipo de
composto pode aumentar a frequência
deste dano/mutação?
Mudará o quadro de leitura devido a uma
nova base, gerando um novo padrão de
leitura de pareamento dos aminoácidos.
Agentes químicos estimulam esse tipo de
lesão.
6. Como cada um dos danos listados no
exercício 1 pode ser reparado? Uma tabela
comparativa dos mecanismos pode ajudar
na compreensão dos diferentes cenários.
Descreva os mecanismos, incluindo as
enzimas envolvidas.
desaminação = Reparo por excisão de base
(BER)
oxo - guanina =
dímeros de timina = Reparo por excisão de
nucleotídeo (NER)
7. Considerando os sistemas de reparo do
DNA, responda:
a. Sendo que U pareia com A tão bem
quanto T pareia com A, por que
somente T é encontrado no DNA?
A Timina apenas se liga à
desoxirribose
b. 5-metil-citosina é frequentemente
encontrada no DNA de vertebrados
e plantas. Nessas mesmas células,
um sistema especializado de reparo
reconhece o mau-pareamento
(mismatch) G-T e o repara para G-C.
Qual é a lógica desse reparo? Por
que não é vantajoso que o par G-T
seja reparado para A-T? (dica: faça
esquemas como o solicitado no
exercício 5 para ajudar a visualizar o
que acontece)
O MMR inicia-se quando MutS
liga-se aos nucleotídeos inseridos
erroneamente na cadeia
recém-sintetizada, formando um
complexo MutS-DNA. Em uma reação
dependente de energia, o complexo
MutS-DNA interage com as
proteínas MutL. A interação entre
os complexos MutL e MutS ativa a
endonuclease MutH, responsável
pela clivagem da cadeia danificada e
inicio dos mecanismos de reparo do
DNA, com a consequente
substituição dos nucleotídeos
incorretos. O gap, por sua vez,
atua como ponto de inserção da
helicase, que separa as fi-tas, sendo
as exonucleases responsáveis pela
deleção dos nucleotídeos na região
contendo o mismatch.
8. Para que o mecanismo de reparo de
mal-pareamento (mismatch repair) seja
efetivo, é necessária a identificação das
fitas parental e recentemente sintetizada.
Como isso é feito em E. coli?
A fita antiga sofre metilação após a
replicação, o que torna possível diferenciar
da fita nova, que não sofreu metilação.
9. O que é necessário para que o reparo
por recombinação homóloga ocorra em E.
coli?
É necessário de uma molécula de DNA
homóloga sirva como molde
10. Veja os links disponíveis no e-disciplinas
e leia a reportagem da revista Wired
“DNA-repairing sunscreen: legit or not?”
(https://www.wired.com/story/dna-repairing
-sunscreen-legit-or-nah/) sobre o uso de
enzimas de reparo de DNA em cosméticos
para evitar câncer de pele. Na visão de um
farmacêutico (ou outro profissional de
saúde), qual seria a “lógica molecular”
desse tipo de produto? O que ainda falta
para que produtos desse tipo possam ser
usados com sucesso em casos de XP como
o de Araras, em Goiás
(https://www.bbc.com/portuguese/brasil459
75890;
http://revistapesquisa.fapesp.br/2012/09/14
/luta-contra-o-sol/), ou mesmo para a
população em geral? (Atenção: mesmo
contendo várias citações de artigos
científicos, o artigo da Wired usa o termo
“genetic code” de maneira equivocada.
Explique!).