Técnica de PCR

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PCR - “Polymerase Chain Reaction” 
(Reação em cadeia da polimerase) 
• Fator limitante para estudos de 
biologia molecular sempre foi a 
pequena quantidade de material 
disponível (DNA) 
 
• Replicação in vitro de DNA – 
amplifica regiões específicas de DNA 
(exponencialmente), gerando 
milhares de cópias do molde de 
interesse 
 
• Termocicladores: ciclos de altas e 
baixas temperaturas 
 
 
Quais os componentes e 
reagentes necessários à reação 
de PCR? 
Componentes e reagentes: 
 
 DNA molde: contém a região a ser amplificada 
 Primers: complementares às regiões 5´ e 3´ da molécula alvo 
 dNTPs: nucleotídeos livre a serem incorporados às novas fitas 
 Tampão: fornece meio ótimo para atividade e estabilidade da Taq 
 Mg+2: cofator da enzima 
 Enzima: Taq DNA polimerase 
Antigamente 
banho-maria com diversas 
temperaturas 
Atualmente 
termocicladores 
 
 
• Enzima isolada da bactéria Thermus aquaticus - presente 
em regiões vulcânicas do Yellowstone National Park, EUA 
(águas quentes 70C) 
• Bactéria termófila - organismos que vivem e se 
reproduzem em altas temperaturas 
• Taq DNA polimerase termoestável - suporta altas 
temperaturas 
Taq DNA polimerase 
Yellowstone National Park, EUA BactériaThermus aquaticus 
Estrutura tridimensional da 
enzima Taq DNA polimerase 
Ciclos repetidos de desnaturação pelo calor, hibridização com os 
iniciadores, e síntese de DNA resultam em uma amplificação exponencial 
do DNA alvo 
1 ciclo = 2 Amplicons 
2 ciclos = 4 Amplicons 
3 ciclos = 8 Amplicons 
4 ciclos = 16 Amplicons 
5 ciclos = 32 Amplicons 
6 ciclos = 64 Amplicons 
7 ciclos = 128 Amplicons 
No. No. Amplicons 
Ciclos Copias do DNA alvo 
 1 2 
 2 4 
 3 8 
 4 16 
 5 32 
 6 64 
 20 1.048.576 
 30 1.073.741.824 
Produtos de PCR 
Eletroforese 
Eletroforese 
Eletroforese 
Eletroforese 
 
 
Aplicações da PCR 
 
 
 
 Clonagem de genes ou segmentos de genes 
 
 Diagnóstico de doenças genéticas e infecciosas 
 
 Identificação de indivíduos (teste de paternidade) 
 
Detecção de contaminação por bactérias, vírus ou fungos 
 
Quantificar diferenças na expressão de genes (RT-PCR)