Coloração de Gram GP E

Prévia do material em texto

INSTITUTO FEDERAL DO AMAZONAS – IFAM 
CAMPUS MANAUS CENTRO – CMC 
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA, AMBIENTE E ALIMENTOS – DQA 
DISCIPLINA DE TÉCNICA E ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS 
Prof. Dr. ANDERSON PAULO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE PRÁTICA LABORATORIAL 
TÉCNICA DE COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
MANAUS/AM 
16 DE SETEMBRO DE 2022 
HAYANNA SABRYNA SILVA DOS SANTOS 
JOSÉ ABRAÃO SIMPLÍCIO DIAS 
JULIANA ALMEIDA E SILVA 
RAFAEL COSTA FONSECA DE LIMA 
YGOR ALVES DANIEL 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE PRÁTICA LABORATORIAL 
TÉCNICA DE COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
MANAUS/AM 
16 DE SETEMBRO DE 2022 
Relatório apresentado ao Curso Técnico de 
nível Médio Integrado em Química do Instituto 
Federal de Educação, Ciência e Tecnologia 
Campus Manaus Centro, como parte dos 
requisitos necessários para nota parcial na 
disciplina de Técnica e Análises 
Microbiológicas, da turma IQUI 12. 
Orientador: Prof. Dr. Anderson Paulo 
SUMÁRIO 
 
1. INTRODUÇÃO ............................................................................................... 4 
2. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA ...................................................................... 5 
3. OBJETIVO ...................................................................................................... 6 
4. MATERIAIS E MÉTODOS.............................................................................. 6 
4.1 MATERIAIS ............................................................................................... 6 
4.2 MÉTODO .................................................................................................. 7 
6. RESULTADO ................................................................................................. 8 
5. CONCLUSÃO ................................................................................................. 9 
7. REFERÊNCIAS ............................................................................................ 10 
8. APÊNDICE ................................................................................................... 10 
 
 
4 
 
1. INTRODUÇÃO 
 
 O relatório a seguir tem por finalidade apresentar os experimentos 
realizados no dia 29 de agosto no laboratório de microbiologia do Instituto 
Federal de Educação, Ciência, e Tecnologia do Amazonas, onde durante a 
prática laboratorial, cada discente da turma IQUI 12 efetuou a técnica de 
pigmentação de bactérias a fim de caracterizá-las como Gram-positivas ou 
Gram-negativas, por meio do método de coloração diferencial. Dessa forma, 
desenvolvendo cada vez mais a bagagem técnica e intelectual dos discentes, de 
forma que possam dar prosseguimento nas realizações de processos 
laboratoriais posteriores. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
5 
 
2. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA 
 
 A Coloração de Gram é uma técnica utilizada na Microbiologia com a 
finalidade de diferenciar bactérias Gram-positivas de Gram-negativas. Foi 
desenvolvida por um médico dinamarquês chamado Hans Christian Gram em 
1884, passando por algumas modificações em 1921 nas mãos de Hucker, onde 
fez certos ajustes como o aprimoramento da qualidade da coloração e a 
estabilização de reagentes. Interessante ressaltar que esta técnica também pode 
ser utilizada para observar a forma de microrganismos (bacilo, coco, cocobacilos, 
etc.) e até sua distribuição no espaço (aglomerado, cadeia, pares, tétrade, etc.). 
 A técnica de Coloração de Gram é baseada a partir de 4 passos ou 
etapas, onde ocorrem a coloração da bactéria, fixação do corante, descoloração 
e contra coloração. O Cristal Violeta ou Violeta de Genciana são os primeiros 
corantes a serem utilizados no processo, por conta da afinidade com a o 
peptidoglicano presente na parede celular das bactérias. Assim, logo é 
adicionado Lugol, que irá induzir a formação de complexo cristal violeta-iodo, e 
em seguida a Solução descolorante (álcool). Dessa forma, as bactérias Gram-
positivas, que possuem uma camada grossa de pepitidoglicano, conseguem 
reter o corante, além do alvejante acabar retendo os poros. No entanto, as Gram-
negativa perdem a coloração devido a grande presença de lipopolissacarídeos 
em sua parede, que ao entrar em contato com o álcool são destruídos e, além 
disso, esse tipo de bactéria também possui uma fina camada de peptidoglicano, 
o que contribui para seu processo de descoloração. 
 Ao final do processo ainda é adicionado Safranina ou Fucsina, o que deixa 
as bactérias Gram-negativas com uma pigmentação rosa, e assim, 
possibilitando, com a ajuda de um microscópio óptico, a visualização e 
diferenciação das bactérias em Gram-negativas e Gram-positivas. 
 
 
 
 
 
6 
 
3. OBJETIVO 
 
 A prática laboratorial em questão, possui como principal finalidade o 
entendimento e a aprendizagem dos discentes em relação ao emprego e a 
funcionalidade da técnica de Coloração de Gram, cujo intuito consiste na 
identificação, caracterização e classificação de bactérias em Gram-positiva e 
Gram-negativa, por meio do método de coloração diferencial. Dessa forma, a 
partir do conteúdo ministrado pelo orientador e a posterior atividade realizada, 
os discentes tendem a desenvolver suas habilidades técnicas em trabalhos 
laboratoriais, a fim de alimentar cada vez mais sua bagagem prática e teórica 
dos conteúdos abordados. 
 
4. MATERIAIS E MÉTODOS 
 
4.1 MATERIAIS 
 
• Bico de Bunsen; 
• Lâmina (1 unidade por pessoa); 
• Lamínula (1 unidade por pessoa); 
• Alça de platina; 
• Pisseta (água destilada); 
• Violeta de Genciana; 
• Lugol Fraco; 
• Fucsina; 
• Solução Descorante (Álcool descorante); 
• Microscópio Óptico. 
 
 
 
 
 
7 
 
4.2 MÉTODO 
 
 Para a realização da atividade prática sobre Coloração de Gram, utilizou-
se o método de coloração diferencial a fim de possibilitar a classificação da 
bactéria Staphylococcal Aureus em Gram-positiva ou Gram-negativa. 
ETAPA 1: PREPARAÇÂO DA LÂMINA 
 
• Passo 1: Flambamos a Alça de platina no Bico de Bunsen a fim de 
esterilizá-la. Em seguida encostamos a alça no canto da Placa de Petri 
em que se encontra a bactéria Staphylococcal Aureus, dessa forma 
resfriando o instrumento para que não danifique o material biológico. 
• Passo 2: Coletamos uma pequena quantidade de bactérias utilizando a 
Alça de Platina. 
• Passo 3: Esfregamos o material coletado na lâmina em movimentos 
circulares. 
• Passo 4: Flambamos a Alça de Platina novamente para esteriliza-la. 
• Passo 5: Passamos a lâmina com o material biológico 4 vezes na chama 
do Bico de Bunsen, a fim de fixar a bactéria na lâmina. 
 
ETAPA 2: APLICAÇÂO DA COLORAÇÃO DIFERENCIAL – COLORAÇÂO DE 
GRAM 
 
• Passo 1: Adicionamos 4 gotas de Violeta de Genciana à lâmina e 
deixamos a substância fazer efeito por cerca de 1 minuto para que possa 
penetrar através da parede celular e membrana plasmática. Logo após, 
com o auxílio de um papel toalha pode-se retirar o excesso de substância. 
• Passo 2: Adicionamos 4 gotas de Lugol Fraco e o deixamos agir por 1 
minuto para que fixe o corante primário. 
• Passo 3: Com a ajuda de uma Pisseta contendo água destilada lavamos 
a lâmina a fim de retirar o Lugol Fraco. 
 
8 
 
• Passo 4: Adicionamos 4 gotas de Solução Descorante (Álcool) e o 
deixamos fazer efeito por 30 segundos para que as bactérias Gram-
negativas percam a coloração. 
• Passo 5: Novamente lavamos com água destilada a fim de retirar o álcool. 
• Passo 6: Adicionamos 4 gotas de Fucsina e a deixamos agir por 30 
segundos para que as bactérias Gram-negativas sejam tingidas pelo novo 
corante. 
• Passo 7: Por fim lavamos novamente com água destilada. 
• Passo 8: Levamos a lâmina ao Laboratório de Microscopia a fim de 
realizar a visualização das mesmas. 
Observação 2: O grupo “E” não teve a oportunidade de realizar a observação e 
visualização das lâminas no Laboratório de Microscopia até o diada entrega do 
seguinte relatório, portanto não foi possível anexar imagens referentes a 
observação das bactérias. 
 
6. RESULTADO 
 
 O resultado obtido ocorreu após o processo de coloração de Gram, 
realizado sob a supervisão do orientador responsável. Várias etapas tiveram de 
ser realizadas até que conseguíssemos executar com sucesso a análise do 
tecido bacteriano em questão. Dadas as circunstâncias, as bactérias estudadas 
revelaram-se por fim, Gram positivas ao apresentarem uma coloração roxa. Após 
as etapas finais do processo de coloração e análise a olho nu terem sido 
concluídas, o material finalmente poderia ser levado ao laboratório de 
microscopia para que a observação e análise completa viessem a ser 
executadas. 
 
 
 
 
 
9 
 
5. CONCLUSÃO 
 
 Tendo em vista os aspectos mencionados podemos citar com veemência 
a grande importância da aprendizagem desta prática por entre os alunos do 
curso de química. É de suma importância que possamos ter domínio sobre essa 
técnica para que por fim consigamos identificar com sucesso as bactérias 
trabalhadas. Com base neste tópico podemos ressaltar que essa prática é 
importante para caracterizar bactérias com base na análise de suas 
características. Uma das etapas fundamentais de um auxílio diagnóstico de uma 
infecção (Por exemplo) consiste na análise microscópica do material biológico 
obtido diretamente do local do qual deseja-se dar início a investigação. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
10 
 
7. REFERÊNCIAS 
• https://journalmural.com/tinci-n-de-gram-fundamento; 
• https://www.tuasaude.com/coloracao-de-gram/ 
 
8. APÊNDICE 
 
 
Figura 01: Prof. Dr. Anderson Paulo aplicando 
Violeta de Genciana em lâmina contendo 
bactérias. 
Fonte: Autoral. 
Figura 02: Materiais utilizados na 
atividade prática. 
Fonte: Autoral. 
Figura 03: Lâminas contendo a bactéria 
Staphylococcal Aureus feitas pelo grupo “E”. 
Fonte: Autoral. 
Figura 04: Lâminas do Grupo “E” ao final do 
processo de Coloração de Gram. 
Fonte: Autoral 
https://journalmural.com/tinci-n-de-gram-fundamento
https://www.tuasaude.com/coloracao-de-gram/