EXAMES SOROLÓGICO EM IMUNOLOGIA CLÍNICA

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EXAMES SOROLÓGICOS EM IMUNOLOGIA CLÍNICA: EXERCÍCIOS.
01) Quais os princípios usados na elaboração de exames sorológicos em imunologia clínica? Explique cada um deles.
02) São exemplos de exames realizados por aglutinação, exceto:
a) PCR
b) Beta-hCG
c) ASLO
d) Arthrit-test
03) De modo geral, diferencie a imunofluroescência direta da indireta.
04) Diferencie ELISA indireto, competitivo e sanduíche.
05) Explique com suas palavras o Western-Blotting.
06) Diferencie o método quantitativo e qualitativo de PCR e diga o valor do fator de diluição.
07) Quais as especificações do Arthrit-test?
08) Comente sobre os resultados do ASLO.
09) Em quais situações o teste quantitativo do beta-hCG tem importância clínica? Qual o método desse teste? Quais são as especificações para a amostra e sua coleta?
010) De que modo um teste rápido se torna inválido.
RESPOSTAS:
01) Aglutinação: reação visível devido a alteração física do analítico, causada pela ligação entre anticorpo e antígeno. Imunocromatografia: A cromatografia pode ser usada em análises clínicas através de detecção de compostos por meio de suas características químicas como afinidade e etc. Os testes rápidos de covid são exemplo. Quimioluminescência: o uso de marcadores fluorescentes nas reações antígeno e anticorpos produzem luminescência que podem ser analisadas quantitativamente e qualitativamente.
02) B. beta-hcg é realizado a partir da quimioluminescência.
03) A imunoflorescência direta é baseada na marcação do antígeno ou anticorpo com a substância fluorescente, enquanto na indireta, também chamada de duas etapas, ocorre a marcação em um anticorpo que se liga ao complexo anticorpo+antígeno, produzindo reação luminosa, caso haja infecção.
04) No método indireto, o soro do paciente contendo os anticorpos é depositado por um período de 30 minutos nos pocinhos com o antígeno e depois lavados para retirar os não ligantes. Em seguida é adicionado o anti anticorpo conjugado à enzima, lavado depois de 30 minutos e o substrato da enzima, assim como a substância cromogénica. No método sanduíche há pesquisa do antígeno e não da imunoglobulina, visto que na placa há fixação do anticorpo, a qual irá receber o soro contendo o antígeno. No método competitivo, pesquisa-se o antígeno inicialmente através da incubação prévia com o anticorpo. O complexo formado anticorpo+antígeno é despejado numa placa contendo anticorpos que se ligarão aos antígenos disponíveis, em seguida se adiciona o anti anticorpo conjugado a enzima, o substrato e cromatogéno, produzindo espectofotometria inversamente proporcional a quantidade de antígenos.
05) É muito eficaz na confirmação de sorologias como a do HIV, devido a sua alta especificidade. As proteínas virais são dispostas em papel especial, o qual receberá o soro do paciente que se positivo irá se ligar as proteínas. Antigamente usava-se materiais radioativos para a produção de coloração a partir da ligação antígeno-anticorpo, mas devido aos efeitos radioativos, esses indicadores foram substituídos por anticorpos acoplados à enzimas ou a quimioluminescência.
06) O método qualitativo é realizado a partir da visualização da aglutinação do soro do paciente com os reagentes, produzindo grumos visíveis a olho nú. Caso positivo, há necessidade de quantificação através de diluições geométricas (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128). No caso de aglutinação em diluições maiores, como a 1:128, há grande disseminação da infecção.
07) Amostras positivas são de resultado acima de 0,25 UI/microL. Aglutinações devem ser quantificadas por meio de diluições geométricas. Fator de diluição 8. O aumento do título tem importância diagnóstica.
08) O ASLO é um exame realizado a partir de aglutinação com o anticorpo anti estrptolisina O, o qual se liga com a estroptolisina, secretada por estreptococos. É normal a presença dessa proteína no soro, mas apenas valores acima de 200 UI/ML são relevantes para infecção pós estreptococo, como a febre reumática. Seu fator de diluição é 200 e resultados acima de 500UI/ML podem ser característicos de glormerulo-nefrite. Nesse exame, há pesquisa de anticorpos através do soro, com látex revestido por estreptolisina.
09) Em casos de mola hidatiforme. O teste pode ser realizado através da urina ou sangue, mas a preferencia deve ser com o sangue devido ao baixo teor de eliminação renal do hormônio que pode gerar falsos negativos. No caso de quantitativo é imunocromatocrafia, qualitativo é quimioluminescência.
010) Quando a fita controle não se acender, independente do resultado ser positivo ou negativo.