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BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA A BIOMEDICINA PERGUNTA 1 • • A técnica de western blotting consiste na detecção de proteínas específicas em amostras de lisados celulares ou amostras de tecidos. Com base nessa técnica, julgue as afirmativas e marque a alternativa CORRETA. I- Os passos para a elaboração dessa técnica podem ser resumidos em cinco etapas: (1) extração e quantificação das proteínas; (2) fracionamento das proteínas da amostra em um gel de poliacrilamida; (3) transferências dessas proteínas para uma membrana; (4) incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína específica a ser analisada; e (5) revelação dessa membrana para análise dos dados. II- Diversos métodos espectroscópicos são utilizados para quantificar proteínas em uma solução. O ensaio de Bradford é o mais utilizado e apresenta diversas vantagens em relação aos demais, como a rapidez, a não exigência de aquecimento e a alta sensibilidade para baixas concentrações de proteínas. O método de Bradford se baseia na mudança de cor do corante Coomassie Blue G-250, em solução ácida (cor azulada) para cor avermelhada na presença de proteínas. As interações hidrofóbicas e iônicas estabilizam o complexo proteína- corante. III- Para separar as proteínas de uma amostra homogênea, a técnica mais utilizada é a eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE). Inicialmente, prepara-se o gel de SDS- poliacrilamida, que será uma matriz inerte através da qual as proteínas poderão migrar. O gel é preparado pela polimerização de monômeros de acrilamida e o tamanho dos poros do gel pode ser ajustado variando a concentração da acrilamida adicionada para retardar a migração da sua proteína de interesse. As proteínas podem possuir cargas positivas ou negativas, dependendo das cargas dos aminoácidos que as compõem. IV- Para visualizar uma proteína de interesse, é utilizado um anticorpo específico que vai reagir com um epitopo da proteína, formando um complexo anticorpo antígeno. Esse anticorpo é denominado anticorpo primário, que pode ser policlonal (reconhece mais de um epitopo) ou monoclonal (reconhece apenas um epitopo da proteína de interesse) e é geralmente obtido apenas em camundongo ou em coelho. a. Apenas II e IV são incorretas. b. Todas são incorretas. c. Apenas IV é incorreta. d. Apenas I e II são corretas. e. Todas são corretas. 0,3 pontos PERGUNTA 2 • O cariótipo é o processo de parear e ordenar os cromossomos de um organismo, a fim de detectar e caracterizar anormalidades genômicas estruturais e numéricas. A preparação do cariótipo envolve o uso de corantes específicos que auxiliam na identificação dos cromossomos. Qual o corante padrão ouro utilizado para a preparação do bandeamento dos cromossomos? a. Brometo de etídio. b. Giemsa. c. Eosina. d. Hematoxilina. e. GFP. 0,3 pontos PERGUNTA 3 • O exame de cariótipo é aconselhado em condições de suspeita de anormalidades cromossômicas, desordens sexuais, anormalidades congênitas múltiplas e/ou envolvendo retardo mental, infertilidade, abortos de repetição e tumores. O preparo do cariótipo envolve várias etapas, utilizando diferentes tipos de reagentes, como fito-hemaglutinina, colchicina, solução hipotônica e Giemsa. Para que serve cada reagente, respectivamente? a. Induz a divisão celular dos linfócitos do sangue periférico / Divide os cromossomos / Cora as bandas dos cromossomos / Fixa na lâmina. b. Induz a divisão celular dos linfócitos do sangue periférico / Mantém as células em metáfase / Faz com que os cromossomos fiquem separados / Cora as bandas. c. Induz a divisão celular dos linfócitos do sangue periférico / Induz crossing over / Mantém as células em anáfase/ Cora as bandas. d. Induz a divisão celular dos linfócitos do sangue periférico / Mantém as células em telófase / Mantém os cromossomos separados / Cora as bandas. e. Induz a divisão celular das hemácias do sangue periférico / Mantém as células em telófase / Mantém os cromossomos separados / Cora as bandas. 0,3 pontos PERGUNTA 4 • As técnicas de biologia molecular têm sido muito úteis no diagnóstico de vírus e bactérias. Em relação a essas técnicas, leia as afirmativas: I – O PCR multiplex representa uma abordagem recente no diagnóstico de vírus respiratórios. II – O PCR em tempo real é muito utilizado na quantificação de carga viral do HIV (vírus da imunodeficiência humana). III – Os métodos moleculares não são frequentemente utilizados para diagnóstico de infecções causadas por eucariotos. IV – O diagnóstico laboratorial rápido e específico é muito útil para o rápido diagnóstico e a Biologia Molecular não é uma ferramenta muito útil nesse sentido. a. Somente as alternativas I e II estão corretas. b. Somente as alternativas I, II e III estão corretas. c. Somente as alternativas I e IV estão corretas. d. Todas as alternativas estão corretas. e. Todas as alternativas estão erradas. 0,3 pontos PERGUNTA 5 • A eletroforese em gel é uma técnica muito eficiente para separar, identificar e purificar diferentes fragmentos de moléculas. A migração das partículas no gel tamponado ocorrerá pela formação de um campo elétrico formado pelos dois polos da técnica, indo do polo negativo para o positivo. Diferentes tipos de géis podem ser utilizados para a confecção da técnica. O tamanho dos poros formados por cada um deles será o ponto chave para a análise de diferentes tamanhos das partículas. Um corante intercalante de DNA muito utilizado para visualização das bandas de eletroforese é: a. Fucsina. b. Hematoxilina. c. Eosina. d. Brometo de etídio. e. Giemsa. 0,3 pontos PERGUNTA 6 • Sobre o processo de extração de DNA do sangue periférico, assinale a alternativa que representa a ordem correta: a. Coleta do sangue/lavagem/lise/hemólise/ precipitação. b. Lavagem/coleta do sangue/hemólise/lise/precipita ção. c. Coleta do sangue/hemólise/lavagem/prec ipitação/lise. d. Coleta do sangue/hemólise/lavagem/lise/ precipitação. e. Coleta do sangue/lavagem/lise/precipitaç ão/hemólise. 0,3 pontos PERGUNTA 7 • Qual o papel da proteinase K no processo de extração do DNA e em que etapa ela é usada? a. A proteinase K é uma nuclease que digere as proteínas da amostra e é adicionada na etapa de lise do DNA. b. A proteinase K é um ácido nucleico que digere as proteínas da amostra e é adicionada na etapa de lise do DNA. c. A proteinase K é uma enzima que digere as proteínas da amostra e é adicionada na etapa de lavagem do DNA. d. A proteinase K é uma enzima que digere as proteínas da amostra e é adicionada na etapa de precipitação do DNA. e. A proteinase K é uma enzima que digere as proteínas da amostra e é adicionada na etapa de lise do DNA. 0,3 pontos PERGUNTA 8 • O gene flavonoide 3′-hidroxilase ( f3′h) influencia a cor da flor em plantas comuns de ipomeia. Um pesquisador coletou DNA de plantas comuns de ipomeia e usou o sequenciamento de DNA para identificar a ordem dos nucleotídeos no gene f3′h de cada planta. Um subconjunto dos dados de sequenciamento, que mostra os resultados para duas plantas, é mostrado na Figura 1. Fonte: Adaptada de: https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and- regulation/biotechnology/e/biotechnology?modal=1. Acesso em: 13 set. 2020. Qual alternativa descreve os resultados mostrados na Figura 1? a. A planta 1 e a 2 diferem em pelo menos dois nucleotídeos para o gene f3’h. b. A planta 1 não produz uma proteína F3’H funcional, enquanto a planta 2 sim. c. A planta 1 faz mais flores que a planta 2. d. A planta 1 e a planta 2 têm genomas idênticos. https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulation/biotechnology/e/biotechnology?modal=1 https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulation/biotechnology/e/biotechnology?modal=1 e. A planta1 e a 2 diferem em somente um nucleotídeo para o gene f3’h. 0,3 pontos PERGUNTA 9 • Um cientista usou técnicas de laboratório para mover o Gene X de um plasmídeo específico de bactéria para um plasmídeo específico de levedura. Para fazer isso, o cientista primeiro usou enzimas de restrição para digerir, ou cortar, o plasmídeo específico da bactéria em cada lado do gene, o que resultou em uma mistura de dois pedaços lineares de DNA (Figura 1). Figura 1: Diagrama mostrando o plasmídeo bacteriano antes e depois da digestão com as enzimas de restrição (bp = pares de base) Fonte: Adaptada de: https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and- regulation/biotechnology/e/biotechnology?modal=1. Acesso em: 13 set. 2020. O cientista usou o gel de eletroforese para separar os fragmentos por tamanho. Então, o cientista cortou fora da área que continha o gene X para poder purificá-lo do gel. O seguinte diagrama mostra o DNA plasmidial digerido e visualizado no gel de eletroforese, com as bandas A, B e C. Qual (is) das bandas o cientista cortará para isolar o gene X? Fonte: Adaptada de: https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and- regulation/biotechnology/e/biotechnology?modal=1. Acesso em: 13 set. 2020. a. Banda A. b. Banda B. c. Banda C. d. Banda A e B. e. Todas as bandas. 0,3 pontos PERGUNTA 10 • Mamutes lanosos são parentes extintos dos elefantes modernos. Os cientistas descobriram uma série de espécimes de mamutes lanudos preservados no Àrtico e extraíram DNA dos fios de cabelo desses animais. Este DNA foi estudado em laboratório usando as mesmas técnicas usadas para estudar o DNA dos organismos modernos. Por exemplo, um grupo de cientistas usou uma amostra de DNA de mamute lanoso para sequenciar o genoma nuclear do animal. Primeiro, os cientistas cortaram a amostra de DNA em fragmentos. Em seguida, os cientistas amplificaram os fragmentos para sequenciamento. Após o sequenciamento, os cientistas usaram computadores para remontar as sequências de fragmentos para determinar a ordem dos nucleotídeos no genoma do mamute. Qual das seguintes técnicas poderia ter realizado a etapa de amplificação do processo dos cientistas? https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulation/biotechnology/e/biotechnology?modal=1 https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulation/biotechnology/e/biotechnology?modal=1 https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulation/biotechnology/e/biotechnology?modal=1 https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulation/biotechnology/e/biotechnology?modal=1 a. Eletroforese de DNA. b. Transformação bacteriana. c. Reação em cadeia da polimerase (PCR). d. Sequenciamento de DNA. e. Minipreparação plasmidial. 0,3 pontos PERGUNTA 1 PERGUNTA 2 PERGUNTA 3 PERGUNTA 4 PERGUNTA 5 PERGUNTA 6 PERGUNTA 7 PERGUNTA 8 PERGUNTA 9 PERGUNTA 10
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