Relatório de Aulas Práticas em Toxicologia

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UNIVERSIDADE PAULISTA – UNIP
 TOXICOLOGIA ANALISES TOXICOLÓGICAS 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS
 FRANÇUELEN RODRIGUES CARDOSO
R.A:0567201
SOCORRO, 14 DE MAIO DE 2022 
Disciplina: Toxicologia e Análises Toxicológicas
 Título da Aula: Identificação de Aflatoxina por 
Cromatografia em Camada Delgada (CCD)
AULA 3
OBJETIVO: Identificação de micotoxinas (aflatoxinas B1, B2, G1 e G2) presentes em alimentos, sementes, grãos ou rações, com extração por solventes orgânicos e Cromatografia em Camada Delgada (CCD).
PROCEDIMENTO:
Para o procedimento utilizamos 30g de paçoca adicionamos 10ml de água aquecida a 60°C, homogeneizamos. Adicionamos 100ml de clorofórmio e agitamos por 30 minutos. 
Passado os 30 minutos realizamos a extração do clorofórmio com papel filtro, obtendo a quantidade de 50ml de líquido extraído. 
Em um Erlenmeyer aquecemos a solução a 80°C na capela, até a completa evaporação do clorofórmio. Obtivemos uma resíduo de cor escura, ao esfriar adicionamos 50ml de álcool metílico observamos que não houve a mistura de ambos formando então um precipitado no fundo.
 Filtramos para não ocorrer o entupimento do funil de separação e obtivemos uma solução amarelada. Já no funil colocamos a solução filtrada, juntamente com 50ml de NaCl a 4%. Agitamos e acrescentamos 50ml de Hexano e logo podemos observar a separação das fases. As gorduras e interferentes ficaram na parte aquosa. 
Realizamos três vezes a extração, a cada uma delas a quantidade de resíduo ficou menor. 
Para a extração das aflatoxinas transferimos o extrato metanolico para o funil de separação adicionamos 50mm de clorofórmio e agitamos. Realizamos a separação por duas vezes e descartamos a fase orgânica, levamos para o aquecedor na capela até a evaporação do clorofórmio. 
Aplicamos a amostra na sílica deixando 12cm para o desenvolvimento.
Preparamos uma solução de clorofórmio-acetona (45:5)
 
AULA 5 
Título da Aula: Determinação de Nitrito em Alimento
OBJETIVO: Determinar os teores de nitrito como conservante em amostra de 
Salsicha para verificar se estão dentro dos Limites Máximos Permitidos segundo a 
Legislação Brasileira preconizados pelo Ministério da Agricultura.
PROCEDIMENTO:
Preparação das soluções 
Padronização
Em balões volumétricos de 100ml foram transferidos as quantidades de 1, 2,4,8, e 16ml de nitrito de sódio juntamente com 5 ml de solução tampão e completamos com água destilada.
Dessas soluções transferimos 10ml para 5 balões de 100ml e completamos com água destilada. Em 5 tubos de vidro adicionamos 5 ml de cada solução e acrescentamos 10ml de reagente cromogênico, 5ml de água destilada e 5ml de solução tampão. Deixamos em banho-maria por 30 minutos a 30°C. 
Após, utilizamos o espectrofotômetro para fazer a leitura. 
Desproteinização
Pesamos 10g de amostra de salsicha, picamos em pequenas partes, acrescentamos 5ml da solução 1 e 40 ml de água destilada.
 Aquecemos em banho-maria por 15 minutos, deixamos esfriar. Adicionamos 2 mL da solução II e 2 mL da solução III. Transferrmos a amostra para um balão volumétrico de 100 mL e deixamos em repouso por 30 minutos.
Completamos o volume com água destilada100 mL e agitamos o balão, após esse processo filtramos em papel livre de nitritos.
Pipetamos 10 mL da solução desproteinizada da amostra de alimento para um tubo de ensaio. Adicionamos 5 mL da solução tampão e 10 mL da solução de alfa-naftol.
Deixamos em banho-maria a 30°C, por 30 minutos, deixamos esfriar.
 Realizamos a leitura.
Y=ax+b
Na desproteinização, tem-se:
Y=0,005x +0,0001
0,030 = 0,005x + 0,0001
X=5,9999
Na determinação de nitrito, tem-se:
Y = 0,005x +0,0001
0,0040=0,005x+0,0001
X=0,7999