Microbiologia geral prática p1

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BIOSSEGURANÇA
Microbiologia
Geral 
EQUIPAMENTO DE PROTEÇÃO
INDIVIDUAL (EPI): 
EQUIPAMENTO DE PROTEÇÃO
COLETIVO (EPC):
 Medidas que visam prevenir,
minimizar ou neutralizar os riscos
inerentes ao trabalho que possam
comprometer a saúde dos homens,
animais e ambiente.
Jaleco, óculos, luvas, máscara, etc.
Bico de Busen, chuveiro de emergência,
lava-olhos, extintores, cabines de
segurança biológica, etc.
Inalação ou ingestão acidental
de microrganismos.
Contaminação direta (na pele
ou por cortes).
Cortes com vidrarias
quebradas ou queimadura a
partir de material aquecido ou
bico de bunsen.
RISCOS NAS AULAS PRÁTICAS
Manutenção dos
microrganismos vivos em meio
de cultura: Tubo de ensaio,
Placa de Petri, garrafa de Roux.
Preparo de meio de cultura ,
estocagem de reagentes etc:
Becker, balões de vidro,
erlenmeyer.
Medição de volume(precisão):
Proveta, pipeta (graduada,
volumétrica ou pasteur).
Esterilização por filtração: Funil
(vidro ou porcelana), filtro
milipore, kitsato.
Separação de líquidos de fases
diferentes: funil de separação.
Manipulação de
microrganismos: Bico de bunsen, 
alça de platina, alça de
drigalski.
NUTRIÇÃO
MICROBIANA
POR THABATA CAMILA
MATERIAS DE USO NO
LABORATÓRIO
Nutrientes: Substâncias úteis p/
o metabolismo, indispensáveis
p/ o crescimento,
desenvolvimento e manutenção
das funções vitais dor
organismos vivos. 
ESTERILIZAÇÃO
Meio de cultura sintético:
Ambiente nutritivo onde se
sabe exatamente a composição
química.
Meio de cultura complexo: Não
possui uma composição química
exata, não existindo uma
necessidade nutritiva específica
exigida pelo microrganismo.
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Meios de cultura: fornece os
nutrientes que os
microrganismos precisam.
Macronutrientes: São
necessários em maior
quantidade (C, N, S, P, H, O,
Mg, Fe, Ca, Na).
Micronutrientes: São
necessários em menor
quantidade ( Co, Zn, Mo, Cu,
Mn, Ni, W, Se).
Fatores de crescimento:
Aminoácidos (proteínas),
Vitaminas (funcionamento de
enzimas), Purina e Primidia
(DNA e RNA).
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CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE
CULTURA QUANTO A
CONSISTÊNCIA.
Sólidos ou semisólidos (Agar)
Líquidos (Caldo)
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CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE
CULTURA QUANTO AO USO
Meios básicos ou de uso geral;
Meios seletivos: Substância
mata organismos indesejados
p/ que se desenvolva o
microrganismo desejado.
Meios diferenciais: Substância é
metabolizada por um
microrganismo que vai
diferenciá-lo de outros (ex:
Agar sangue).
Meios de enriquecimento: São
preparações normalmente
líquidas que promovem o
aumento do número de
microrganismos.
Meios de triagem: Meios de
cultura que avaliam algumas
características metabólicas dos
organismos, permitindo
identificá-los e caracterizá-los.
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Meios de cultura de identificação:
Realizam-se provas bioquímicas p/
identificar determinadas
características fisiológicas e
peculiares de alguns
microrganismos.
6.
CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE
CULTURA QUANTO A
COMPOSIÇÃO QUÍMICA
Coagulação proteica: calor, luz,
formol, ácido fênico, álcool,
clorexidina.
Oxidação proteica: água
oxigenada, iodo, cloro,
permanganatos, fogo.
Inativação de enzimas: calor,
ácidos e bases fortes.
AÇÃO DE AGENTES FÍSICO-
QUÍMICOS
Esterilização: Destruição de
todas as formas de vida
microbiana, incluindo as
formas de resistência.
Desinfecção: Diminuição da
carga microbiana de superfície
inanimada.
Antissepsia: Diminuição da
carga microbiana da superfície
viva.
Assepsia: Conjunto de técnicas
necessária p/ não permitir a
contaminação microbiana.
ISOLAMENTO DE
MICRORGANISMOS EM
MEIO DE CULTURA
MÉTODOS DE CONTROLE
MICROBIANO
 
PROCESSOS FÍSICOS:
 
Calor seco:
Flambagem (esterilização)
Forno Pasteur (Preparo de
vidrarias).
Calor úmido:
Pasteurização: Processo térmico
que visa eliminar a microbiota
patogênica do leite. Neste
processo há redução também da
microbiota deteriorante, o que
prolonga sua conservação.
Tidalização: Consiste no
aquecimento repetido com
intervalo adequado
(esterilização fracionada).
Água fervente (5 min a 100° C)
Vapor saturado
Autoclavação: Uma autoclave é
um equipamento de laboratório
que usa vapor sob pressão para
matar bactérias, vírus, fungos e
esporos nocivos em itens.
Filtração:
Esteres inertes de celulose-
Filtros Milipore
Velas utilizadas em filtração
Radiações Ionizantes:
Raio X: Raio Gama- Causam
danos ao DNA ou RNA do
microrganismo, bem como
fazem a ionização da água do
citoplasma microbiano
alterando as reações químicas e
fisiológicas.
Radiação Gama: Esterilização
de utensílios plásticos,
descartáveis de uso hospitalar e
laboratório; ar, água,
superfícies de trabalho.
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TÉCNICAS DE ISOLAMENTO DE
BACTÉRIAS AERÓBIAS
Interferência na troca de íons
(paralisando o metabolismo):
detergentes e corantes.
DNA e RNA: Luz UV, calor.
PROCESSOS QUÍMICOS
Desinfetantes:
Fenóis: Coagulação proteica.
Álcoois: Desnaturação de
proteínas e dissolve os lipídios da
membrana.
Halogênios (formadores de sais):
Iodo, cloro, bromo
Metais pesados- Chumbo, zinco,
prata, cobre, mercúrio:
Combinam-se com proteínas,
provocando sua inativação.
Detergentes: Interferência na
troca de íons, paralisando o
metabolismo (desnaturação das
membranas, remoção de lipídios.
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FUMIGAÇÃO
Desinfetar utilizando gases,
vapores, fumaça ou
aspergindo líquido
Esgotamento do inoculo por
estria:
Espalhar a amostra contendo
microrganismos através de
estrias superficiais ao agar,
evitando perfurações.
Quanto mais estrias, maior
chance de conseguir colônias
isoladas (colônia pura).
Método "Spread plate"
(semeadura por
espalhamento):
Colônias crescem apenas na
superfície.
Coloca o conteúdo com a
pipeta na placa com meio
sólido e espalha na superfície
com a alça de vidro estéril,
depois se faz a incubação.
COLORAÇÃO
BACTERIANA
TÉCNICA DE ISOLAMENTO DE
BACTÉRIAS ANAERÓBIAS
 
CONFECÇÃO DO ESFREGAÇO
Método "Pour plate" (semeadura
em profundidade:
Colônias crescem na superfície
no interior do agar.
A amostra é depositada em uma
placa estéril, o meio estéril é
adicionado ao inoculo e depois é
incubado. 
TÉCNCAS DE COLORAÇÃO 
BACTERIANA
Jarra de Anaerobiose de Zeissler:
Placas estriadas são colocadas
dentro da jarra, retirando o
oxigênio por sucção com bomba
de vácuo e é fechada a torneira
de vidro.
Imediatamente abrir a torneira
de vidro e injetar CO2, fechando
novamente a torneira.
Técnica GASPAN: Oxigênio é
removido sendo transformado em
água
Paládio(catalizador)
Envelope para a liberação de H2
e CO2.
Envelope indicador de
anaerobiose
Meio de Tarozzi:
Meio contendo agentes redutores
que proporcionam ambiente
anaeróbico
Finalidade: Manutenção de 
 bactérias anaeróbias vivas
Vaspar: vedação do tubo
contendo vaselina + parafina
PAREDE CELULAR BACTERIANA
Gram Positiva: Camada de
pepideoglicano espessa e rígida
(coloração roxa)
Gram Negativa: Camada fina de
pepideoglicano + membrana
externa (exclusiva de bactéria
gram neg.)- Coloração vermelha.
Coloração Gram
Diferencia Gram positiva
(roxa) de Gram negativa
(vermelha), evidenciando a
morfologia bacteriana.
Coloração simples com fucsina:
Evidencia a morfologia
bacteriana mas não diferencia
gram positiva de gram
negativa.
Técnica com nigrosina:
Nigrosina não é um corante
mas evidencia a morfologia
pois impregna nos espaços
entre as células.
A partir da colônia ou suspensão
líquida
direto da amostra 
esfregaço: Espalhamento e
fixação