Propriedades Físico químicas das biomoléculas

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Atividade 4 – Propriedades Físico químicas das biomoléculas
Objetivo:
Evidenciar o comportamento particular de cada um dos grupos de biomoléculas em relação a variáveis como pH, temperatura, força iônica, e formação de complexos coloridos.
Fundamento Teórico
Formação de complexos coloridos
As biomoléculas reagem com uma variedade de compostos formando produtos coloridos. As reações de caracterização podem detectar a presença de grupos funcionais particulares como ligações peptídicas, grupos amino, carboxila; grupos redutores, etc..
1. Reação da ninhidrina
O grupo α-amino de aminoácidos livres, grupos amino terminais de peptídeos e proteínas, e grupo ε-amino da lisina (figura 1) reagem com a ninhidrina formando um produto de cor violeta, quando a solução é aquecida (figura 2). A intensidade da cor é proporcional à concentração de aminoácidos. Por este motivo a técnica é utilizada para determinação quantitativa. Os iminoácidos (prolina e hidroxiprolina) formam produtos amarelos.C
Extremidade aminoterminal
Extremidade carboxiterminal
A
B
Figura 1: (A) Estrutura de um aminoácido, (B) Aminoácido lisina, (C) Oligopeptídeo.
Figura 2. Reação da ninhidrina com aminoácidos
TÉCNICA 1. Reações de coloração
Preparar baterias de 4 tubos para cada ensaio. Estes tubos serão, respectivamente, para água (tubo A), proteína (B), açucares (C) e lipídeos(D)
1. Reação da ninhidrina
Em cada tubo adicionar 2 mL de ninhidrina + 0,2 mL sol de biomoléculas 10% (v/v), levar ao banho maria fervente por 5 min. Resultado:
Analise os resultados e responda às perguntas, justificando suas respostas
1) Por que somente o tubo B apresentou coloração azul?
2) Se você tivesse um tubo E, contendo solução de prolina ou hidroxiprolina, que cor você esperaria aparecer?
3) Justifique sua resposta (dica: compare a estrutura destes aminoácidos com outros aminoácidos).
TÉCNICA 2. Reações de precipitação
Preparar baterias de 4 tubos para cada ensaio. Estes tubos serão respectivamente para água (tubo A), proteína (B), açucares (C) e lipídeos(D)
Responda as perguntas (previsão) e justifique sua resposta.
1) O que aconteceria se todos os tubos fossem fervidos em banho-maria por 3 minutos? 
2) Se adicionarmos água nos tubos, o que deve acontecer?
Referências
BRADFORD, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. v. 72, p. 248–254, 1976.
DRUER, R. L; LATA, G. F. Experimental biochemistry. New York: Oxford University Press, 1989. 514 p.
LEHNINGER, A. Princípios de bioquímica. 3. ed. São Paulo: Savier, 2002. 970 p.
MATHEWS, C. K.; VAN HOLDE, K. E. Biochemistry. Red Wood City: The Benjamin Cummings, 1990. 1129 p.
MORRIS, C. J. O. R.; MORRIS, P. Separation methods in biochemistry. 2. ed. London: Pitman Publishing, 1976. 1045 p.
Informações complementares
Lista de reativos
1. Solução de proteínas 10% (p/v)
2. Solução de sacarose ou amido 1%
3. Azeite vegetal 10% em cloroformio
4. Solução de ninhidrina 0,1% (p/v)
PREPARO DOS REAGENTES
Amostra de proteínas
Preparar uma solução de clara de ovo a 10% (v/v) em solução salina (NaCl 0,9g/100 mL)
Amostra de carboidratos
Prepare uma solução 1% p/v. 1 grama de glucose 100 mL de água.
Amostra de lipídeos
Será azeite de cozinha comum dissolvido ao 10% v/v em etanol absoluto
Solução de ninhidrina
Dissolver 100 mg de ninhidrina em 100 mL de tampão fosfato 0,01 mol/L pH 7. Conservar em frasco escuro em geladeira.