6 - Bioquímica - estágio

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Bioquímica - estágio
 A bioquímica estuda os processos química nos organismos vivos. Como a função metabolica dos carboidratos (fonte primaria de ATP), proteínas, lipidos, glicose (perfil glicêmico) e outras biomoleculas (Ferri, 2013) 
1. Glicose 
A glicose aborda um complexo de doenças chamado diabetes, que pode ser dividida em 1A 1B, diabetes 2, diabetes gestacional e diabetes adquirida. Temos a hemoglobina glicada que é a glicose acoplada na hemoglobina na qual os valores são denominados entre normoglicêmico (>100dl), pré diabético (100 a 125 dl) e diabético 126 ou maior. Temos também a glicose enzimática (absorbância) a qual utiliza de método colorimétrico através do espectrofotômetro. 
· Glicose (procedimento) 
· O perfil glicêmico é realizado através do reagente que disponibiliza todos os procedimentos que devem ser realizados em sua bula. 
· Iniciamos com a coleta sanguínea em tubo cinza levando para a centrifuga por 10 minutos a 2.500RPM e seguimos para a preparação do procedimento; 
· Utilizaremos 3 tubos, no primeiro tubo é adicionado 1ml do reagente de trabalho (R1); 
· No segundo tubo 1ml de R1 + 1 ml do padrão (R2); 
· No terceiro tubo 1ml de R1 + 1ml da amostra; 
· Depois levamos os 3 tubos para o banho maria a 37º por 10 minutos; 
· Ajustamos o comprimento de ondas do espectrofotômetro para 500 nanometros e precisamos realizar a leitura em até 60 minutos depois que as amostras saem do banho maria; 
· Depois de anotar os valores no espectrofotômetro realizamos os seguintes cálculos: 
Resultado do procedimento 
Primeiro tubo (branco) 0,000 
Segundo tubo (padrão) 0,220 
Terceiro tubo (amostra) 0,400 
Realizamos o calculo do fator de calibração (valor da concentração padrão 
vem na bula) 
FC = concentração do padrão / absorbância padrão 
FC = 100/0,220 
FC = 454,5 
Então realizamos o calculo da glicose 
G = absorbância X FC 
G= 0,400 X 454,5 
G = 181,8 
G = 182 mg/dl 
 
2. Perfil lipídico 
O perfil lipídico consiste nos valores de VLDL, LDL, HDL, triglicerídeos e colesterol total. 
· Triglicerídeos (procedimento) 
· Primeiro realizamos a coleta sanguínea em tubo vermelho e o levamos para a centrifuga por 10 minutos a 2.500RPM; 
· Usaremos 3 tubos, os quais iremos preencher de acordo com a bula do triglicerídeo; 
· No primeiro tubo adicionamos 1ml do reagente 1(R1); 
· No segundo tubo adicionamos 1ml do R1 + 10microlitros do R2 (padrão); 
· No terceiro tubo adicionamos 1ml do R1 + 10ml da amostra; 
· Levamos ao banho maria por 5 minutos á 37°; 
· Levamos ao espectrofotômetro; 
· Com os resultados realizamos os seguintes cálculos: 
Resultado do procedimento 
Concentração padrão = 200 
Absorbancia padrão = 0,226 
Calculo do fator de calibração 
FC = concentração padrão / absorbância padrão 
FC = 200/0,226 
FC = 884,9 
Calculo do triglicerídeo 
T = Absorbância da amostra x FC 
T = 0,326 X 884,9 
T = 288,4 mg/dl 
· Colesterol total (procedimento) 
· Adicionamos 1 ml de R1 + 10 microlitros da amostra em um tubo; 
· Levamos para o banho maria por 5 minutos á 37°; 
Resultado do procedimento 
Concentração padrão = 200 
Absorbância padrão = 0,495 
Absorbância da amostra = 0,300 
Calculo fator de calibração 
FC = 200/0,495 
FC = 404,4 
Calculo do colesterol 
C = absorbância da amostra X FC 
C = 0,300 X 404,4 
C = 121,32 
· HDL 
· Primeiro ponto é que no HDL utilizamos R1, R2 e calibrador, apenas o calibrador não vem pronto, então precisamos iniciar com ele; 
· Precisamos adicionar 1ml de agua destilada no frasco do calibrador e aguardar 30 minutos antes de realizar os procedimentos; 
· Utilizaremos 3 tubos para esse procedimento, no primeiro tubo adicionamos 750 microlitros de R1 + 10 microlitros da amostra; 
· Levamos ao banho maria á 37° por 5 minutos e então adicionamos 250 microlitros do R2; 
· No segundo tubo adicionamos 10 microlitros de agua destilada + 750 microlitros de R1; 
Resultado do procedimento 
FC = 50/0,111 
FC = 450,45 
HDL = FC X absorbância da amostra – absorbância branco 
HDL = 450,45 x 0,015 – 0,002 
HDL = 6,75 – 0,002 
HDL = 6,74 
· LDL 
O LDL é obtido através do resultado do triglicerídeos, colesterol e HDL, realizando o seguinte calculo 
Resultado do procedimento 
LDL = colesterol – ( HDL + triglicerídeo / 5) 
LDL = 121,32 – (6,74 + 288,4 / 5) 
LDL = 121,32 – (6,74 + 57,68) 
LDL = 121,32 + 64,42 
LDL = 185,74 
· VLDL 
Para saber o valor do VLDL precisamos do valor de triglicerídeo para realizar o seguinte calculo: 
Resultado do procedimento 
VLDL = triglicerídeos / 5 VLDL = 57,68 
3. Perfil hepático 
O perfil hepático avalia a função do fígado, que pode ser avaliada através do coagulograma, bilirrubina direta e indireta, proteína total e albumina. Avalia disfunções como a colestase que tem alterações na fosfatos alcalina e gama GT, e também parintahepatico que tem alterações nos valores de ALT e AST. 
· GAMA GT / TGO 
· Utiliza o método cinético, para iniciar precisamos preparar o reagente da seguinte forma: 
· 4 partes de R1 (tampão) para 1 parte de R2 (substrato, o que equivale a 800microlitros de R1 mais 200 microlitros de R2; 
· Precisamos de 2 tubos, no primeiro Adicionamos apenas água; 
· No ssegundo tubo Adicionamos 100 microlitros da amostra mais 1000 microlitros do reagente; 
· Incubados em banho Maria a 37° por 1 minuto, depois Realizamos a absorbancia inicial (A0); 
· E a acada 60 segundos Realizamos uma nova leitura seguindo A1, A2 e A 
· Com os resultados Realizamos o seguinte calculo: 
· 
= [(A0 - A1) + (A1 - A2) + ( A2 - A3)] /3 
 
4. Função hepática 
· Proteinas 
· A proteína total é avaliada no espectrofotômetro os nanômetros podem variar de 540 a 560 
· Para esse procedimento precisamos de 3 tubos; 
· No primeiro Adicionamos 1 ml de R1; 
· No segundo Adicionamos 1 ml de R1 + 10 microlitros da amostra; 
· No terceiro Adicionamos 10 microlitros de STD + 1 ml do R1 
· Depois de homogeneizar, Incubados a temperatura ambiente por 10 minutos antes de levar para o espectrofotometro. 
Resultado do procedimento
FC = concentração STD / absorbancia STD 
FC = 5/0,484 
FC = 10,33 
Tubo branco 0,000 
Tubo amostra 0,603 
Tubo padrão 0,484 
Calculo da proteína 
P= absorbancia da amostra X FC 
P= 0,603 X 10,33 
P= 6,2 
 
 
· Albuminas 
· Para a realização desse procedimento temos que colocar o comprimento de ondas em 620 nanometros, enquanto a amostra vai para a centrífuga por 10 minutos a 2.500 RPM; 
· Utilizaremos 3 tubos, os quais o primeiro Inserimos 1 ml de R1; 
· No segundo Adicionamos 1 ml de R1 + 5 microlitros da amostra; 
· No terceiro Adicionamos 1ml de R1 + 5 microlitros de padrão; 
· Homogeneizamos e Incubados em temperatura ambiente por 10 minutos;  Depois dos 10 minutos temos até 30 minutos para realizar a leitura. 
Resultado do procedimento 
Concentração padrão 4 
Absorbancia branco 0,000 
Absorbancia da amostra 0,835 
Absorbancia padrao 0,270 
FC= concentracao padrão/ absorbancia padrão 
FC= 4/ 0,270 
FC= 14,81 
Albumina = FC x absorbancia da amostra 
A= 14,81 x 0,835 
A = 12,3 
5. Bilirrubina 
Na Bilirrubina temos a indireta que é a não conjugada e a direta que é conjugada e geralmente está elevada em anemias, valor alto significa processo patológico. 
· Bilirrubina procedimento 
· Utilizamos o soro do sangue do paciente para esse procedimento; 
· Precisaremos de 4 tubos para fazer o processo, no primeiro tubo denominado de branco total. Adicionamos 1.000 microlitros de R1 + 50 microlitros de amostra; 
· No segundo tubo denominado de total Adicionamos 1.000 microlitros de R2 + 30 microlitros de R3 + 50 microlitros de amostra; 
· No terceiro tubo denominado de branco indireta Adicionamos 1.000 microlitros de R1 + 50 microlitros de amostra; 
· No quarto tubo denominado de direta Adicionamos 1.000 microlitros de R1 + 30 microlitros de R3 + 50 microlitros de amostra; 
· Deixamos as amostras por 5 minutos no escuro e levamos ao espectrofotometro para realizar os cálculos. 
Resultados do procedimento 
Para bilirrubina total utilizamosos resultados de 
Absorbancia total 0,280 
Absorbancia branco total 0,620 
BT = AT – ABT X 25,0 
BT = 0,280 – 0,620 X 25,0 
BT = 0,34 X 25,3 
BT = 8,5 
Para bilirrubina direta utilizamos os resultados de 
Absorbancia direta 0,969 
Absorbancia branco direta 0,027 
BD = AD – ABD X 15,0 
BD= 0,979 – 0,027 X 15,0 
BD= 6,942 X 15,0 
BD = 14,13 
6. Creatinina 
É um produto da creatinina muscular, quanto mais creatinina mais massa muscular. 
· Creatinina procedimento 
· Utilizamos 3 tubos para esse procedimento, Antes de iniciar precisamos formar o reagente de uso que equivale a 800 microlitros de R2 mais 200 microlitros de R1 no primeiro Adicionamos 1.100 microlitros de água destilada; 
· No segundo Adicionamos 1.000 microlitros de reagente de uso + 
100 microlitros de amostra; 
· No terceiro Adicionamos 1.000 microlitros de reagente de uso + 
101 microlitros de padrão; 
· Incubados por 30 segundos em banho Maria e depois Realizamos a leitura; 
· Depois de mais 2 minutos Realizamos a segunda leitura 
C = absorbancia 2 – absorbancia 1 X FC 
FC = 3/ ABST2 - ABST1