Efeito de Sacarose e Amido em Biofilmes

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EFEITO DE SACAROSE, AMIDO E SUA ASSOCIAÇÃO NA BIOARQUITETURA 
DE BIOFILMES IN VITRO 
 
 *Rayane R Araújo; AA Del Bel Cury; JA Cury; LMA Tenuta; MM Bertolini; 
YW Cavalcanti; WJ da Silva 
Laboratório de Bioquímica Oral - Faculdade de Odontologia de Piracicaba - UNICAMP 
 
B0373 
• Na dieta moderna sacarose e amido são usados simultânea ou 
intermitentemente e tem sido sugerido que amido poderia aumentar o 
poder cariogênico de sacarose (Lingstrom et al., 2000; Ribeiro et al., 
2005). 
• Uma das hipóteses para explicar o efeito dessa associação é a 
produção diferenciada de polissacarídeos extracelulares a partir da 
sacarose quando hidrolisados de amido estão disponíveis na cavidade 
bucal (Bowen & Koo, 2011). Para avaliar o efeito dessa associação em 
condições experimentais controladas, devem ser usados modelos de 
biofilme contendo espécies bacterianas implicadas com o metabolismo 
direto ou indireto de amido e sacarose. 
Apoio: CNPq 
rayane.r.araujo@gmail.com 
FOP 
 Desenvolver um modelo de biofilme in vitro composto por 
A. naeslundii (ATCC 12104), S. gordonii (ATCC 35105) e S. mutans (UA 
159), bactérias que metabolizam amido, expressam a proteína 
ligadora de α-amilase e utilizam hidrolisados de amido. Neste estudo 
preliminar, sacarose foi utilizada como fonte de carboidratos a fim de 
avaliar a aplicabilidade do modelo na avaliação da estrutura do 
biofilme triespécie formado. 
 Os resultados demonstraram a possibilidade de 
desenvolvimento de um biofilme tri-espécie e avaliação de sua 
estrutura, para futuramente avaliar o potencial cariogênico de 
carboidratos da dieta. 
Sacarose 
10% 
NaCl 0,9% 
Microscopia Confocal a Laser - corante Live/Dead 
Sg - 48 h 
Biofilmes monoespécie 
(Reconstrução 3D) 
Trio - 24 h 
• Estudo in vitro baseado no modelo de crescimento de biofilme de 
Ccahuana-Vásquez & Cury, 2010. 
• Projeto aprovado pelo CEP-FOP-UNICAMP (uso de saliva humana) 
(#035/2012). 
• Blocos de esmalte com a presença de película adquirida foram utilizados 
como substrato para o desenvolvimento de biofilme tri-espécie, sendo 
submetidos a episódios diários de exposição a sacarose, simulando 
períodos de fartura e miséria. 
• Espécies bacterianas: Streptococcus mutans (UA159); Streptococcus 
gordonii (ATCC35105) ; Actinomyces naeslundii (ATCC12104). 
• Desafio Cariogênico : Sacarose 10% durante 3 minutos - 8 vezes ao dia 
Hibridização in situ por Fluorescência – FISH 
Biofilme tri-espécie após 24 h de desenvolvimento. Células coradas em verde são 
An ou Sg, podendo-se diferenciar esses microrganismos de acordo com a 
morfologia. Células coradas em azul escuro e azul claro são Sm (corte no eixo Z). 
An 
Sm 
Sm 
Sg 
Biofilme tri-espécie após 48 h de desenvolvimento (corte no eixo Z) 
• Análises em Microscópio Confocal a Laser (Leica SP5) 
• Análise Live/Dead: 
• Coloração do Biofilme com Corante Live/Dead 
(corantes Propidium Iodide e SYTO-9) 
• Análise por hibridização in situ (FISH) 
• Biofilme sobre os blocos foi fixado (imersão em 
paraformaldeído) e permeabilizado (imersão em 
lisozima, seguido de lavagem e armazenamento a 
4ºC) 
• Hibridização com sondas específicas para os 3 
microrganismos (ligação ao RNAr) 
S.mutans 
A. 
naeslundii 
S. gordonii Três 
espécies 
Blocos de esmalte 
bovinos 
(7 x 4 x 1 mm) 
30 min, 37°C, 60 rpm 
Formação da película 
salivar adquirida 
Blocos imersos em 
meio ultrafiltrado (low 
molecular weight) contedo 
0,1 mM de glicose 
2mL/poço 
Exposição a sacarose 
8x/dia 
Análises após 24 e 48 horas 
An - 48 h 
Sg - 48 h Sm - 48 h 
Biofilme Tri-espécie após 24 h 
de desenvolvimento. 
Microcolônias e células 
esparsas aderidas ao substrato 
(corte no eixo Z) 
Trio - 48 h 
Biofilme Tri-espécie 
após 48 h de 
desenvolvimento 
(reconstrução 3D)