Histologia Microscopia pdf

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AULA TEORICA- Histologia 
Microscopia e técnicas de coloração 
 Histórico da microscopia: 
 1590- Hanseen: microscópio composto; 2 lentes; ampliação de 9x 
 1665- Hooke: microscópio composto de 3 lentes 
 1667 a 1722- Antonie Van Leeuwenhoek; ampliação 200x 
 Tipos de microscópios: 
 Existem vários tipos de microscópio opticos que são diferenciados pelo tipo 
de luz usada e de como essa fonte de luz é utilizada 
 A qualidade de uma imagem não depende somente da capacidade de 
aumento da lente, mas também da sua resolução 
 Poder de resolução: menor distancia que possibilita ver dois objetos 
separados 
 
 
 
 
 
MO= micrômetro (μm) 
ME= nanômetro (ηm) e angstrom (Å) 
1 μm = 10-3mm = 10-6m 
1 ηm = 10-3 μm = 10-9m 
1 Å = 10-1 ηm = 10-4 μm = 10-7 mm = 10-10m 
 Microscópio de luz (optica/ fotonica/ composta): 
luz visível, mais utilizada, lentes 
condensador+ ocular+ objetiva 
 Microscópio de polarização: luz visível, 
utiliza dois filtros polarizadores 
no caminho da luz, acima 
(analisador) e abaixo da amostra 
(polarizador), esses filtros 
modificam a luz, (colágenos 
fibrilares, celulose, tubulina, etc) 
 
 Microscópio de contraste de fase: luz visíveis, 
estruturas sem coloração previa, 
imagem possui pequenas 
alterações no comprimento do 
trajeto óptico (índice de 
refração), as próprias diferenças nos 
índices de refração das diferentes 
partes promovem a visualização, 
estrutura mais claras e mais escuras, 
bidimensional, analise de estruturas 
vivas, cultura de células, exames 
parasitológicos, esfregaços 
sanguíneos, raspagens mucosas 
(imagens de seres vivos e não 
mortos, por isso não há coloração 
que nem nos outros); 
 Microscópio de contraste de fase de interferência: luz 
visível, estruturas sem coloração 
previa, tridimensional 
 Microscópio de fluorescência: luz UV + filtro 
especiais, usados para verificar a fluorescência natural (ex Vitamina A) ou 
induzida com corante artificial (maior custo, não muito vantajoso), absorção 
 
 
 
 
 
da energia luminosa em um comprimento 
de onda a partir d marcação com corantes 
fluorescentes das moléculas que se quer 
visualizar (DNA, RNA, cito química normal e 
patológica, imunocitoquimica, hibridação “in 
situ” 
- PODEM TER FLUORESCENCIA NATURAL OU INDUZIADA!! 
 
 Microscópio eletrônico de transmissão: feixe de 
elétrons, imagem em preto e branco, 
bidimensional, ampliação de 400.000x, 
ultraestrutura celular (organelas, 
bactérias e vírus); imagem estática, 
estruturas mortas 
 
 Microscópio eletrônico de varredura: feixe de 
elétrons, imagem preto em branco, 
tridimensionais, imagens da topografia 
superficial de amostras 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Microscopia óptica: 
 
 Partes ópticas: condensador, diafragma, 
objetivas, oculares, fonte luminosa 
 Partes mecânicas: pé/base, coluna/braço, 
mesa/platina/platô, revolver, 
tubo/canhão, charriot, macrométrico, 
micrométrico 
 Lentes objetivas e suas ampliações: 10x4= 40x; 
10x40=400x; 10x10=100x; 10x100=1000x 
(óleo de imersão) 
 Como são feitas as lâminas: 
 Coleta 
 Fixação: utilização do formaldeído- parar o metabolismo, evitar 
degradação enzimática, eliminar microrganismos, endurecer o tecido, 
preservar os componentes celulares; depois de 24 ou 48h lavar com 
agua e em outro Becker com álcool ocorrera a desidratação e murchar 
o tecido (24hrs) 
 Diafanização/clareamento: em um novo becker xilol para deixar o 
material translúcido 
 Inclusão: uso da parafina, vai deixar o material duro para facilitar o corte 
 Microtomia: cortes extremamente finos 
 Remoção da parafina 
 Reidratação 
 Coloração – simples (1 corante) e diferencial (2 ou mais); na histologia 
são sempre utilizados dois ou mais corantes e sempre em contraste 
(um basófilo e outro acidófilo) 
CORANTE BÁSICO/BASÓFILO: hematoxilina, azul de toluidina, azul metileno (vai corar estruturas 
acidas- núcleo da célula) - roxo 
 
CORANTE ÁCIDO/ACIDÓFILO: eosina, fuscina ácida, Orange G (vai corar estruturas básicas 
(citoplasma da célula) - rosa 
 Montagem: corte da amostra, corante, lamínula 
 Visualização no microscópio óptico