PRÁTICA 10 - RELATÓRIO DE BIOQUIMICA

Prévia do material em texto

UNIVERSIDADE FEDERAL DO VALE DO SÃO FRANCISCO 
 CURSO DE GRADUAÇÃO EM ZOOTECNIA 
 
 
 
 
LAIANE DEVESA ARAÚJO 
 
 
 
 
 
 
AULA PRÁTICA DEMONSTRATIVA 
 Dosagem de Carboidratos Solúveis em Água – Método de DuBois 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PETROLINA 
2022 
 
LAIANE DEVESA ARAÚJO 
 
 
 
 
 
AULA PRÁTICA DEMONSTRATIVA 
Dosagem de Carboidratos Solúveis em Água – Método de DuBois 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PETROLINA 
 2022 
 
 
OBJETIVO(S): 
 
 
 Construir uma curva padrão para dosagem de carboidratos solúveis. 
 Encontrar a equação da reta e o coeficiente de correlação (r2). 
 Determinar a concentração de carboidratos solúveis em amostras de silagem de cana 
de açúcar. 
 
INTRODUÇÃO 
 
 
O método de DuBois (DuBois et al, 1956)1 baseia-se na carbonização dos açúcares 
pelo ácido sulfúrico e posterior complexação dos produtos pelo fenol, formando 
compostos coloridos e bastante estáveis. A quantidade de açúcares que estarão 
presentes na amostra será responsável pela coloração final da solução, quanto maior 
a massa destes compostos, tanto mais intensa será a coloração obtida na solução 
final. 
 
Método Lane-Eynon 
 
O método de Lane-Eynon, também conhecido como Método de Fehling, consiste na 
redução completa dos íons cúpricos do reagente de Fehling (uma solução de ácido 
tartárico com cobre alcalino) a óxido cuproso, causada pelos açúcares redutores. Esta 
reação forma um precipitado vermelho de óxido cuproso. 
A solução de Fehling é um teste químico usado para diferenciar carbohidratos solúveis 
em água de cetonas, sendo também um teste para monossacáridos. O teste fora 
desenvolvido pelo químico alemão Hermann von Fehling, em 1849. O composto a 
testar é adicionado à solução de Fehling e a mistura é aquecida. 
Teste de Fehling - Consiste num teste químico para determinar o carácter redutor de 
uma substância orgânica (substância que, em reação química, cede eletrões a outra 
substância). Este teste é geralmente utilizado para detetar açúcares redutores 
(monossacarídeos, como a glucose, e dissacarídeos, como a maltose e a lactose) e 
aldeídos. 
O Método de Lane-Eynon baseia-se na redução de volume conhecido do reagente de 
cobre alcalino (Fehling) a óxido cuproso. ... A solução deve ficar constantemente em 
ebulição durante a titulação , porque o Cu2O formado pode ser novamente oxidado 
pelo O2 do ar e muda a cor novamente para azul. 
 
Teste de Molish 
O teste de Molisch é um teste químico sensível para a presença de carboidratos. Este 
teste baseia-se na desidratação do carboidrato pelo ácido sulfúrico ou pelo ácido 
clorídrico, dando origem a um aldeído, que sofre condensação com duas moléculas 
de fenol, resultando em compostos com cor vermelha ou púrpura. Se o teste der 
positivo você vai ver a mudança de cor na junção das duas camadas e a formação de 
um produto de cor púrpura na interface destas, indicando a presença de carboidratos. 
O teste funciona em todos os tipos de carboidratos, sendo que os monossacarídeos 
dão um teste positivo rápido; os dissacarídeos e os polissacarídeos reagem de uma 
forma mais lenta. 
 
Teste de Seliwanoff 
 
É um teste químico que permite distinguir aldoses de cetoses. Se um açúcar contiver 
um grupo cetona, é uma cetose; se, por outro lado, contiver um grupo aldeído, é uma 
aldose. Este teste baseia-se no princípio de que, quando aquecidas, as cetoses 
sofrem desidratação muito mais rapidamente que as aldoses. Quando o reagente é 
adicionado a uma solução contendo uma cetose, a cor da solução muda para 
vermelho (teste positivo). Quando adicionado a uma solução contendo uma aldose, a 
cor muda mais lentamente para rosa. 
 
Teste de Bial 
 
É um teste qualitativo bem simples e pode ser feito como quantitativo, alterando 
algumas medidas. Esse teste é usado para distinguir pentoses de hexoses; essa 
distinção é baseada na cor que se desenvolve na presença de orcinol e de cloreto de 
ferro (III). Nesse teste, o Reagente de Bial desidrata as pentoses para formar furfural, 
que depois reage com o orcinol e o íon de ferro presente no 
reagente de teste para produzir um produto de tom verde azulado. Caso a solução de 
teste contenha hexoses ao invés de pentoses, o reagente vai formar o 
hidroximetilfurfural, que pode ter uma solução de cor verde, vermelha, cinza ou 
marrom-lama; este tom de verde é facilmente distinguível do tom verde encontrado 
nas pentoses. Um teste positivo é indicado pela formação de um produto bem azulado, 
do contrário, todas as outras cores indicam um resultado negativo para pentoses. 
Observe que as hexoses geralmente reagem para formar produtos verdes, vermelhos 
ou marrons. 
 
 
 
Método de antrona 
 
 
A reação de antrona se baseia na ação hidrolítica e desidratante do ácido sulfúrico 
concentrado sobre os carboidratos. Quando a reação é levada a efeito com 
carboidratos com ligações glicosídicas, estas são hidrolisadas e os açúcares simples 
desidratados para furfural ou hidroximetilfurfural. O método Antrona é utilizado para a 
determinação quantitativa de carboidratos, que acontece devido uma reação 
colorimétrica. 
 
 
Método Munson Walker 
 
Método gravimétrico baseado na redução de co bre pelos grupos redutores dos 
açúcares O método se ba seia na reação de dois reagentes com os açúcares 
redutores, f ormando um precipitado de óxido de cobre. O precipitado é f iltrado 
num cadinho, lavado com água quente, seco e pesado. A reação não é este 
qui métrica e existem tabelas que relacionam o peso do precipitado do óxido d 
e cobre com a quantidade de açúcar para cada tipo de açúcar, ou através da 
calibração com soluções padrão de cada a çúcar. O mais comum é expressar 
os resultados de açúcar total e redutor em termos de glicose. 
 
 
 
ADNS (ÁCIDO DINITROSALICICLICO) 
 
A determinação de açúcares reduto res é uma atividade de rotina em diferentes 
lab oratórios de pesquisa. O método colorim étrico mais amplamente utilizado pa 
ra dete cção de açúcares redutores utiliza o reativo DNS, que contém ácido 3,5 
-dinitrosalicílico como agente oxidante, o qual diante de glicose ou f rutose se 
reduz a um composto corado (ácido 3 -amino-5-nitrosalicílico) que pode se r 
detectado por espectrofotometria a 540 nm. A análise é simples e robusta, 
permitindo em um dia de trabalho a quantificação de um grande número de 
amostras 
 
Método de Somogyi-Nelson 
 
A determinação de açúcares pelo método de Somogyi-Nelson é baseada nas 
propriedades redutoras dos açúcares, pela reação da hidroxila hemiacetálica dos 
monossacarídeos. A diferença dessa metodologia em relação a outros métodos de 
determinação de açúcares redutores é a sensibilidade do método, cuja faixa de 
determinação situa-se entre 25 e 500 mg/L. Esta reação não é específica, podendo 
sofrer interferência de outros componentes redutores. Açúcares redutores contêm um 
grupo aldeído ou cetônico que, em soluções alcalinas, reduzem íons de cobre, prata, 
bismuto e mercúrio a compostos de valência menor. O princípio do método de 
Somogyi-Nelson baseia-se na redução de Cu++ a Cu+ pelo açúcar redutor com 
formação Cu2O, que reduz o arsenomolibdato e produz um composto de coloração 
azul (Nelson, 1960). O método original foi modificado a partir de alterações de vários 
métodos, inclusive o colorimétrico, em que o cobre é reduzido formando compostos 
coloridos que podem ser quantificados por espectrofotometria. 
 Os glicídios redutores aquecidos em meio alcalino,transforma -se em edióis que 
reduzem o íons cúprico presente à cuproso. O oxido cuproso assim formado 
 
, reduz a reação arsênio-molibídico à oxido molibdênio de coloração azul, cuja 
intensidade da cor é proporcional a quantidade de açucares redutores existentes 
na amostra.Método de Luff Schoorl 
 
O método Luff-Schoorl é um método para determinar o nível de açúcares redutores 
em uma amostra. Baseia-se na redução dos íons cobre(II) em meio alcalino pelos 
açúcares e posterior titulação do reagente em excesso adicionado. Na análise de 
alimentos, este método pode ser usado para determinar os monossacarídeos mais 
importantes, D-glicose e D-frutose, bem como os dissacarídeos mais importantes D-
lactose e D-maltose. Açúcares não redutores, como a D-sacarose, só podem ser 
quantificados se Puderem ser clivados em monossacarídeos redutores por hidrólise 
ácida. 
 
Método complexométrico de EDTA 
 
Os açúcares presentes na amostra reagem com uma solução de cobre,antes e depois 
da inversão. Os íons Cu2+ se reduzem a Cu+, que precipitará como Cu2O. O excesso 
de cobre que não reagiu é determinado, posteriormente porcomplexiometr ia com 
EDTA. 
Representa uma técnica de análise volumétrica que visa a formação de um complexo 
de coloração, na reação entre o analito e o titulante, sendo usado para indicar o ponto 
final da titulação um indicador. Titulações complexométricas são extrememente úteis 
para a determinação de diversos íons metálicos em solução. Um indicador capaz de 
produzir uma pronunciada mudança de coloração é usualmente usado para detectar 
o ponto final da titulação complexiométrica. 
 
A análise complexométrica ou complexometria compreende a titulação de íons 
metálicos com agentes complexantes ou quelantes, sendo um agente quelante 
qualquer estrutura, da qual façam parte dois ou mais átomos possuidores de pares de 
elétrons não utilizados em ligações químicas primárias, mas sim, usados como "imãs" 
eletrostáticos para se prenderem a íons metálicos. Dentre os complexantes mais 
comuns podemos citar a água, responsável (ligada ao íons cobre) pela cor azul das 
soluções de sais de cobre, a amônia (quando substitui a água ao redor do cobre, 
produz cor azul mais intensa) e o EDTA (ácido etilenodiaminotetracético (que com o 
cobre, rivaliza a amônia)”1. 
 
O agente complexante de maior importância é o EDTA (ácido 
etilenodiaminotetracético), que forma complexos muito estáveis com vários íons 
metálicos. Ainda nestas titulações é muito importante o ajuste do pH do meio em 
análise, uma vez que em meio ácido, os íons H+ competirá com os íons metálicos na 
quelação e em meio alcalino os íons metálicos tendem à formação de hidróxidos 
alcalinos pouco solúveis. Como a ação máxima complexante do EDTA é em meio 
fortemente alcalino, muitas vezes há necessidade de adição de um agente 
complexante auxiliar nas titulações. 
 
 
 
(solução mãe) 
MATERIAL E MÉTODOS: 
 
 
 
 Solução de Glicose (1 mg 
 mL-1) 
 Água Milli - Q 
 Reagente de Fenol 80% 
 H2SO4 P.A. 
 Cubeta de plástico 
 Espectrofotômetro Visível 
Material 
 
 
 
 Vórtex 
 Tubo Falcon 
 Amostra de silagem de cana de açúcar 
 Pipeta Automática 
 Estante para tubos de ensaio 
 Ponteiras 
 
 
METODOLOGIA 
 
 
 Preparou- se uma solução de Glicose anidra com concentração de 1 mg mL-1 . 
Diluído a solução mãe 1 : 1000, medindo 100 L da solução mãe e misturando a 9,9 
mL de H2O Milli-Q, obteve – se assim uma solução com concentração de Glicose igual 
a 1 g mL-1, que será a solução de trabalho. 
 Colocou – se 31 tubos de vidro em uma estante para tubos de ensaios. Numerados os 
tubos de 1 a 10 e usou um tubo para ser a testemunha (branco). No branco adicionou-
se tudo que há nos outros tubos, porém no lugar da glicose., colocou-se H2O Milli-Q. 
Após os procedimentos em triplicata, preencher o quadro a seguir: 
 
 
RESULTADOS EXPERIMENTAIS E 
DISCUSSÃO 
 
 
Preencha as lacunas vazia no quadro a seguir: 
 
 
TUBO 
 
REPETIÇÃO 
[Glicose] = 
1 g  mL-1 
(L) 
H2O 
Milli-Q 
(L) 
Fenol 
80% 
(mL) 
H2SO4 
P.A. 
(mL) 
A
g
it
a
r 
n
o
 V
ó
rt
e
x
 e
 a
g
u
a
rd
a
r 
e
sf
ri
a
r 
(a
p
ro
x
im
a
d
a
m
e
n
te
 5
 a
 1
0
 m
in
) 

(490 nm) 
Glicose [final] 
(g  mL-1) 
 
1 
1 
10 
 
240 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
0,5 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2,5 
0,079 
100 2 0,069 
3 0,099 
 
2 
1 
20 
 
230 
0,126 
200 2 0,090 
3 0,120 
 
3 
1 
30 
 
220 
0,155 
300 2 0,154 
3 0,159 
 
4 
1 
40 
 
210 
0,222 
400 2 0,238 
3 0,212 
 
5 
1 
50 
 
200 
0,254 
500 2 0,251 
3 0,238 
 
6 
1 
60 
 
190 
0,297 
600 2 0,290 
3 0,272 
 
7 
1 
70 
 
180 
0,310 
700 2 0,353 
3 0,342 
 
8 
1 
80 
 
170 
0,382 
800 2 0,434 
3 0,417 
 
9 
1 
90 
 
160 
0,457 
900 2 0,494 
3 0,504 
 
10 
1 
100 
 
150 
0,512 
1.000 2 0,539 
3 0,488 
BRANCO 0 250 0,621 0 
 
 
 
 
Faça a curva no software Microsoft Excel para encontrar a equação da reta e o r2, seguindo as instruções do 
professor. 
 
 
 
 
 
 
AMOSTRA DE SILAGEM DE CANA DE AÇÚCAR 
 
Realizadas as diluições conforme mostradas no vídeo, preencha a tabela abaixo. 
 
Diluição REPETIÇÃO 
Silagem de Cana de 
Açúcar Diluída (L) 
Fenol 80% 
(mL) 
H2SO4 P.A. 
(mL) 
A
g
it
a
r 
n
o
 
V
ó
rt
e
x
 
e
 
a
g
u
a
rd
a
r 
e
sf
ri
a
r 
(a
p
ro
x
im
a
d
a
m
e
n
t 
e
 5
 a
 1
0
 m
in
)  (490 nm) 
 
1:50 
1 
250 
 
0,5 
 
2,5 
0,400 
2 0,356 
3 0,393 
 
 
 
 
 
 
Baseando-se na equação da reta obtida na curva padrão, calcule a concentração de 
carboidratos totais solúveis na amostra da silagem de cana de açúcar, seguindo as instruções 
do professor. 
 
 MÉDIA= 0,3965 
Conforme se obteve os valores da diluição nas amostras da silagem e da equeção da reta obtida 
podemos fazer o cálculo da concentração. 
 
X= Y -0,0135/ 0,0005 
X= 0,3965-0,0135/ 0,0005 
X= 0,383/ 0, 0005 = 766 
Multiplica o valor obtido pela diluição 
X= 766*50= 38300= 38,30 mg/ ml 
y = 0,0005x + 0,0135
R² = 0,9873
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
0.60
0 200 400 600 800 1000 1200
A
b
so
rb
ân
ci
a 
(4
90
 n
m
 )
(GLUCOSE) (ug . mL -1)
Curva padrão
 
CONCLUSÃO 
Sendo assim, conforme os experimentos que foram realizados pode – se 
afirmar que a silagem estudada é rica em carboidratos, no qual já era de se 
esperar tal conclusão por se tratar de uma silagem de cana – de – açucar. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Referências 
 
(s.d.).Fonte: Passei Direto: 
https://www.passeidireto.com/arquivo/25719468/determinacao-de-cho 
 
(s.d.). Fonte: UTFPR: 
http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:KsYVg01UD94J:pag
inapessoal.utfpr.edu.br/rbuzanello/graduacao/analise-de-alimentos-
tal54f/Aula%25205.pdf/at_download/file+&cd=4&hl=pt-BR&ct=clnk&gl=br 
 
(Março de 2022). Fonte: Scielo : 
https://www.scielo.br/j/cta/a/fsfZj35NNBsVXkTfHJWrRQG/#:~:text=2.2.2%20%
E2%80%94%20M%C3%A9todo%20de%20antrona,desidratados%20para%20
furfural%20ou%20hidroximetilfurfural. 
 
(MARÇO de 2022). Fonte: EMBRAPA: 
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/81814/1/cot-86.pdf 
 
(Março de 2022). Fonte: ARTIGOS WIKI: 
https://artigos.wiki/blog/de/Methode_nach_Luff-Schoorl 
 
(MARÇO de 2022). Fonte: INFO ESCOLA: 
https://www.infoescola.com/quimica/complexometria/ 
 
Treinamento 24h. (março de 2022). Fonte: 
https://treinamento24.com/library/lecture/read/774679-o-que-e-o-metodo-de-
fehling 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
	UNIVERSIDADE FEDERAL DO VALE DO SÃO FRANCISCO
	CURSO DE GRADUAÇÃO EM ZOOTECNIA
	AULA PRÁTICA DEMONSTRATIVA
	PETROLINA
	2022
	AULA PRÁTICA DEMONSTRATIVA (1)
	PETROLINA (1)
	2022 (1)
	OBJETIVO(S):
	INTRODUÇÃO
	MATERIAL E MÉTODOS:
	Material
	METODOLOGIA
	RESULTADOS EXPERIMENTAIS E DISCUSSÃO
	AMOSTRA DE SILAGEM DE CANA DE AÇÚCAR
	CONCLUSÃO
	Sendo assim, conforme os experimentos que foram realizados pode – se afirmar que a silagem estudada é rica em carboidratos, no qual já era de se esperar tal conclusão por se tratar de uma silagem de cana – de – açucar.
	Referências