Preservação de Sêmen Bovino (24 03 2023)

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Preservação de Sêmen Bovino
Utilização de sêmen
O sêmen homospermico é o sêmen de apenas 1 ejaculado e congela. O sêmen heterospérmico é coletar diversos ejaculados de diversos touros (até 3 touros), misturar em um tubo e processa normalmente. A vantagem de usar o heterospérmico é que aumenta de 10-12% a taxa de prenhez quando se usa diversos ejaculados. 
A finalidade de se misturar o sêmen é que o tempo de capacitação espermática é diferente de um touro para o outro. Então diferentes tempos de capacitação fazem com que a mistura seja benéfica, porque o sêmen de um touro pode ter uma capacitação menor, e o do outro ser maior e conseguir fecundar a vaca.
O sêmen sexado é voltado para produção de embriões in vitro, pois é um processo demorado. É voltado para inseminação de novilhas, pois elas possuem um útero hígido. É mais caro devido a exigência de máquinas especificas, a produção baixa de espermatozoides. 
O DNA do cromossomo X é mais pesado do que o cromossomo Y. 
Como evitar ou sobreviver ao congelamento?
Deve evitar a exposição a temperaturas abaixo do ponto de congelação dos fluidos corporais, fazem isso se abrigando no fundo de lagos ou tocas profundas. Adaptações funcionais que preservam o estado líquido de fluidos corporais, em que “eliminam” as partículas nucleantes ou impedem ...
O glicerol é responsável pela diminuição do ponto de congelamento do meio, aumento da osmolaridade e desidrata a célula. 
Criopreservação
É constituída pelas seguintes etapas: diluição, resfriamento, congelamento e descongelamento.
Fatores que afetam a criopreservação: espécie (individuo), qualidade das amostras seminais (boa concentração, boa motilidade, bom vigor, sem patologia), tipo/associação/concentração de crioprotetor, estresse térmico, estresse osmótico (o que seria isotônico e se torna um meio hipertônico, vai de 200 para 300), tempo de equilíbrio (deve ficar entre 3h-5h, depende do fabricante, mas caso ultrapasse afeta), volume da palheta (0,25ml ou 0,50ml, depende da curva de congelação e descongelação usada, depende da espécie), número de espermatozoides, curva de resfriamento, curva de congelação/descongelação. 
Deve preservar a morfologia, metabolismo, metabolismo/cinética IMPA, DNA, potencial mitocondrial, enzimas acromossomas, citoesqueleto (alfa-tubulina). A preservação desses fatores serve para viabilizar a fertilização.
O crioprotetor ideal possui baixa toxicidade, baixo peso molecular, baixo ponto de congelação e tem uma alta solubilidade. 
Os crioprotetor que entram na célula são chamados de intracelulares e possuem baixo peso molecular. São os...
Os crioprototeror que não entram na célula, considerados os verdadeiros, possuem o maior peso molecular, são os...
Diluentes
As funções do diluente são diluir o ejaculado, controlar a osmolaridade/pH, fornecer substrato energético (a frutose presente no líquido seminal se esgota rapidamente, então para suplementar ela é fornecer o esse substrato), minimizar o choque térmico (a gema que protege essa temperatura) e controlar a flora microbiana.
Os diluentes disponíveis no mercado são a gema, leite, lecitina, lipossomas, antioxidantes e LDL (indisponível comercialmente). 
Qualidade do ovo
Compra a gema através de ovo comum, mas o melhor não é comprar de granja pois as vezes aquele ovo do supermercado está há semanas, ou seja, não está corretamente preservado, ele tem que estar na geladeira.
Deve estar bem higienizado
Deve estar com bom acondicionamento, ou seja, preservado na geladeira (3°-4°).
Gema
 A gema é composta por grânulos e plasma, em que a 85% do LDL está no plasma. É uma substância quimicamente não definida, isto é, cada galinha vai botar um ovo com quantidade de componentes diferentes, então o resultado pode variar por causa disso.
A fração mais importante é o LDL
A lecitina está presente também, a qual tem a colina que é importante para a integridade das membranas células, principalmente para o cérebro. 
A fração que importa para o sêmen é o LDL para evitar o choque térmico na fase de refrigeração, a qual está presente na parte líquida da gema. Protege a membrana plasmática do espermatozoide, a qual é a mais importante porque reveste todas as outras organelas.
A clara é toxica para o espermatozoide, pois ela retira as proteínas da membrana.
A lavagem do ovo é em água corrente, com detergente neutro e seca com a toalha.
Qualidade do Leite
O leite é um bom agente para realizar a proteção do espermatozoide durante a fase de refrigeração para evitar o choque térmico, mas o leite é uma substancia quimicamente não definida, pois ele tem muitos componentes que variam devido a dependência de cada vaca. 
A caseína é muito utilizada para a proteção de sêmen de cavalo.
No Brasil, não se utiliza a mais para bovinos.
Os fatores limitantes é a contaminação, padronização e...
O leite é 87% de água e a caseína é a sua principal proteína, a qual evita a saída de colesterol e fosfolipídio da membrana. 
Aditivos
A adição de surfactantes, principalmente o SDS é benéfico. Esses aditivos podem ser benéficos para o sêmen, pois eles causam uma dispersão nas partículas de lipídeo da gema deixando menos viscoso. 
Cálculo ND e VD
Após a coleta do sêmen, análise macro e microscópica, pode realizar o cálculo.
VS: volume de sêmen
M/V: motilidade/vigor
C: concentração espermática
DI: dose inseminante
VP: volume da palheta
ND: número de doses
VD: volume do diluente
ND = 
VD = ND X VP – VS
Protocolo de congelação – diluição única
Deve avaliar o sêmen (M/V, C e Mo), calcular o ND e VD, identiciar as palhetas (nome, registro, raça, central, partida (é a data da produção)), diluir o sêmen (34-35° em banho maria), envasar/lacrar as palhetas, refrigerar a 4°C (tempo de equilíbrio/glicerolização), pré-congelar em vapor de N2 líquido por 20min, congelar em N2 a 192°C e raquear/armazenar em botijão criogênico
Centrifugação do Sêmen – Eliminar o plasma seminal?
Deve eliminar o plasma? Seria benéfico para o sêmen? Há evidencias que somente suspendendo o sêmen e retirando o plasma tem benefício. No entanto, na pratica do dia-a-dia em grandes fazendas não se realiza isso porque é trabalhoso, mas é o ideal. 
Retira o plasma através da centrifugação. 
Envase do Sêmen
As ampolas devem ser de 0,5 a 1ml;
Palhetas: média (0,5ml) e fina (0,25ml)
Minitubo: 0,2ml (Alemanha)
“Pellet”: 0,1 a 0,2ml
Vedação da palheta
Automática: ultrassom
Manual: PVA e esfera plasmática/metálica 
Uma palheta serve para inseminar um animal, geralmente.