Aulas Práticas de Reprodução Animal Exame Andrológico

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Aulas Práticas de 
Reprodução 
Animal → Exame 
Andrológico
Resumo para a prova prática
Primeira Fase
● Identificação:
○ informações do proprietário → nome, endereço, telefone, etc.
○ informações da propriedade → nome, município, etc.
○ informações do animal → espécie, raça, nome, número do brinco, número da tatuagem, número do 
registro genealógico e data de nascimento.
● Exame Clínico:
○ Anamnese de todos os sistemas, deixar o reprodutivo por último.
○ Exame Clínico Geral:
■ Inspeção (respiratório, circulatório, nervoso, digestivo, locomotor), tanto em repouso quanto em 
movimento, com atenção especial para os aprumos, os cascos e articulações.
■ Importante avaliar o sistema locomotor, dor, dentição e visão.
■ O animal deve estar em boa condição geral e com tamanho, peso e conformação normal para sua 
raça e idade
○ Exame do Sistema Genital → verifica-se a presença, a dimensão, a simetria, a consistência e a 
mobilidade dos componentes deste sistema:
■ Escroto → espessura da pele, sensibilidade, mobilidade, temperatura, presença de ectoparasitas, 
aderências e possíveis lesões na pele.
■ Testículos → estar na bolsa escrotal, ver presença, forma, simetria, consistência, mobilidade 
dentro do escroto, posição, temperatura, sensibilidade, tamanho e biometria.
■ Epidídimo → intimamente aderidos aos testículos, ver mesmos aspectos vistos para os testículos 
para cabeça, corpo e cauda.
■ Cordões Espermáticos → grau de distensão dos cordões espermáticos (relacionado com a 
termorregulação testicular).
■ Prepúcio → deve ser examinado desde o óstio até a inserção com o escroto. Ver aumentos de 
volume e de temperatura, prolapsos, abscessos, hematomas e cicatrizes.
■ Pênis → deve ser examinado em repouso ou após a ereção.
■ Órgãos genitais internos → palpação retal ou USG transretal. Avaliar ampolas dos canais 
deferentes e as glândulas vesiculares, quanto a tamanho, forma, lobulação e sensibilidade.
○ Biometria Testicular:
■ Tem que medir a circunferência escrotal, existe uma correlação positiva entre a circunferência 
escrotal e a produção espermática e uma correlação negativa entre a circunferência escrotal e a 
idade à puberdade.
○ Comportamento sexual:
■ Olfação
■ Teste de libido 
■ Teste de capacidade de libido
Montagens das Vaginas Artificiais
● Sempre lembrar: para vaginas artificiais onde a entrada de água fica mais de um 
lado do que de outro, escolher sempre o lado que mais distante dessa abertura para 
encaixar o pênis do animal, evitando que ele se machuque.
Temperatura da vagina artificial Espécie 
 65°C Pequenos Ruminantes
 45°C Equinos
 42 a 45°C Grandes ruminantes 
Temperatura da água na mamadeira Espécie
 37°C Suínos e cães 
Cães
Materiais :
● Funil de plástico
● mamadeira
● tubo coletor de sêmen
● alumínio para proteger o sêmen de possíveis danos
→ Água dentro da mamadeira a 37 °C 
Grandes Ruminantes
● tubo rígido
● mucosa de látex 
● funil de látex
● elástico de borracha
● tubo coletor 
● capa protetora 
Materiais :
Montando a Vagina :
1- Passar a mucosa de borracha por dentro do tubo rígido, dobrar as pontas da mucosa de borracha e 
encaixá-las nas extremidades do tubo.
2- Com o elástico, dar várias voltas para evitar que ele solte.
3- o funil deve ser amarrado por fora do tubo e também amarrado com um elástico. Na ponta do funil, 
será anexado o tubo coletor 
4- proteger o tubo coletor com alumínio evitando possíveis danos ao sêmen coletado.
1
2
Pequenos Ruminantes
● cano de PVC com comprimento de 11 
cm, e 3cm de diâmetro 
Materiais :
● "mucosa" de borracha 
● elástico para prender bem a 
mucosa, segurando a água. 
● tubo coletor e papel alumínio (para 
proteger o sêmen coletado da luz)
Montando a vagina:
1- Coloca-se a mucosa de borracha dentro do tubo rígido (no caso, o cano de pvc) e dobra-se as 
pontas para não escapar a água. Em seguida, deve-se amarrar as borrachas com o elástico (várias 
voltas) garantindo que a água não vaze.
2- Colocar água a 65 °C até preencher todo o tubo, fechar com a tampa do gatorade, e soprar em 
seguida, jogando pressão dentro da vagina.
3- Do lado oposto ao pino, colocar o cone de borracha com o tubo coletor aquecido (37°C) 
O papel de alumínio serve para proteger o sêmen do sol 
priorizando a qualidade do material genético.
Equinos
● Tubo rígido de alta resistência com 
torneira para entrada de água que 
permite também a insuflação do ar
● Mucosa de Látex 
● Mucosa plástica descartável 
● Garrafa térmica 
● Camisa plástica interna para a Garrafa 
térmica.
Materiais :
filtro (colocar na camisinha 
plástica)
Montando a Vagina: https://www.youtube.com/watch?v=ru7N57cTOeQ 
● Passar a mucosa entre o tubo rígido, 
em seguida, passar o plástico por 
dentro da mucosa → protege o pênis 
do equino que incha e pode machucar 
a glande do animal - lado maior
● amarrar a borracha (várias vezes) para 
a água não vazar (amarrar a parte que 
entra em contato com o animal)
● A outra parte do plástico, juntar com a 
tampa da garrafa térmica (com a 
camisa de plástico dentro) .--> menor 
lado 
https://www.google.com/url?q=https://www.youtube.com/watch?v%3Dru7N57cTOeQ&sa=D&source=editors&ust=1619397545298000&usg=AOvVaw1gIeaTXLkQHwziL2YLggoS
https://www.youtube.com/watch?v=HILIigL6HkA Aula da FMVZ - vagina 
artificial equinos
https://www.google.com/url?q=https://www.youtube.com/watch?v%3DHILIigL6HkA&sa=D&source=editors&ust=1619397546206000&usg=AOvVaw0_FWJ0XYeZzLkIya2vJB3m
Suínos
Materiais :
● Béquer 
● Gaze
● Elástico de látex 
Coleta do Sêmen
* Pode ser através de monta ou eletroejaculação (utilizada em animais não treinados e gatos)
1. Disponibilizar uma fêmea ou um manequim para a realização da monta e posicioná-la/o
2. Pegar o macho que será utilizado para a colheita
3. Realizar a limpeza com solução fisiológica do prepúcio
4. Aguardar que o macho faça a monta
5. No ato da monta se posicionar (modo de posicionamento depende da espécie) para direcionar o pênis 
para dentro da vagina artificial
6. O macho dará um sinal de que ejaculou (varia entre as espécies: ruminantes → escato ; equinos → 
sapateio; suínos e cães → possível visualizar o ejaculado)
7. Quando houver a ejaculação, retirar a vagina e manter o sêmen protegido até ser levado ao banho 
maria à 37 graus C
* Equinos: é preciso esvaziar a vagina artificial antes de retirar o pênis, pois a glande incha dentro da vagina
Eletroejaculação → Curiosidade 
● Consiste no uso de um aparelho, chamado 
eletroejaculador; 
● o aparelho consiste de um eletrodo cilíndrico 
– nada menos que avantajado –, com ponta 
arredondada; 
● este eletrodo é lubrificado e introduzido no 
ânus do animal – gentilmente –, 
conduzindo-se para frente e para trás – por 
vezes com movimentos rotatórios –, com o 
intento de massagear previamente o esfíncter 
anal.
● O aparelho ainda desligado pode ser utilizado 
para conduzir uma massagem retal – 
assumindo-se que o aparelho seja grande o 
bastante (ou que o touro não seja muito 
grande) –, massageando na direção da 
próstata com movimento lento e ritmado – o 
que proporciona maior eficácia ao 
procedimento. 
https://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/wiki/Eletroejaculador&sa=D&source=editors&ust=1619397546445000&usg=AOvVaw0GYeH83ReaJz-uwNSi3Wlu
https://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/wiki/Eletrodo&sa=D&source=editors&ust=1619397546445000&usg=AOvVaw22oRzrQc7pf2wexvCHldmh
https://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/wiki/Eletrodo&sa=D&source=editors&ust=1619397546445000&usg=AOvVaw22oRzrQc7pf2wexvCHldmh
https://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/w/index.php?title%3DLubrificado%26action%3Dedit%26redlink%3D1&sa=D&source=editors&ust=1619397546445000&usg=AOvVaw11cxcK76_nQ0tRzDmTyEERhttps://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/wiki/%25C3%2582nus&sa=D&source=editors&ust=1619397546445000&usg=AOvVaw1UK-YS1u2-4Q_WOf1Z-OhE
https://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/wiki/Esf%25C3%25ADncter&sa=D&source=editors&ust=1619397546445000&usg=AOvVaw3mHqN-vyjLaHO258XOvpyL
https://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/wiki/Pr%25C3%25B3stata&sa=D&source=editors&ust=1619397546445000&usg=AOvVaw3VGs15xGJvfYtjJhS3Jfub
● Após a massagem prévia – com o aparelho ainda desligado –, o eletrodo é introduzido completamente; é 
então que se conduzem os estímulos elétricos,iniciando 0-20 amperes. Se o animal não demonstrar reação 
aumentar para 40, até 60 se não houver manifestação – , em intervalos de três a cinco segundos. 
● Em alguns casos (não raros) convém alternar os estímulos elétricos com a massagem retal, o que 
incrementa enormemente a eficácia do procedimento – com os touros mais dóceis este método é o mais 
recomendável.
https://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/wiki/Massagem&sa=D&source=editors&ust=1619397547136000&usg=AOvVaw02UbVKTpYqGLnVuPV-v8CQ
https://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/wiki/Eletrodo&sa=D&source=editors&ust=1619397547136000&usg=AOvVaw1IagWtypOtjd8Wc0PM9TH0
https://www.google.com/url?q=https://pt.wikipedia.org/w/index.php?title%3DMassagem_retal%26action%3Dedit%26redlink%3D1&sa=D&source=editors&ust=1619397547136000&usg=AOvVaw2YoEEYMNc8Y_iGEVDb_VmM
CONCENTRAÇÃO ESPERMÁTICA 
Espermiograma
● Todos os MATERIAIS utilizados devem estar a 37 graus celsius. 
Avaliação Macroscópica
● Volume → ml 
● Cor → perolado ou marfim (ovinos), amarelo (caprino e búfalo), branco 
(bovino), esbranquiçado (cão, equino, suíno, gato)
● Odor → suis generis (normal)
● Aspecto → cremoso (pequenos ruminantes ), leitoso (bovinos e 
bubalinos), soroso (cão, equino, suíno, gato)
● Densidade → muito denso (pequenos ruminantes) denso (bovinos e 
búfalos) pouco denso (equinos, suínos e cães)
● Movimento de massa (apenas para ruminantes) → presente ou ausente 
(grumos se movimentando no sêmen)
● PH → 7 (normal), utilizar teste de PH comum
OVINOS CAPRINOS BOVINOS BÚFALOS SUÍNO/CÃO/GATO/E
QUINO
VOLUME 0,5 - 2,5 ml 0,5 - 2,5 ml 7- 10ml 7-10ml 250-500ml - 5-20ml 
- 40-150ml
COR PEROLADO/MARFI
M
AMARELO BRANCO AMARELO ESBRANQUIÇADO
ODOR SUIS GENERIS 
(NORMAL)
SUIS 
GENERIS 
(NORMAL)
SUIS GENERIS 
(NORMAL)
SUIS GENERIS 
(NORMAL)
SUIS GENERIS 
(NORMAL)
ASPECTO CREMOSO CREMOSO LEITOSO LEITOSO SOROSO
DENSIDADE MUITO DENSO MUITO 
DENSO
DENSO DENSO POUCO DENSO
MOVIMENTO 
DE MASSA
PRESENTE/AUSEN
TE
P/A P/A P/A NÃO TEM
PH DEVE SER 7 7 7 7 7
Avaliação Microscópica
● Turbilhonamento→ único que não vai diluir o sêmen. 
Como fazer: 
○ Pegar o tubo com o sêmen no banho maria à 37 °C; 
○ Colocar uma ponteira amarela aquecida (em uma placa aquecida) na pipeta ;
○ Pegar 20 μl e colocar a gota na lâmina aquecida; 
○ Colocar a placa aquecida no microscópio e a lâmina com a gota em cima da placa;
○ Usar a lente de 40x (número 4) e posicionar a imagem na borda da gota e então o 
turbilhonamento poderá ser visto.
○ Classificar em 0 a 5 (normal) 
○ Maior que 3 é normal 
○ Quanto mais escuro maior a concentração
Não usa lamínula 
● Motilidade retilínea e progressiva → 0-100% (normal é 70%) → soro
Como fazer: 
○ Pegar o tubo com sêmen no banho maria à 37 °C; 
○ Pegue cerca de 2 ml de soro fisiológico (não há quantidade exata); 
○ Aquecer o soro em um tubo coletor em banho maria à 37 °C; 
○ Pegar a pipeta e colocar uma ponteira aquecida; 
○ Pegar 20 μl de sêmen; misturar com o soro até ficar homogêneo; → apertar varias vezes a pipeta
○ Pegar 20 μl e colocar em uma lâmina aquecida e depois colocar uma LAMÍNULA em cima; 
○ Colocar uma placa aquecida no microscópio e a lâmina em cima; focar na lente de 100x (número 
10).
● Vigor (rapidez) → soro 0 a 5 (normal é de 3 a 5) 
Como fazer: 
○ Usar a mesma lâmina utilizada para analisar a motilidade retilínea e progressiva, os 
espermatozóides devem estar para frente e rapidamente.
○ Vigor → intensidade do movimento
● Concentração → DILUÍDO EM ÁGUA PARA MATAR [ ] = 5 (quadrados) x 10 (ml cúbicos) x 
Σ(média dos quadrados) xdiluição x 1000(103 ) 
Como fazer: 
○ O sêmen deve ser diluído em água conforme a tabela de diluição
○ Se necessário pode-se diluir em maior quantidade de água; 
○ Pegar a câmara de Neubauer e colar com saliva uma lamínula;
○ Pegar 20 μl da solução diluída e preencher as duas câmaras, aguardar 5 min em uma superfície 
lisa para que os espermatozóides decantem; será utilizada uma técnica específica de contagem.
* Deve-se somar o resultado da contagem dos 5 quadrantes de cada uma das câmaras, fazer a média do 
número de espermatozóides das duas câmaras e substituir na fórmula por “Σ”.
Saliva 
EQUINO 1:20
CÃO 1:50
BOVINO 1:200
PEQ. RUMINANTE 1:800
EXEMPLO CONCENTRAÇÃO PEQUENO RUMINANTE → 
1:800 
PRIMEIRO - DILUIR EM H20
- 1 parte de sêmen
- 799 partes de H20
1 parte ---------- 20 mu - microlitros ( 0,02 ml)
 800 ----------- x
 x= 16 ml
● 16 ml são 800 partes, mas eu quero 799 partes → 
pega a pipeta e tira uma parte da água 
● Troca a ponteira e pega uma parte de sêmen e 
coloco no frasco da h20
● E coloco na câmara de Neubauer → apoiar com o 
dedo a pipeta e preencher o espaço embaixo da 
lâminula
 [ ] =SPTZ/ml
[ ]total = sptz/ ejaculado → FAZER X O 
VOLUME NO FINAL
[ ] ml/vol
TABELA DE DILUIÇÃO
Método de Contagem da Concentração
● Câmara
● Quadrante
● Quadrado
● Serão contados os espermatozóides (caudas 
soltas não contam, cabeças soltas contam) de 
cada uma das câmaras apenas nos quadrantes 
representados pelas letras: A, B, C, D e E (os 4 da 
ponta e o do meio). Nos dois campos
● Foco de 40 x 
● Haverá um método para a contagem dos 
espermatozóides dentro de cada quadrado 
(próximo slide) 
● FOTO → só para ter noção
● Agora será feita a contagem dos 
espermatozóides em cada quadrado dentro 
dos quadrantes selecionados. 
● Contar pelo método do L invertido 
(vermelho)
● Os quadrantes são delimitados por 3 linhas, 
as cabeças que estiverem ultrapassando ou 
em cima da 3 linha não serão contados - no 
caso do L invertido. Apenas os que encostam 
até a 2 linha
● No L normal seja na 1,2 ou 3 linha NÃO 
CONTA
1 Quadrante: ZOOM do quadradinho verde da foto do slide anterior 
EXERCÍCIOS
1) OVINO 1:800
Vol: 2ml
MRP: 80 %
quadrado1 : 380
quadrado 2: 350
[ ]:?
[ ]tot?; → total x vol
5 x 10 ml x 365 x 1000 x800
= 14,6 x 10ˆ9 [ ] sptz/ml
=29,2 x 10^9 sptz/ejaculado (total) 
2) Cão 1:50
Vol: 6 ml
Quadrado/câmara 1 :180
Quadrado 2: 130
[ ]? 
[ ] total?
5x10x 155 x 1000 x 50
[ ] = 387,5 x 10ˆ6sptz/ml
[ ] total = 2,325 x 10ˆ9 sptz/ejaculado
PATOLOGIA 
ESPERMÁTICA 
● Patologias: Sêmen normal < ou = a 30%
○ Câmara úmida: método de fixação → diluir 20 μl de sêmen em 2 ml de formol (10%) salino à 
37 °C; colocar 20 μl do diluído em uma lâmina aquecida com uma lamínula em cima e vedar 
com esmalte dos 4 lados; deixar descansar por 24 horas para analisar no microscópio*; focar no 
aumento de 40(400x) e contar 200 células e identificar qual o defeito apresentado em cada 
uma delas para que a porcentagem de de cada tipo de células defeituosas possa ser calculada. 
(usado para analisar apenas defeitos de cauda)
 a contagem deve ser feita nesta direção:
 
Alguns espermatozóides ficam lateralizados (de perfil) quando analisados de prontidão, podendo confundir 
uma cabeça normal com uma fina. O tempo de 24h é dado para que, se houver lateralização espermática, 
dentro desse período os espermatozóides tendem a 'deitar', sedimentar sobre a solução. 
câmara úmida → sêmen de cão : 
1ml porque já é muito diluído
sêmen de carneiro → 2 ml de 
formol
Assim que eu coloco o espermatozóide no formol, o defeito fica fixado. Se ele tem a cauda enrolada, permanecerá assim 
em contato com o formol. 
Sempre colocar aquecido, porque se estiver frio, o sêmen vivo vai cair no formol e ocasionaro choque térmico → 
DOBRADURA DE CAUDA. formol deve estar a 37 graus. 
(como fazer no slide anterior) 
acrossoma, cabeça, peça intermediária e cauda → Defeitos Maiores → impedem a fertilização 
ex: cabeça em forma de pêra.
O espermatozóide suíno tem cabeça piriforme, no caso, se tiver cabeça de pêra está normal.
Defeitos Menores → cabeça gigante → não impede o espermatozóide de fertilizar. 
DEFEITOS MAIORES → Impossibilitam os espermatozóides de fertilizarem o óvulo
● De acrossomo → liberar enzimas que possibilitam romper a zona pelúcida
● De cabeça (irregular, piriforme)
● Peça intermediária em formato de saca rolha → mitocôndria enovelada erroneamente e forma uma 
rolha
● Implantação retroabaxial → cabeça e cauda no mesmo sentido
● Defeito de cauda → totalmente enrolada
● Defeito de Gota proximal → problema no epidídimo → cabeça solta durante o ejaculado
DEFEITOS MENORES → problemas menores porém é possível fertilizar o óvulo
● Defeito de cabeça → grande/pequena
● Implantação abaxial → centríolos deslocados (em equinos é normal) 
● Defeito de cauda → ou parcialmente enrolada (só a cauda) 
● Defeito de gota → Problema no epidídimo 
- Distal - defeito menor
○ A contagem das células e identificação das patologias será feita, após este processo, será 
calculada a porcentagem de cada uma das patologias na amostra de sêmen do animal
○ A somatória de todos os tipos de patologias não poderá ultrapassar os 30% em grandes 
ruminantes e 15% em pequenos ruminantes
○ As patologias são classificadas entre defeitos menores (não causam infertilidade) e defeitos 
maiores (são aqueles que que impedem a fertilização, gerando infertilidade )
○ Em bovinos:
■ um único tipo de defeito maior não pode ultrapassar os 5%
■ um único tipo de defeito menor não pode ultrapassar os 10%
■ Defeitos Maiores e Menores relacionam-se com a sua importância na fertilidade. Assim, são 
considerados Defeitos Maiores aquelas anormalidades que têm grande efeito na fertilidade 
e os Defeitos Menores são considerados de menor importância → dificultam a chegada de 
espermatozóide no óvulo.
Jersey x DAG
→ O defeito é caracterizado por um forte enrolamento ou dobramento da peça intermediária e da 
cauda espermática, com ruptura de fibrilas. Foi identificado outras raças bovinas além da Jersey. A 
patologia ocorre durante o trajeto das células espermáticas no epidídimo, e foi também associada 
com altos teores de zinco no plasma seminal. 
Espermatozóide lateralizado → passa 
impressão de que a cabeça está 
afilada.
24 horas depois 
Espermatozóide fica na posição 
adequada e nota-se que a cabeça está 
normal.
NÃO
 HÁ
 AN
OM
ALI
A N
EST
E C
ASO
○ ESFREGAÇO (OU PANÓTICO): em espécies com sêmen muito concentrado, deve-se diluir 
em 2 ml de soro aquecido à 37 °C; colocar uma gota perto de uma das extremidades lâmina 
e espalhar essa gota até o final com outra lâmina; esperar o líquido secar; 
○ Corar a lâmina deixando 30 seg nos dois primeiros estágios e 20 seg no terceiro, esperar 
escorrer o líquido entre cada estágio; Nessa fase algumas cabeças, caudas se soltam
○ Esperar secar a lâmina e enxaguar com água corrente; 
○ Esperar secar de novo e visualizar no microscópio em 400x de aumento. (este 
procedimento serve para analisar apenas patologias de cabeça e acrossomo, 
patologias de cauda não serão analisadas, pois o esfregaço enrolou todas)
○ Se usa o soro em ruminantes
AULA REPRODUÇÃO
AULA REPRODUÇÃO
Congelamento de 
Sêmen
Por que congelar?
O objetivo do congelamento de sêmen é a produção de um banco de células espermáticas utilizadas para 
biotécnicas da reprodução, o que é uma importante ferramenta para potencializar uma genética.
A moderna indústria bovina em todo mundo é baseada na utilização da inseminação artificial (IA) com 
sêmen congelado(AIRES et al., 2003). 
→ Criopreservação de sêmen busca a suspensão do metabolismo espermático e a manutenção do 
potencial fertilizante por um período de tempo prolongado
● A criopreservação do sêmen passa pelas etapas de:
- Diluição
- Resfriamento
- Congelamento
- Armazenamento 
- Descongelamento.
BOVINO
● Concentração:
○ [ ] = sptz (n da câmara) x 5 x 10 x proporção de diluição
● Número total de sptz:
○ V x [ ]
● Número de sptz viáveis:
○ MRP (ex.: 80% = 0.8) x n total de sptz
● Número de sptz viáveis após o congelamento (1 etapa):
○ perda de 50% → sptz viáveis/ 
○ → resultado/ dose inseminante = n de palhetas
● Ml de sêmen para as palhetas:
○ n de palhetas x (0,5 ou 0,25 ml)
● Quantidade de diluidor:
○ ml para as palhetas = VS (volume de sêmen) + VD (volume diluidor) ou VD = ml palhetas - VS (ou V pellet - se 
for cão ou bovino)
● Doses inseminantes:
○ 100.000.000 (109)
Conta da Diluição 
- volume do diluidor que será acrescentado no sêmen
Volume = 0,5 ml (exemplos da aula)
Motilidade = 80%
Concentração = 3,875x 109
Dose inseminante: 
100.000.000 1- Qual o volume do diluidor (Vd) para congelar o sêmen?
N total de SPTZ = V x [ ] = 0,5 x 3,875x 109 = 1,94x 109
N de espermatozóides viáveis = N total x mpr = 1,94x 109x 0,8 = 1,55x 109
 
N de espermatozóides viáveis após congelar - Perda de 50%= 1,55/2 =
0,77x 109
Dividir pela dose para achar n de paletas : 
770.000.000 100.000.000 7,7 paletas =7
Cada paleta tem 0,5 ml
7 palhetas -------------xml
x=3,5 ml 
Vt = Vs + Vd = 
3,5= 0,5 + Vd 
Vd = 3.0 ml
COLOCANDO EM PRÁTICA: 
● Avaliação do sêmen:
- Macro:
■ Volume: 0,5ml
■ Cor: marfim
■ Odor: suis Generis
■ Movimento de massa: presente
■ pH: 8
■ Aspecto: remoso
- Micro:
■ Turbilhonamento: 2
■ M.R.P: 10%
■ Vigor: 3
■ Motilidade: não tem
■ Concentração = 77,5 x 5 x 10 x 1000 x 1000 = 3,875 x 109
* Sêmen colhido do carneiro 
● Dose inseminante: a palheta deve ter uma dose de 100.000.000 (100 milhões de espermatozóides)
● CONTA DE RUMINANTES:
○ Qual volume do diluidor é necessário para congelar o sêmen?
N° total de SPTZ: V x 
ex.(utilizando os números da avaliação anterior) 0,5 x 3,875.109 = 1,94.109 
N° de SPTZ viáveis: M.R.P x N° Total 
* vamos utilizar M.R.P de 80%
M.R.P x N° Total = 1,94.109 x 0.8 = 1,55.109
○ N° de SPTZ viáveis após congelamento de 1 etapa → Perda de 50%
1,55.109 = 0,77.109 = 770.000.000 = 7,7 palhetas → Na prática deve-se fazer 7 palhetas e não 
 2 100.000.000 8, pois se arredondar pra cima a concentração 
 dose fica menor do que o menos permitido
○ Existem 2 tipos de palheta:
- 0,5ml → utilizada apenas pro sêmen
- 0,25ml → utilizada para embrião de sêmen 
● No caso prático será utilizado a palheta de 0,5 ml
● É preciso 7 palhetas: 3,5 ml → Nesse volume deve ter a quantidade de sêmen e de diluidor; como 
de sêmen foi colhido 0,5 ml serão necessários 3 ml de diluidor
3,5 = VS + VD
3,5 = 0,5 + VD
VD = 3 ml 
● Deve pipetar 3 ml do diluidor, colocar o sêmen nesta mistura, homogeniza → tudo deve estar 
aquecido a 37°C
DILUIDOR PARA RUMINANTES - GEMA CITRATO:
● Componentes:
- 20 ml Gema de ovo: A gema possui glicose que fornece energia aos espermatozóides e a lecitina que 
forma uma membrana nos espermatozóides a fim de protegê-los da mudança de temperatura no 
resfriamento (temp acima de 0°C)
- Citrato de sódio (2,47g): Funciona como um tampão, mantém pH
- Penicilina +estreptomicina (0,1g): São utilizados estes antibióticos para evitar a contaminação do sêmen
- H2O destilada (100 ml)
● Outras opções de componentes:
- Frutose - energia
- Leite condensado - caseína
- gentamicina
- etilenoglicol
- Tris/Teg
*Pode colocar antioxidante para que o diluidor dure mais tempo (Vit. E,C )
- Refrigeração: Aguenta 24 horas na geladeira
- No congelamento em 1 etapa a única diferença é que não vai glicerol na composição do diluidor
- O diluidor de sêmen de suínos é de alta duração, pode durar até 6 dias se refrigerado corretamente
* Não se congela sêmen de suíno
CONTA DE CÃES/ EQUINOS:
●Ex: cão
 V=6 ml
 MRP=90%
 = 200.106 SPTZ/ml
● Qual volume do diluidor é necessário para congelar o sêmen?
N° total de SPTZ: V x 
N° total = 6 x 200.106 = 1,2.109 
● N° SPTZ viáveis :
N° SPTZ Viáveis = MRP x N° total
N° SPTZ = 0.9 x 1,2.109 = 1,08.109
● Perda 50% = 1,08.109/2 = 0,54.109
 540.000.000 = 5,4 palhetas (Arredondar sempre para baixo)
 100.000.000
● Cada palheta têm 0,5 ml 
5 palhetas - 2,5 ml ( volume total das 5 palhetas)
* O volume de sêmen neste caso é maior que o volume total das 5 palhetas, portanto deve-se 
centrifugar o Sêmen. Após a centrifugação sobrará uma pequena parcela de sêmen e esta pode ser 
misturada ao diluidor até que se complete a quantidade necessária de 2,5 ml 
● Para o congelamento do sêmen é necessário fazer previamente o exame andrológico do animal em questão, inclusive a 
avaliação patológica
● Para congelar o sêmen deve ter as seguintes características:
- Mínimo 70% de motilidade
- Mínimo 3 de vigor
- Mínimo 3 de motilidade
- Máximo 30% de defeitos
CONGELAMENTO DO SÊMEN EM 1 ETAPA:
1. Deve-se colher o sêmen
2. Avaliar o sêmen
3. Realizar a conta de diluição (calcular quanto de diluidor deve ser usado)
4. Diluição: deve ser feita em temperatura de 37°C
5. Envasamento: deve ser feito em temperatura ambiente
6. Resfriamento: resfriar a 5°C por 20 minutos
7. Congelar no vapor de N2 (-120°C) por 20 minutos
8. Congelar no N2 (-196°C)
● Nesse modo de congelamento a perda de espermatozóides é de 50%
● No congelamento de 1 etapa não se acrescenta o glicerol
● CONGELAMENTO DE SÊMEN EM 2 ETAPAS
- Esse tipo de congelamento só é realizado na central, pois é necessário que se tenha uma própria 
sala a 5°C, preservando melhor a célula
- Etapas:
1. Colheita do sêmen
2. Avaliação do sêmen
3. Realizar conta da diluição
4. Diluição: no caso do congelamento em 2 etapas deve-se dividir o diluente em 2 frações (A e B). 
A primeira fração (FA) deverá ser adicionada ao sêmen com temperatura a 37°C. Esta solução 
e a fração B (FB) devem ser resfriadas a 5°C
5. Resfriar: após o resfriamento adiciona-se glicerol na fração B (FB) e esta então é misturada ao 
resto do sêmen
6. Equilíbrio: o tempo de equilíbrio é necessário para que o glicerol possa agir desidratando as 
células. Esse tempo é de cerca de 2h onde a solução deve ficar numa temperatura de 5°C
7. Congelamento no vapor de N2 (-120) por 20 minutos
8. Congelamento no N2 (-196) 
Diluidores: Não pode trabalhar com o sêmen puro
Prontos no mercado:
Equino, bovino, suíno.
Cão → Fazer 
Ingredientes da solução CRIOPROTETORA: 
Solução fisiológica
Açucares (Glicose) - energia para o 
espermatozóide
Gema de ovo (proteínas) 
Lecitina - protege a membrana no abaixamento 
de temperatura - acima de 0 graus → 
Resfriamento
Citrato de Sódio (sais) - Tampão - mantém o 
meio com pH 7.
Penicilina + Estrepto (antibiótico) → 
proteger de bactérias 
Glicerol - desidrata → protege abaixo de 0 
graus celsius. → o que mais usa
Água Destilada
Ou frutose (açucar) 
Dá para substituir
leite desnatado - caseína 
Dá para substituir a 
lecitina
● A solução crioprotetora desidrata o 
espermatozóide
● Sai água e entra a solução → expansão 
não vai ser tanta e não irá romper a 
membrana do sptz
● 5% do volume total
→ Congelamento de Sêmen
Para congelar o sêmen, ele deve ter:
No mínimo:
70 % de motilidade retilínea e progressiva
 3 de vigor
3 de turbilhonamento
No máx:
30% de defeitos 
→ Parâmetros normais para congelamento do sêmen.
Etapas 
1.0. Colher o sêmen 
 1.1. Avaliar → Macro e Micro (aulas passadas)
1.2. Analisar os 3 parâmetros para fazer a conta da diluição. → DILUIÇÃO É FEITA A 37º C.
● Quanto de diluidor será usado para fazer a diluição.
Sêmen já diluído 
embasar na palheta (temperatura ambiente)
Resfriar a 5 graus e depois congelar, primeiro no vapor de nitrogênio (20 min) e depois jogar no 
nitrogênio líquido a -196 graus celsius. 
● Se resfriar a 0 graus, o sêmen começa a congelar na geladeira, mas deve ser congelado no 
nitrogênio. Por isso resfriar a 5 graus.
Quando a amostra já estiver a 5º C, colocar no vapor de nitrogênio (20 min) numa temperatura de -120º C, 
depois de congelado, jogar a amostra no nitrogênio líquido. 
Laboratório Ideal:
● Local onde há salas climatizadas a 5 graus, o sêmen não é resfriado no frigobar. 
● Quando a porta do frigobar é aberta, a temperatura aumenta, varia → Não é o ideal.
● Nos laboratórios ideias, há uma câmara fria → temperatura chega a 5º C e vai direto para a temperatura 
de -196º C
Como fazer: 
1. Identificar o material:
- Data
- Nome do Animal
 2. seringa:
- Encaixar a paleta e deixar uma bolha de ar
Porque se preencher totalmente, a paleta congela e estoura.
parar de puxar quando chegar perto do algodão.
 3. Lacrar:
com álcool polivinílico 
fazer isso em todas as 
paletas que forem 
conter o material
seringa - vai puxar o ar e com 
isso o material (sêmen) vai 
subir na paleta
paleta
material 
0
9/0
5/18
O
lavo
0
9/0
5/18
O
lavo
1.
2.