GRAM-POSITIVAS E GRAM-NEGATIVAS PROCESSO DE COLORAÇÃO DE GRAM

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CENTRO UNIVERSITÁRIO UNIFANOR – CAMPUS DUNAS 
 
ANA BEATRIZ DE OLIVEIRA SOUTO 
LUCAS XAVIER DA SILVA 
MARÍLIA EUFRÁSIO MONTEIRO FERREIRA 
ROSANA DOS SANTOS CAROLINO 
ZULEYKA LAGE MOTA BRANDÃO 
 
 
RELATÓRIO DA PRÁTICA DE MICROBIOLOGIA 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
FORTALEZA, CE 
2023 
 
 
 
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ANA BEATRIZ DE OLIVEIRA SOUTO 
LUCAS XAVIER DA SILVA 
MARÍLIA EUFRÁSIO MONTEIRO FERREIRA 
ROSANA DOS SANTOS CAROLINO 
ZULEYKA LAGE MOTA BRANDÃO 
 
 
 
RELATÓRIO DA PRÁTICA DE MICROBIOLOGIA 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO PARA 
CURSOS DE GRADUAÇÃO EM SAÚDE DO CENTRO 
UNIVERSITÁRIO UNIFANOR WYDEN. 
 
 
 
 
 
FORTALEZA, CE 
2023 
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SUMÁRIO 
1. INTRODUÇÃO ---------------------------------------------------------------------------3-4 
2. METODOLOGIA -------------------------------------------------------------------------5-6 
3. RESULTADO -----------------------------------------------------------------------------7-8 
4. CONCLUSÃO -----------------------------------------------------------------------------9 
5. REFERÊNCIAS ---------------------------------------------------------------------------10 
 
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1. INTRODUÇÃO 
As bactérias constituem um grande domínio de microrganismos procarióticos. 
Bactérias estavam entre as primeiras formas de vida a aparecer na Terra e estão 
presentes na maioria dos habitats do planeta. As bactérias crescem no solo, fontes 
termais ácidas, resíduos radioativos, água e nas profundezas da crosta terrestre. 
Além disso, eles crescem em matéria orgânica e nos corpos vivos de plantas e 
animais, fornecendo excelentes exemplos de mutualismo nos tratos digestivos de 
humanos, cupins e baratas. 
Mas o que define uma bactéria? 
2. Falta de organelas ligadas à membrana 
3. Unicelularidade e, portanto, divisão por fissão binária 
4. Podem apresentar diversas formas 
5. Serem isoladas ou em viverem em colônias. 
6. Geralmente são pequenas 
7. Possui apenas uma organela, os ribossomos 
As bactérias não tendem a ter organelas ligadas à membrana em seu 
citoplasma e, portanto, contém poucas estruturas intracelulares grandes. 
Consequentemente, faltam-lhes um núcleo verdadeiro, mitocôndrias, cloroplastos 
e outras organelas presentes nas células eucarióticas, como o aparelho de Golgi 
e o retículo endoplasmático. As bactérias já foram vistas como simples bolsas de 
citoplasma, mas elementos como o citoesqueleto procariótico e a localização de 
proteínas em locais específicos dentro do citoplasma mostraram níveis de 
complexidade. Esses compartimentos subcelulares têm sido chamados de "hiper 
estruturas bacterianas". 
 As diferenças nas composições químicas na parede da maioria das bactérias 
as dividem em dois grandes grupos, que surgiram após a técnica de coloração de 
Gram. A coloração de Gram recebeu este nome em homenagem a seu 
descobridor, o médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. Em 1884, ele 
observou que as bactérias adquiriram diferentes cores, quando usados diferentes 
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corantes. Sobre as composições químicas e estrutura celular das bactérias Gram-
positiva e Gram-negativas podemos afirmar que: 
 As bactérias podem ser dividias de acordo com a capacidade de 
retenção do corante de Gram: bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. 
Essa é a divisão empírica clássica amplamente utilizada, e que se revelou 
muito útil, uma vez que a coloração revela diferenças importantes na 
composição química e na estrutura da parede celular e na fisiologia do 
microrganismo. Essa classificação não pode ser aplicada a todas as 
bactérias; por exemplo as microbactérias (causadoras da tuberculose e 
hanseníase), por apresentarem uma parede com composição peculiar, 
chamada de acidor - resistente, não se coram pelo método Gram, assim como 
os micoplasmas, que não apresentam paredes. (BARBOSA; GOMEZ; 
TORRES, 2001, p. 33-34) 
 
• Gram-positivas, bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à 
presença de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por 
açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior 
à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-
se na cor roxa. 
• Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina que não 
retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor 
vermelha no processo de coloração final. 
A coloração de Gram é, geralmente, o primeiro passo para a identificação de 
bactérias, e permite a visualização das células individualmente e dos possíveis 
agrupamentos formados. Para o processo de coloração e descobrimento do grupo 
de bactéria são usados alguns corantes e reagentes, como já havia sido citado. 
Também é usado o fogo para a fixação das bactérias na placa após o esfregaço. 
Quais são os reagentes usados? 
1. Solução de cristal violeta, para a corar as Gram-positivas. 
2. Solução de lugol, age como fixador de corante. 
3. Solução de etanol, passo para a diferenciação removendo membrana externa 
das Gram-negativas e fixando corante nas Gram-positivas, desidratando a 
camada espessa de peptidioglicano, impedindo a saída do cristal violeta. 
4. Solução fucsina, para identificação das Gram-negativas. 
 
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2. METODOLOGIA 
 
O procedimento é baseado na reação entre peptidoglicano nas paredes 
celulares de algumas bactérias. A coloração de Gram envolve a coloração de 
bactérias, a fixação da cor com um mordente (lugol), a descoloração das células e 
a aplicação de uma contra coloração. 
Material usado: 
Violeta cristal (mancha primária) 
Iodo de Gram (para fixar violeta cristal na parede celular) 
Etanol ou acetona (descolorante) 
Safranina (mancha secundária ou contra-mancha) 
Fio de água 
Lâminas de microscópio 
Microscópio 
 
 
2.1. Primeiro é realizado o esfregaço com material biológico coletado na lâmina. 
Logo em seguida é passado a lâmina no fogo para a fixação da bactéria. 
 
2.2. Logo em seguida é aplicado corante (violeta cristal) que se liga ao 
peptidoglicano, colorindo as células de roxo. Ambas as células gram-
positivas e gram-negativas têm peptidoglicano em suas paredes celulares, 
então, inicialmente, todas as bactérias mancham violeta. (Processo dura um 
minuto e corante é retirado com fio de água delicadamente, posto para 
secar em pé cuidadosamente). 
 
2.3. O iodo de Gram (iodo e iodeto de potássio) é aplicado como mordente ou 
fixador. As células Gram-positivas formam um complexo cristalino-violeta-
iodo. (Processo dura um minuto e corante é retirado com fio de água 
delicadamente, posto para secar em pé cuidadosamente). 
 
 
2.4. Álcool ou acetona é usado para descolorir as células. As bactérias Gram-
negativas têm muito menos peptidoglicano em suas paredes celulares, de 
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modo que esta etapa essencialmente as torna incolores, enquanto apenas 
parte da cor é removida das células gram-positivas, que têm mais 
peptidoglicano (60-90% da parede celular). A parede celular espessa das 
células gram-positivas é desidratada pela etapa de descoloração, fazendo 
com que elas encolham e fixem o complexo de iodo no interior. (Processo 
dura 30 segundos e corante é retirado com fio de água delicadamente, 
posto para secar em pé cuidadosamente). 
 
2.5. Após a etapa de descoloração, uma contra mancha (fucsina/Safranina) é 
aplicada para colorir as bactérias de rosa. Tanto as bactérias gram-positivas 
quanto as gram-negativas pegam a mancha rosa, mas não é visível sobre 
o roxo mais escuro das bactérias gram-positivas. Se o procedimento de 
coloração for realizado corretamente, as bactérias gram-positivas serão 
roxas, enquanto as bactérias gram-negativas serão rosa. (Processo dura 30 
segundos e corante é retirado com fio de água delicadamente, posto para 
secar em pé cuidadosamente). 
 
2.6. Visualize a lâmina usando um microscópio composto. Uma ampliação de 
500x a 1000x pode ser necessária para distinguir a forma eo arranjo da 
célula. 
 
 
 
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3. RESULTADOS 
Após o processo de coloração das células da mucosa bucal, foram 
observados os resultados através da microscopia de luz. 
 
Figura 1- Nesse caso, podemos notar que as células sofreram lise e a cor 
azul/roxa das Gram-positivas se sobressaem, em comparação as Gram-positivas 
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. 
Figura 2- A cor rosa se mostrar mais aparente caracterizando as Gram-negativas. É 
possível analisar a morfologia de algumas bactérias, podemos observar 
estreptococos, cocos, bacilos (dentro das células da mucosa). 
 
 
 
 
9 
 
4. CONCLUSÃO 
Quando as bactérias são coloridas, não apenas seu grupo de coloração de 
Gram é identificado, mas sua forma, tamanho e padrão de aglomeração podem 
ser observados. Isso torna a coloração de Gram uma valiosa ferramenta de 
diagnóstico para uma clínica médica ou laboratório. Embora a mancha possa não 
identificar definitivamente as bactérias, muitas vezes é possível saber se elas são 
gram-positivas ou gram-negativas isso é suficiente para prescrever um antibiótico 
eficaz e tratamentos que devem ser usados ou evitados, produção de alimentos, 
tratamentos de esgoto dentre outros. 
 
 
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5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
Ramos, H. B., Gregório, J. C., Baptista, B. T. Microbiologia Básica Bacteriologia. 
2 ediçãoº. 2001, pág. 33-34. 
The LibreTexts libraries.” Identify common bacterial traits.” DEC.24, 2022, 
https://shre.ink/Qnc0 
Helmenstine, Anne Marie, Ph.D. "Gram Stain Procedure in Microbiology." 
ThoughtCo, Feb. 16, 2021, thoughtco.com/gram-stain-procedure-4147683.