BIOENGENHARIA E BIOTECNOLOGIA APLICADA A BIOMEDICINA l

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BIOENGENHARIA E BIOTECNOLOGIA APLICADA A BIOMEDICINA (7373-30_44801_R_F1_20231)
· CONTEÚDO
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	Curso
	BIOENGENHARIA E BIOTECNOLOGIA APLICADA A BIOMEDICINA
	Teste
	QUESTIONÁRIO UNIDADE I
	Iniciado
	28/02/23 19:17
	Enviado
	28/02/23 19:27
	Status
	Completada
	Resultado da tentativa
	5 em 5 pontos  
	Tempo decorrido
	10 minutos
	Resultados exibidos
	Todas as respostas, Respostas enviadas, Respostas corretas, Comentários, Perguntas respondidas incorretamente
· Pergunta 1
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	Você deseja clonar um segmento de DNA recém-purificado de uma PCR, em um vetor específico – ambos representados na imagem a seguir. As sequências das extremidades do segmento purificado da PCR estão representadas pelas letras que constituem as bases dos nucleotídeos do DNA. Assim, é possível analisar qual enzima de restrição é a mais adequada para dar continuidade com o processo de clonagem. Admita que em seu laboratório você possui disponível apenas as enzimas de restrição listadas: BamHI, EcoRI, EcoRV, SmaI e XmaI.
A partir das informações e do seu conhecimento sobre o assunto, determine qual alternativa apresenta a enzima de restrição adequada para você dar segmento com seu experimento de clonagem, considerando que você deseja controlar a posição de inserção do fragmento, respeitando o sentido de leitura do gene e que você irá utilizar a mesma enzima de restrição para digerir o inserto e o vetor. Nas alternativas estão apontados os sítios de reconhecimento de cada enzima de restrição.
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	d. 
XmaI.
	Respostas:
	a. 
BamHI.
	
	b. 
EcoRI.
	
	c. 
SmaI.
	
	d. 
XmaI.
	
	e. 
EcoRV.
	Comentário da resposta:
	Alternativa: D
Comentário: a enzima de restrição XmaI reconhece a mesma sequência da enzima SmaI (presente no vetor), porém cliva em sítio diferente. A clivagem mediada por XmaI deixa extremidades coesivas e garante a posição de inserção do segmento de interesse, garantido que o sentido de leitura do gene será respeitado. A utilização das enzimas SmaI ou EcoRV, as únicas cujos sítios de reconhecimento são encontrados tanto no inserto quanto no vetor, não seriam adequadas, pois deixam extremidades cegas e não garantem o sentido de inserção do segmento de interesse. As enzimas EcoRI e BanHI não apresentam sítio de reconhecimento na sequência de interesse, apenas no vetor, desta  forma, ambas não poderiam ser usadas para deixar extremidades coesivas no inserto.
	
	
	
· Pergunta 2
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	Qual das seguintes estratégias seria a mais adequada para purificação de uma mistura contendo proteínas de tamanhos distintos?
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	c. 
Cromatografia em gel filtração.
	Respostas:
	a. 
Cromatografia de afinidade.
	
	b. 
Cromatografia de troca catiônica.
	
	c. 
Cromatografia em gel filtração.
	
	d. 
Cromatografia de troca aniônica.
	
	e. 
Cromatografia por interação hidrofóbica.  
	Comentário da resposta:
	Alternativa: C
Comentário: considerando que as proteínas da mistura apresentam tamanhos diferentes, a cromatografia em gel filtração é a alternativa mais adequada. Nela, a fase estacionária é constituída por resina contendo esferas com orifícios. As proteínas de menor tamanho (menor massa) penetram dentro dos orifícios das esferas que funcionam como obstáculos. Desta forma, o fluxo dessas proteínas menores pela coluna cromatográfica é mais lento, quando comparado com o fluxo de proteínas maiores, que por sua vez não são atrasadas pelos obstáculos (são grandes demais para passar pelos orifícios das esferas). Assim, é possível coletar em diferentes momentos da purificação as proteínas de tamanhos distintos.
	
	
	
· Pergunta 3
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	Um pesquisador deseja clonar a sequência codificante de um gene de 540 pb a jusante (downstream) do promotor (200 pb) de um vetor, para subsequente expressão e purificação da proteína de interesse. Assim, o gene foi isolado como fragmento da ação da enzima de restrição SmaI (o sítio de reconhecimento dessa enzima é CCC↓GGG / a seta indica sítio de clivagem) e clonado no sítio SmaI do vetor localizado imediatamente a jusante do promotor. A sequência do gene contém um único sítio para enzima de restrição EcoRI localizada 70 pb a jusante do códon iniciador. A representação esquemática do plasmídeo a seguir indica a localização dos sítios de reconhecimento de algumas enzimas de restrição no vetor e a posição de inserção do gene de interesse.
 
 
O pesquisador avaliou as colônias obtidas no processo de clonagem por meio da digestão do material com as duas enzimas de restrição HindIII e EcoRI. Qual dos seguintes padrões de digestão com essas duas enzimas de restrição representa o clone com perfil desejado pelo pesquisador para os experimentos de superexpressão?
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	a. 
~270 pb + ~470 pb + o restante da estrutura vetor.
	Respostas:
	a. 
~270 pb + ~470 pb + o restante da estrutura vetor.
	
	b. 
~740 pb + ~70 pb + o restante da estrutura vetor.
	
	c. 
~200 pb + o restante da estrutura vetor.
	
	d. 
~810 pb + o restante da estrutura vetor.
	
	e. 
~200 pb + 540 pb + o restante da estrutura vetor.
	Comentário da resposta:
	Alternativa: A
Comentário: ao clivar o vetor contendo o inserto com as duas enzimas de restrição, teremos: (1) um fragmento correspondendo ao promotor (200 pb) mais 70 pb do gene, produzido pela clivagem com a HindIII a montante (upstream) do promotor e pela clivagem com a EcoRI presente dentro do gene (70 pb a início do códon iniciador) e (2) outro fragmento de 470 pb correspondente à clivagem nos sítios EcoRI dentro do gene (a 70 pb do início da transcrição) e EcoRI a jusante final do gene.
	
	
	
· Pergunta 4
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	Leia e analise as proposições.
I- CRISPR é um acrônimo da língua inglesa das palavras repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente interespaçadas (clustered regularly interspaced short palindromic repeat).
II- O operon CRISPR contém fragmentos de DNA viral provenientes de infecções prévias sofridas por organismos procariontes. Os cientistas descobriram que ele faz parte de um mecanismo de defesa de bactérias, sendo posteriormente adaptado como uma ferramenta de edição gênica.
III- Sequências PAM, sgRNA (single guide), Cas são componentes importantes no processo de edição gênica mediada pelo operon CRISPR.
IV- A edição gênica promovida pelo sistema CRISPR/Cas pode ser realizada apenas em éxons.
V- A edição gênica realizada pelo sistema CRISPR/Cas permite exclusivamente a remoção de fragmentos do genoma (construção de knock-outs), além de ser uma técnica que pode ser aplicada apenas em organismos mais simples, como os procariontes.
 
Assinale a alternativa correta.
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	b. 
Estão corretas apenas as afirmativas I, II e III.
	Respostas:
	a. 
Estão corretas apenas as afirmativas I e II.
	
	b. 
Estão corretas apenas as afirmativas I, II e III.
	
	c. 
Estão corretas apenas as afirmativas II, III e IV.
	
	d. 
Estão corretas apenas as afirmativas I, III e V.
	
	e. 
Estão corretas apenas as afirmativas II, III e V.
	Comentário da resposta:
	Alternativa: B
Comentário: a edição gênica promovida pelo sistema CRISPR/Cas pode ser realizada em qualquer lugar do genoma, desde que o sgRNA se ligue a montante de uma sequência PAM. A alternativa V está errada, pois a edição mediada pelo sistema CRISPR/Cas pode ser utilizada em diversas aplicações e não apenas na construção de knock-outs, tais como ativação/repressão gênica, substituição alélica, clivagem de DNA/RNA, deleção de genes, knock-in/out, inserção de transgenes, geração de variação genética, além de outras abordagens possíveis como DNA labeling, mapeamento gênico, RNA tracking. Essa técnica também pode ser utilizada em células eucariontes e organismos complexos.
	
	
	
· Pergunta 5
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	Um dos reagentes utilizados na preparação de células competentes é:
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	e. 
CaCl2.
	Respostas:a. 
HCl.
	
	b. 
NaCl.
	
	c. 
Glicina.
	
	d. 
Formamida.
	
	e. 
CaCl2.
	Comentário da resposta:
	Alternativa: E
Comentário: o CaCl2 é utilizado na preparação de células competentes, uma vez que, juntamente com o choque térmico, permite a abertura de poros na membrana plasmática facilitando a entrada do DNA exógeno na célula.
	
	
	
· Pergunta 6
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	Eletroporação é:
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	d. 
Aplicação de pulsos de alta voltagem, geralmente utilizados para criação de poros na membrana plasmática das células.
	Respostas:
	a. 
O processo de separação de moléculas carregadas, por meio de um gel mantido em um campo elétrico.
	
	b. 
O processo que permite a ligação do DNA exógeno a um vetor eletricamente carregado.
	
	c. 
O processo que estimula a multiplicação celular.
	
	d. 
Aplicação de pulsos de alta voltagem, geralmente utilizados para criação de poros na membrana plasmática das células.
	
	e. 
Aplicação de pulsos de baixa voltagem, usados para fechar os poros da membrana plasmática das células após protocolo de choque térmico.
	Comentário da resposta:
	Alternativa: D
Comentário: a captação de DNA livre pode ocorrer submetendo bactérias a um campo elétrico de alta tensão. Esse procedimento é conhecido como eletroporação. Os protocolos de eletroporação variam entre as diferentes espécies bacterianas.
	
	
	
· Pergunta 7
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	Vetores são:
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	c. 
Moléculas que são capazes de se ligar covalentemente a um segmento de DNA e carregá-lo para o interior das células.
	Respostas:
	a. 
Moléculas que degradam ácidos nucleicos.
	
	b. 
Moléculas que auxiliam na replicação.
	
	c. 
Moléculas que são capazes de se ligar covalentemente a um segmento de DNA e carregá-lo para o interior das células.
	
	d. 
Moléculas que protegem a célula hospedeira contra a invasão de DNA exógeno.
	
	e. 
Moléculas que impedem a replicação do DNA endógeno da célula.
	Comentário da resposta:
	Alternativa: C
Comentário: os vetores são capazes de carregar moléculas de DNA exógeno para o interior das células e são frequentemente utilizados no processo de clonagem molecular.
	
	
	
· Pergunta 8
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	Os cosmídeos não apresentam:
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	a. 
Genes que codificam proteínas virais.
	Respostas:
	a. 
Genes que codificam proteínas virais.
	
	b. 
Origem de replicação.
	
	c. 
Genes de resistência a antibióticos.
	
	d. 
Sítios de reconhecimento para enzimas de restrição.
	
	e. 
Sequência cos.
	Comentário da resposta:
	Alternativa: A
Comentário: os genes virais são removidos para “abrir” espaço na construção, permitindo a inserção de fragmentos de DNA de até 45 kb. Os plasmídeos e os bacteriófagos permitem a inserção de fragmentos de DNA de apenas 10 e 20 kb, respectivamente.
	
	
	
· Pergunta 9
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	Qual é o papel das enzimas de restrição nas bactérias?
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	b. 
Degradar o DNA de fagos invasores.
	Respostas:
	a. 
Degradar o cromossomo bacteriano durante a replicação.
	
	b. 
Degradar o DNA de fagos invasores.
	
	c. 
Produzir iniciadores de RNA para a replicação.
	
	d. 
Degradar o DNA de outras bactérias durante o processo de conjugação.
	
	e. 
Inserir o DNA de fagos invasores no DNA cromossômico.
	Comentário da resposta:
	Alternativa: B
Comentário: as enzimas de restrição sintetizadas pelas bactérias reconhecem sequências específicas do genoma dos fagos e promovem a clivagem da ligação fosfodiéster do DNA viral nesses pontos. Assim, esse mecanismo de defesa de bactérias as protege contra infecções pelos fagos.
	
	
	
· Pergunta 10
0,5 em 0,5 pontos
	
	
	
	“Em 1998, a equipe do biólogo James Thomson, da Universidade de Wisconsin, Estados Unidos, isolou e desenvolveu pela primeira vez em laboratório uma linhagem de células-tronco extraídas de embriões humanos. Foi um feito técnico e um problema ético para a pesquisa biológica. Feito, porque os estudos com essas células podem, em teoria, levar a melhores tratamentos ou à cura de uma lista quase interminável de doenças. Se devidamente cultivadas, as células-tronco embrionárias, e apenas elas, podem dar origem a todos os tecidos de um organismo, cerca de 220 tipos distintos de células que seriam a matéria- prima de novas terapias. Problema, porque a forma de obtê-las ofende a crença de parcelas da sociedade, em especial os religiosos, e, em alguns países, também as leis: as células-tronco são retiradas de embriões, que, ao ceder esse material, tornam- se inviáveis.” (Pesquisa Fapesp, https:// revistapesquisa.fapesp.br/celulas-tronco/, 2005)
 
Com relação às células-tronco, é incorreto afirmar:
	
	
	
	
		Resposta Selecionada:
	d. 
Quando retiradas de embriões congelados, eliminam as questões éticas e religiosas associadas à obtenção de órgãos para transplantes, independentemente do tempo de congelamento.
	Respostas:
	a. 
As células-tronco podem ser retiradas da massa celular interna de blastocistos.
	
	b. 
As células-tronco de um paciente podem ser usadas para regenerar seus tecidos ou órgãos lesados, eliminando o risco de rejeição imunológica.
	
	c. 
As células-tronco de adulto, caso recebam estímulo adequado, são capazes de se diferenciar em outros tipos de célula, independentemente do seu tecido de origem.
	
	d. 
Quando retiradas de embriões congelados, eliminam as questões éticas e religiosas associadas à obtenção de órgãos para transplantes, independentemente do tempo de congelamento.
	
	e. 
As células-tronco embrionárias são capazes de se diferenciar em outros tipos de células, desde que cultivadas sob condições adequadas.
	Comentário da resposta:
	Resposta: D
Comentário: células-tronco são células indiferenciadas, ou seja, são células não especializadas do corpo humano. Elas são capazes de se diferenciarem em outros tipos celulares e têm a capacidade de se autorrenovar (isso quer dizer que elas podem se dividir e originar novas células-tronco). Células-tronco podem ser obtidas a partir da massa celular interna do blastocisto. Foi observado que tecidos adultos também possuem populações de células-tronco, células que, se receberem o estímulo adequado em laboratório, podem dar origem a diferentes tipos celulares. O uso de células-tronco embrionárias continua sendo motivo de debate ético. No Brasil, é permitida pesquisa com células-tronco retiradas de embriões humanos congelados. Para isso, é necessário que o embrião seja inviável ou que tenha permanecido congelado por mais de 3 anos. Além disso, a utilização apenas pode ocorrer a partir do consentimento dos genitores.
	
	
	
Terça-feira, 28 de Fevereiro de 2023 19h28min05s BRT
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