Cromatografia e Análise Fitoquímica - Resumo

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R E S U M O
Cromatografia e
análise fitoquímica
Cromatografia e
análise fitoquímica
Cromatografia
→ empregada na separação de compostos de uma
mistura;
→ empregada para identificação de substâncias (uso
de padrão);
→ Princípio da técnica:
● fase móvel (líquida ou gasosa);
● fase estacionária (sólida);
● competição entre fase móvel e estacionária:
componentes são separados de acordo com
sua afinidade.
→ Técnicas cromatográficas:
● Cromatografia planar
● Cromatografia em coluna
● Cromatografia líquida de alta eficiência
(CLAE)
● Cromatografia gasosa (CG)
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CROMATOGRAFIA PLANAR
→ Cromatografia em papel (CP)
→ Cromatografia em camada delgada (CCD):
identificação de metabólitos secundários
● analítica – identificação;
● preparativa – separação de compostos.
→ placa cromatográfica ou cromatofolha (fase
estacionária);
→mistura de solventes (fase móvel);
● fase móvel movimenta-se de forma
ascendente na vertical (por capilaridade);
● durante “corrida”, componentes da amostra
se separam;
→ revelador: reagentes ou luz UV;
→ Fatores que podem interferir na análise:
● tipo e homogeneidade do filme da fase
estacionária;
● tamanho das partículas/poros;
● espessura da camada;
● umidade;
● grau de pureza dos solventes;
● temperatura;
● quantidade de amostra aplicada;
● saturação da cuba.
→ Rf = ratio flow ou fator de retenção: Relação entre
a distância percorrida pela substância e a distância
percorrida pela fase móvel.
● Rf pode ser empregado na identificação de
substâncias.
● Rf depende do sistema cromatográfico
empregado.
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CROMATOGRAFIA EM COLUNA
→ empregada na separação de componentes
● isolamento de metabólitos secundários;
● coluna é recheada com a fase estacionária;
● componentes da amostra são eluídos de
forma descendente (gravidade);
● fase móvel, ao sair da coluna, é coletada em
frascos;
● A composição da fase móvel é alterada
durante o processo de análise (proporção e
solventes).
→ Cromatografia convencional:
● analitos são adsorvidos temporariamente na
superfície da fase estacionária;
● fase móvel também é adsorvida na superfície
da fase estacionária;
● fase estacionária = polar;
● fase móvel = apolar;
● alumina e sílica;
→ Cromatografia de fase reversa:
● sílica C8 ou C18;
● fase estacionária = apolar;
● fase móvel = polar.
● Uma vantagem significativa da
cromatografia de fase reversa em relação à
cromatografia convencional é que ela é
especialmente adequada para a separação
de compostos hidrofóbicos, que têm baixa
afinidade por fases estacionárias polares.
Polaridade de solventes:
→ Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE):
● considerada uma forma otimizada da
cromatografia em coluna;
● fase estacionária encontra-se extremamente
empacotada e a quantidade de solvente que
atravessa a coluna é muito grande em
relação à sua massa;
● permite separar, identificar e quantificar
componentes de misturas;
● vantagens:
○ alta eficiência;
○ tempo de análise (mais rápido);
○ baixo consumo de solventes;
○ reprodutibilidade;
→ Cromatografia gasosa (CG)
● utilizada na análise de compostos voláteis e
daqueles que podem ser volatilizados sem
degradação sob aquecimento, ou daqueles
que podem ser submetidos a reação de
derivatização1;
● permite a separação, identificação e
quantificação de componentes de misturas;
1 processo em que uma substância química é
modificada pela adição de um ou mais grupos químicos,
chamados de derivados, para fins de análise,
identificação ou quantificação.
● vantagens:
○ volume de amostra é pequeno;
○ tempo de análise (mais rápido);
○ sensibilidade e seletividade
Componentes básicos de um cromatógrafo gasoso. a)
cilindro do gás de arraste mantido sob alta pressão; b)
injetor; c) coluna; d) detector e e) registrador.
● Exemplo de aplicação na fitoquímica: análise
de compostos voláteis presentes em plantas.