Produção in vitro de embriões

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13/11/2017
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PROFA. DRA. GISELE VEIGA
FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA – FMU
DISCIPLINA DE TECNOLOGIA E REPRODUÇÃO ANIMAL VANTAGENS
Acelera o melhoramento genético
Reprodução de animais superiores com 
alterações adquiridas
Aumenta a capacidade reprodutiva da fêmea
Pesquisa
ETAPAS
COLHEITA DE OÓCITOS
MATURAÇÃO IN VITRO DE OÓCITOS
FECUNDAÇÃO IN VITRO DE OÓCITOS
CULTIVO DE EMBRIÕES
COLHEITA DE OÓCITOS
• Ovum pick up (OPU) – aspiração folicular transvaginal guiada 
por ultrassom
• Realizada em qualquer fase do ciclo
• Equipamento específico
• Em média 8 óocitos recuperados
• 2x/semana, 1x/semana, 1x/15dias
• 1 gestação/semana/doadora
IN VIVO
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COLHEITA DE OÓCITOS
• Pesquisa
• Transporte em NaCl 0,9% 30-35ºC (3h)
• 6 a 10 oócitos recuperados
• Aspiração
• Dissecação
OVÁRIOS DE ABATEDOURO
FÊMEAS OVARIECTOMIZADAS
AVALIAÇÃO DOS OÓCITOS AVALIAÇÃO DOS OÓCITOS
• Cumulus compacto presente, com mais de 3 camadas celulares, 
ooplasma com granulações finas e homogêneas, preenchendo o 
interior da zona pelúcida e de coloração marrom. 
QUALIDADE 1
• Cumulus compacto, parcialmente presente em volta do oócito ou
rodeando completamente o oócito, com menos de três camadas
celulares, ooplasma com granulações distribuídas heterogeneamente,
podendo estar mais concentradas no centro e mais claras na periferia
ou condensadas em um só local aparentando uma mancha escura. O
ooplasma preenche o espaço do interior da zona pelúcida.
Qualidade 2
AVALIAÇÃO DOS OÓCITOS
• Cumulus presente, mas expandido, ooplasma contraído com espaço
entre a membrana celular e a zona pelúcida, preenchendo
irregularmente o espaço perivitelínico, degenerando, vacuolizando ou
fragmentando.
QUALIDADE 3
• oócito desnudo (sem cumulus).
Qualidade 4
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MATURAÇÃO IN VITRO DE OÓCITOS 
(MIV)
• Maturação citoplasmática e nuclear
• Diplóteno da primeira prófase meiótica até
a fase de metáfase II
• Modificações no número, tamanho e
posição de organelas citoplasmáticas
• Expansão das células do cumulus
• Maturação completa – capacidade do
oócito em ser fecundado e desenvolver até
embrião
Duração: 22 a 24h
MATURAÇÃO IN VITRO DE OÓCITOS 
(MIV)
• TCM-199 com sais de EARLE
• Gonadotrofinas
• Fonte energética (glicose e
piruvato), fonte proteica, SFB
• Estufa a 39ºC, atmosfera de 5% de
CO2, 5% de O2 e 90% de N2
Meio de maturação
FECUNDAÇÃO IN VITRO (FIV)
• Rápida, simples, baixo custo
• Recuperar sptz móveis
• Remover sptz mortos e outras células
• Remover substâncias tóxicas
SEPARAÇÃO ESPERMÁTICA
• Partículas de sílica coloidal coberto
com polivinilpirrolidona, preparado
em diferentes concetrações
GRADIENTE DE PERCOL
FECUNDAÇÃO IN VITRO (FIV)
• 18 e 22h
• Meio FERT-TALP
• Temperatura de 39ºC
• Atmosfera de 5% de CO2
• 2x106 sptz/ml
Capacitação espermática e
oócitária
CULTIVO IN VITRO DE EMBRIÕES
• 7 dias
• Meio SOF (fluido da tuba uterina de bovinos)
CO-CULTIVO
• Morfologia
• Metabolismo
• Alterações cromossômicas
• Número de células
• 30% a 50% dos oócitos chegam a blastocistos
• Viabilidade menor
• Tx prenhez de 54% (fresco) e 30% (congelados) X in vivo 76%
(fresco) e 67% (congelado)
IN VIVO x IN VITRO
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