diagnóstico-virológico (2)

Prévia do material em texto

DIAGNÓSTICO DAS 
INFECÇÕES VIRAIS 
Amostra
Clínica
Todo material deve ser 
acompanhado de uma ficha clínica
com dados e histórico do paciente
Infecção respiratória: aspirado de
nasofaringe, swab de garganta
Infecção entérica: Fezes
Pele: líquido da vesícula
Urina
Infecção no SNC: líquor, cérebro
Sangue: soro
Morte: qualquer tecido
MÉTODOS DIRETOS > detecção do vírus
Métodos clássicos:
Isolamento do vírus: Cultura de células, ovos
embrionados, animais
Métodos rápidos:
Observação da partícula viral (microscopia
eletrônica)
Detecção do genoma viral: Reação em cadeia pela
polimerase (PCR)
MÉTODOS INDIRETOS > detecção de anticorpos
Imunofluorescência indireta (IF) 
ELISA
http://images.google.com.br/imgres?imgurl=http%3A//www1.istockphoto.com/file_thumbview_approve/500150/2/istockphoto_500150_cell_culture_1.jpg&imgrefurl=http%3A//www.istockphoto.com/file_closeup/%3Fid%3D500150%26refnum%3D390895&h=337&w=380&sz=50&hl=pt-BR&start=14&um=1&tbnid=gzTCZugtN0KfLM%3A&tbnh=109&tbnw=123&prev=/images%3Fq%3Dcell%2Bculture%26gbv%3D2%26svnum%3D10%26um%3D1%26hl%3Dpt-BR%26sa%3DG
http://images.google.com.br/imgres?imgurl=http%3A//www.ccb.ufsc.br/%7Eandre/Filhotes.jpg&imgrefurl=http%3A//www.ccb.ufsc.br/%7Eandre/somos.htm&h=240&w=320&sz=81&hl=pt-BR&start=4&um=1&tbnid=VzMsgIs3xpg1HM%3A&tbnh=103&tbnw=137&prev=/images%3Fq%3Danimais%2Blaborat%25C3%25B3rio%26gbv%3D2%26svnum%3D10%26um%3D1%26hl%3Dpt-BR%26sa%3DG
Animais de laboratório
• Uso muito restrito; diagnóstico de raiva em camundongos lactentes; 
isolamento e multiplicação de vírus que não replicam bem em culturas de 
células; 
• Ex: Vírus da febre amarela selvagem.
Ovos embrionados
Embrião em desenvolvimento é ideal para multiplicação 
de vírus; ↑sensibilidade, facilidade de realização
Vacina inativada para 
o vírus Influenza 
(gripe);
Vacina atenuada 
contra Febre 
Amarela;
Cultura de células
1949: Primeiro isolamento de vírus em cultura
Thomas Huckle 
Weller
John Franklin 
Enders
Frederick Chapman 
Robbins
Meio Mínimo Essencial (MME)
- Glicose
- Bicarbonato (Tampão)
- Indicador de pH
- Íons (Ca+2, Mg+2, Na+, Cl-, K+, Zn+2)
- Vitaminas
- Aminoácidos
- Antibióticos e antimicóticos
- Água
- Soro Fetal Bovino
Condições Ambientais
- Temperatura (37°C)
- Umidade
- Níveis de CO2
- pH (7.2)
Linhagem celular Origem Isolamento
Hep2
Carcinoma 
epidermóide de 
laringe humana
Vírus entéricos e
respiratórios
Vero Rim de macaco verde africano
Vírus entéricos e 
respiratórios
MRC-5
Linhagem diplóide de 
pulmão de feto 
humano
Vírus entéricos e
respiratórios
MDCK
Rim de cachorro
Vírus respiratórios
C6/36 Clone de linhagem deAedes albopictus Vírus da dengue
BHK-21 Rim de Hamster Vírus da Raiva
LLC-MK2 Rim de macacoRhesus
Vírus respiratórios e
entéricos
Cultura de células
Efeito citopático Arredondamento celular, formação de sincícios, formação de corpúsculos de inclusão
Poliovirus Herpesvirus
Adenovírus Morbillivirus sarampo
Morfologia da partícula viral
Alta concentração de vírus : 106 – 108 partículas virais/ml
Amostras para diagnóstico: liquido vesicular, cutânea, fezes 
Microscopia eletrônica
M.E: Adenovírus
M.E: Sars-CoV-2
M.E: Herpesvírus
em células de cultivo
Detecção do genoma viral por RT-PCR
Polimerização de DNA em Cadeia
Polimerização é feita por uma DNA polimerase termoestável: 
Taq polimerase → Thermus aquaticus
Parque Nacional Norte-Americano Yellowstone, 
localizado nos Estados Unidos.
Polimerização de 
DNA em Cadeia
2 fitas de DNANo de ciclos
230 ciclos = 1.073.741.824
Atividade para 19/04
Criar o modelo 3D de um 
vírus e pesquisar sobre
- Patogênese
- Epidemiologia
- Diagnostico
- Prevenção 
1. Influenza
2. Ebola
3. HIV
4. Dengue
5. Herpes
6. Papilomavírus humano
EXPLICAREI EM AULA 
SOBRE A ATIVIDADE
Atividade
• Identificação do vírus: qual é o vírus causador da infecção?
• Sintomas: quais são os sintomas apresentados pelo paciente
infectado? Como eles evoluíram ao longo do tempo?
• Histórico médico do paciente: quais são os antecedentes médicos do 
paciente? Há alguma condição pré-existente que possa ter contribuído
para a infecção ou para a gravidade dos sintomas?
• Diagnóstico: como o diagnóstico da infecção foi realizado? Quais
exames foram feitos? Houve algum desafio diagnóstico ou dificuldade
em identificar o vírus?
• Tratamento: qual foi o tratamento utilizado para tratar a infecção? Foi
eficaz? Houve algum efeito colateral ou complicação relacionada ao
tratamento?
• Evolução do caso: como o caso evoluiu ao longo do tempo? O paciente
se recuperou totalmente? Houve alguma sequela ou complicação após a 
infecção?
• Discussão: o caso apresentado é representativo de outros casos da 
mesma doença viral? Há alguma particularidade ou aspecto incomum no 
caso? O que pode ser aprendido com esse caso em relação à prevenção, 
diagnóstico ou tratamento da doença viral em questão?
• O cultivo de células, em particular as de mamíferos
para o cultivo de vírus humanos, foi um desafio que 
demorou a ser superado. Porque foi difícil e como
esse problema foi resolvido?
• Os efeitos citopáticos observados ao microscópio
podem nos dizer algo mesmo sem lançarmos mão de 
técnicas moleculares?
• Porque ocorre a formação de sincícios em culturas
celulares infectadas por diferentes vírus?
• Qual o significado dos corpúsculos de inclusão?
Atividade
	DIAGNÓSTICO DAS INFECÇÕES VIRAIS 
	Amostra Clínica
	MÉTODOS DIRETOS > detecção do vírus
	Slide Number 4
	Slide Number 5
	Slide Number 6
	Slide Number 7
	Slide Number 8
	Slide Number 9
	Slide Number 10
	Polimerização de DNA em Cadeia
	Slide Number 12
	Atividade para 19/04
	Atividade
	Atividade