Prática de quantificação celular

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Quantificação celular
Tecnologia de Fermentação
Nomes: Caterine Imazio, Emanuelly Rodrigues, João Gabriel Neto e Paula Beatriz Maciel
Turma: BM 181
Data da prática: 27/09/2022
Data de entrega: 11/10/2022
Professores: José Ricardo Hassel e Verônica Mel
I. RESULTADOS
I. I: Massa seca
	Cadinho
	Massa inicial
(g)
	Massa final (+ amostra seca)
(g)
	Concentração 
(g / 100 mL)
	2
	45, 0354
	45, 5154
	4,8
 Tabela: Resultados das pesagens de massa seca
· Cálculos para concentração em g/mL:
Massa seca = Massa final - Massa inicial
Massa seca = 45, 5154 - 45, 0354
Massa seca = 0, 48g de massa seca de células em 10 mL de fermento.
0, 48 g de amostra seca —— 10 mL
	 C ——— 100 mL
 C = 4,8 g em 100 mL (%m/v) 
Logo, 
15g (massa de fermento na suspensão mãe) ——– 100%
 4,80g (massa seca) —— X
O fermento utilizado possui 32 % de levedura em sua composição.
I. II: Turbidimetria por massa seca
· Cálculos de diluição:
C1 → 1:1000
(4,8 g/ 100 mL)/1000 → 1:1000 = 0,0048 g/mL
C2 → 1:500
(4,8 g/ 100 mL)/500 → 1:500 = 0,0096 g/mL
C3 → 1:333
(4,8 g/ 100 mL)/333 → 1:333 = 0,0144 g/mL
C4 → 1:250
(4,8 g/ 100 mL)/250 → 1:250 = 0,0192 g/mL
C5 → 1:200
(4,8 g/ 100 mL)/200 → 1:200 = 0,024 g/mL
	Diluição
	 Concentração
(%m/v)
	Absorbância 
 (λ = 540nm)
	1 : 1000
	0,0048 g/ml
	0, 066
	1 : 500
	0,0096 g/ml
	0, 163
	1 : 333
	0,0144 g/ml
	0, 243
	1 : 250
	0,0192 g/ml
	0, 420
	1 : 200
	0,024 g/ml
	0, 467
Imagem 3: Curva padrão de abs x concentração (g/mL)	
I. III: Volume centrifugado da suspensão mãe
10 mL –––– 2 mL
100 mL –––– X
X = 20% de volume de célula/100 mL.
· Cálculos de concentração:
C1 → 20 / 1000 = 0,02
C2 → 20 / 500 = 0,04
C3 → 20 / 133 = 0,06
C4 → 20 / 250 = 0,08
C5 → 20 / 200 = 0,10	
	Diluição
	 Concentração
(%v/v)
	 Absorbância 
 (λ = 540nm)
	1 : 1000
	 0,02
	0, 066
	1 : 500
	0,04
	0, 163
	1 : 333
	0,06
	0, 243
	1 : 250
	0,08
	0, 420
	 1 : 200
	0,10
	0, 467
Imagem: Curva padrão de abs x concentração %v/v
I. IV: Contagem na câmara de Neubauer
A = 19
B = 20
C = 30
D = 34
E = 36
Total = 139
N°Cel/mL= (A+B+C+D+E) x 5 x x fd
N°Cel/mL= 139 x 5 x x 200
N°Cél/mL= 1,39 x 
· Cálculos de número de células / mL:
 
C1 →1,39 x / 1000 = 1,39 x N° cél / mL
C2 → 1,39 x / 500 = 2,78 x N° cél / mL
C3 →1,39 x / 133 = 4,17 x N° cél / mL
C4 → 1,39 x / 250 = 5,56 x N° cél / mL
C5 → 1,39 x / 200 = 6,95 x N° cél / mL
	
	 Diluição
	 Absorbância 
 (λ = 540nm)
	 N° de células / mL
	 1 : 1000
	0, 085
	1,39 x 
	 1 : 500
	0, 192
	2,78 x 
	 1 : 333
	0, 243
	4,17 x 
	 1 : 250
	0, 420
	5,56 x 
	 1 : 200
	0, 467
	6,95 x 
Imagem: Curva padrão de abs x número de células/mL
· Cálculo da força G:
RPM: 3000
Raio (r): 10 cm 
Fg = 1.118 x 10-5 × r × rpm2
Fg = 1.118 x 10-5 × 10 × (3000)2
Fg = 1.000
II. DISCUSSÃO
A partir dos métodos realizados (pesagem de massa seca, volume de centrifugado e turbidimetria) torna-se possível a determinação das concentrações em % v/v, % m/v e número de células/mL da suspensão de 15g de fermento em 100mL de água destilada.
Isto é, através do cálculo de massa seca obtém-se o resultado de umidade em 68% do fermento. Entretanto, essa umidade evapora completamente, após a manipulação dessa amostra na estufa a 105°. A amostra fica mantida dentro dessa estufa até atingir massa constante, a fim de obter dados que representam apenas a quantidade de leveduras presentes. Nesse caso, a quantidade de leveduras reconhecidas foi de 32%, sendo este um valor bem próximo do teórico, que se mantém em torno de 30%.
Além disso, pôde-se observar que tanto como a curva padrão 1 (ABS x Concentração g/mL), como na curva padrão 2 (ABS x Concentração mL/mL) como na curva padrão 3 (ABS x Número de Células/mL) os valores de R, mantiveram-se bem próximos, sendo uma variação bem reduzida, dessa maneira, classificando-a como satisfatória. Sendo assim, entende-se que os 3 métodos apresentam eficácia na quantificação de micro-organismos.
Ademais, o cálculo da força G se faz necessário para que seja possível ser setado o valor certo de centrifugação, independente da máquina utilizada, a fim de fidelizar a quantidade de rotações por minuto.
III. BIBLIOGRAFIA
· BORZANI, Walter; SCHMIDELL, Willibaldo; LIMA, Urgel ; AQUARONE, Eugênio. Biotecnologia Industrial. 1ºedição. São Paulo: Edgard Blucher, 2001. Vol 1