APS de Biotec

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NOME: Giovanna de Azevedo R.A: 1762151 CAMPUS: Liberdade
APS de Biotecnologia de Produtos Farmacêuticos
1- Qual seria o fluxo em um laboratório de biologia molecular para se obter o resultado de um paciente que está realizando uma pesquisa de bactéria por PCR?
R: O fluxo em um laboratório de biologia molecular seria:
1. Coleta da amostra do paciente (por exemplo, swab nasal).
2. Extração do DNA da amostra coletada.
3. Preparação do mix de reação da PCR contendo o DNA extraído, primers específicos para a bactéria a ser detectada, Taq DNA polimerase, dNTPs e tampão de reação.
4. Amplificação do DNA alvo da bactéria por PCR em termociclador.
5. Eletroforese em gel de agarose para análise da amplificação.
6. Interpretação dos resultados da eletroforese para confirmar ou descartar a presença da bactéria de interesse.
7. Elaboração do laudo de resultado para o médico solicitante.
8. Entrega do laudo de resultado ao médico solicitante para o devido acompanhamento do paciente.
2- A reação da PCR consiste em amplificar um fragmento (região específica) de DNA milhões de vezes, para que isso ocorra precisamos preparar a reação previamente. Que reagentes são necessários para a montagem de uma reação de PCR
R: Os reagentes necessários para a montagem de uma reação de PCR são:
1. DNA molde contendo a sequência alvo 
2. Primers que se ligam às extremidades do DNA molde 
3. Dntps os blocos de construção de DNA 
4. Taq DNA polimerase ou outra enzima de polimerase de alta fidelidade 
5. Tamponamento para manter o pH ideal para a atividade da enzima 
6. MgCl2 (cloreto de magnésio) para ativar a enzima 
7. Água estéril para diluir os componentes. 
Todos esses reagentes são misturados em um tubo de reação e submetidos a ciclando térmico específico para produzir amplificação.
3- Quais as etapas que constituem a reação em cadeia da polimerase (PCR)?
R: A amplificação da reação em cadeia da polimerase (PCR) consiste nas seguintes etapas:
1. Desnaturação: O primeiro passo é a desnaturação do DNA alvo a ser amplificado, ou seja, a separação das duas fitas de DNA. Isso é realizado aquecendo a amostra a uma temperatura elevada (96°C), que quebra as ligações de hidrogênio entre as bases nitrogenadas.
2. Anelamento: Após a desnaturação, a temperatura é reduzida (55-65°C) para permitir que os iniciadores (primers) se liguem (anelem) às sequências complementares nas extremidades 3' do DNA alvo. 
3. Extensão: Com os iniciadores devidamente ancorados às extremidades do DNA alvo, a DNA polimerase adiciona novos nucleotídeos, sintetizando uma nova cadeia de DNA complementar a partir de cada uma das fitas que foi previamente desnaturada. A temperatura de extensão geralmente varia entre 72°C, dependendo da enzima de polimerase utilizada.