3 ED Metabolismo (1)

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DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA – IQ 
ESTUDO DIRIGIDO – BIOQUÍMICA - IQB366 – 2021/2 
METABOLISMO 
 
 
 
 
Olá, Bom dia! 
Esse é o último ED da minha parte na disciplina. Não se preocupem, ele só tem 
tamanho... 
Quero agradecer a participação de vocês nas aulas de sexta-feira. Apesar de 
todo inusitado, que é aula “experimental remota”, com a participação de 
vocês, foi bastante amenizado esse impossível, esse inexistente. 
Aproveito para ressaltar a importância e a riqueza do trabalho em equipe. Os 
filmes e o material de teoria de prática, da parte que trata do metabolismo, 
foram produzidos no DBq pelas professoras Danielle e Anita, com apoio dos 
técnicos do Departamento. 
Espero muito mesmo nos vermos no IQ no próximo semestre. Renovo meu 
compromisso de receber vocês para fazermos algumas aulas experimentais no 
laboratório. 
Um grande abraço 
Lucia 
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METABOLISMO 
 
 
Crescimento Celular 
 
7,12 g de Saccharomyces cerevisiae (peso seco), foram inoculadas em 100 mL de meio 
preparado com extrato de lêvedo 1% e glicose 2% (YED 2%). O crescimento foi acompanhado 
retirando-se alíquotas em diferentes tempos para medida da Abs a 570 nm. Os dados referentes 
à curva de crescimento estão na tabela abaixo. Complete a tabela. Para determinar a [celular] 
utilize o fator da curva de peso seco 0,5 (mg massa seca/mL) 
 
 
Tempo 
(horas) 
Fator de diluição 
(X) 
Abs570 nm 
[celular] 
(mg m. s. /mL) 
Log da [celular] 
18 1 0,28 
 
19,5 2 0,28 
 
21 6 0,19 
 
22,5 19 0,12 
 
24,5 20 0,18 
 
27 30 0,15 
 
29 30 0,15 
 
31 50 0,12 
 
33 50 0,18 
 
35 50 0,24 
 
39 100 0,24 
 
 
 
1) Construa a curva de crescimento. Pode entregar arquivo separado ou no texto 
2) Sabendo que somente glicose foi a fonte de energia fornecida, identifique e caracterize, 
do ponto de vista do metabolismo de S. cerevisiae, as fases de fermentação e respiração. 
3) Em qual fase exponencial de crescimento o tempo de geração é maior? Justifique 
 
 
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METABOLISMO 
 
 
Fermentação Alcoólica 
 
 
Uma estratégia para demonstrar a fermentação alcoólica por células de S. cerevisiae, 
numa aula de 4 horas, é um experimento utilizando um mosto YED14% (extrato de lêvedo 1% 
e glicose 14%) e 20,1g de células (peso úmido) Os ensaios são feitos em frasco erlenmeyer de 
500mL (fermentador). Os fermentadores (abertos) são submetidos à agitação e o 
acompanhamento da fermentação é feito por diferença de peso no fermentador. Para isso, a 
cada 20 minutos, a agitação é interrompida e o fermentador é pesado. Repete-se o 
procedimento até 80 minutos. 
 
Pede-se 
1) Explique a estratégia do experimento, com base no metabolismo de S. cerevisiae. 
2) Além do frasco controle, são feitos mais dois ensaios separados, com dois nibidores 
do processo fermentativo: NaF e Etanol. Especule sobre as diferenças da natureza 
do processo de inibição da fermentação alcoólica por NaF e Etanol 
 
Resultado em perda de peso após 80 minutos: 
 
Fermentador 
Perda de peso 
(g) 
Controle 1,6 
NaF 0,1 
Etanol 10%(v/v) 0,5 
 
. 
 
 
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METABOLISMO 
 
 
 
Oxidação Biológica 
 
 
 
 
O esquema mostra a sequência de reações que define parte da CTE. A dosagem da atividade da 
enzima succinato desidrogenase é um experimento que evidencia o Complexo II. A estratégia 
experimental consiste em isolar a mitocôndria de S. cerevisiae , obter a fração mitocondrial (FM) 
e utilizar um aceptor artificial de elétrons que permita acompanhar a reação por 
espectrofotometria na região do visível. Montamos três ensaios descritos na tabela abaixo: 
 
TUBO 
DCPIP 
 (mL) 
TAMPÃO 
(mL) 
AZIDA 
(mL) 
SUCCINATO 
(mL) 
MALONATO 
(mL) 
FM 
(mL) 
VOLUME 
TOTAL 
(mL) 
1 2 0,88 0,07 ---- ------ 0,05 3,00 
2 2 0,81 0,07 0,07 ------- 0,05 3,00 
3 2 0,74 0,07 0,07 0,07 0,05 3,00 
 
Explique a estratégia do experimento ressaltando a função do DCPIP, do malonato e da azida. 
Justifique a participação no experimento de cada um deles 
 
HOOC  CH2  COOH 
Malonato 
HOOC CH2 CH2 COOH
 Succinato
Desidrogenase
E-FAD
COOHHOOC C
H
C
H
E-FADH2
 
Diclorofenolindofenol (DCPIP)
OH
Cl
O
Cl
N
OH
ClCl
NH
OH
Forma Oxidada
 (azul)
Forma Reduzida
 (incolor)