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Daniela Luiza Dorini – Parasitologia Clínica – Farmácia Métodos parasitológicos Método HPJ (HOFFMAN, PONS E JANER) FUNDAMENTO Sedimentação espontânea (ação da gravidade). INDICAÇÃO Detecta ovos e larvas de helmintos e cistos de protozoários. MÉTODO 1. Colocar cerca de 2g de fezes em um copo descartável e adicionar cerca de 20ml de água destilada 2. Homogeneizar com palito 3. Transferir para o cálice coando com gaze ou parasitofiltro. 4. Após coado completar o volume com água corrente. 5. Deixar repousando de 2h a 24h. 6. Após sedimentado pipetar com pipeta de pasteur recolhendo o sedimento do fundo do cálice. 7. Colocar em uma lâmina e adicionar 1 gota de lugol cobrindo com lamínula. Método de baerman-morais FUNDAMENTO Atração de larvas pela água aquecida (termohidrotropismo positivo) INDICAÇÃO Detecção de larvas de nematelmintos especialmente Strongyloides stercoralis e ancilostomídeos. MÉTODO 1. Colocar de 8 a 10 g de fezes sobre gaze dobrada sobre o funil. 2. Adicionar água aquecida a aproximadamente 40ºC deixando as fezes submersas. Daniela Luiza Dorini – Parasitologia Clínica – Farmácia 3. Deixar em repouso por 1h. 4. Abrir a pinça e coletar parte do liquido em vidro relógio e examinar ao microscópio. Ou proceder conforme item 5. 5. Coletar em tubo cônico de centrifuga e centrifugar, examinar o sedimento em lâmina e lamínula corando com lugol. OBSERVAÇÕES Strongyloides stercoralis Método Kato-katz FUNDAMENTO Esfregaço espesso de material fecal clarificado pela solução de verde de malaquita, glicerina e água fenolada. Daniela Luiza Dorini – Parasitologia Clínica – Farmácia INDICAÇÃO Estruturas com envoltório bem marcante e regido, como ovos de Schistosoma mansoni, Ascaris lumbricoides, Thichuris trichuria e outros. MÉTODO 1. Colocar a amostra fecal sobre o papel absorvente. 2. Comprimir a tela metálica ou de nylon sobre as fezes, fazendo com que parte passe através das malhas. 3. Remover as fezes que passaram e transferi-las para o orifício do cartão colocado sobre a lâmina. 4. Remover o cartão deixando as fezes sobre a lâmina. 5. Cobrir as fezes com a lamínula de celofane (previamente embebida em solução de verde malaquita), e pressionar distribuindo as fezes na lâmina. 6. Deixar em repouso durante 30 minutos a cerca de 35ºC ou a temperatura ambiente por 1-2 horas. 7. Examinar ao microscópio. 8. Pode ser feito o cálculo do numero de ovos no material fecal: após a observação e contagem o numero de ovos encontrados é multiplicado por 23 (fator), o valor encontrado será de ovos/g de fezes. OBSERVAÇÕES Ovo de Schistossoma mansoni Ovo de Ascaris lumbricoides Daniela Luiza Dorini – Parasitologia Clínica – Farmácia Método de willis FUNDAMENTO Flutuação de estruturas em solução saturada de cloreto de sódio com base na densidade e propriedade de adesão ao vidro. INDICAÇÃO Ovos leves como de Ancilostomídeos, Trichuris trichuria, Ascaris lumbricoides, Enterobius vermicularis. * os cistos de protozoários são leves e flutuam, porém, são deformados pela osmolaridade da solução, não podendo ser observados. MÉTODO 1. Em um frasco colocar cerca de 1g de fezes e misturá-la gradativamente com uma solução saturada de cloreto de sódio. 2. Após homogeneização, transferir a suspensão para um frasco com aproximadamente 3cm de diâmetro coando o material através de peneira, coador ou gaze. 3. Completar o volume com a solução de cloreto de sódio saturada até formar menisco positivo 4. Colocar lâminula sobre a borda do frasco de modo que fique em contato com o liquido. 5. Aguardar de 15 a 30 minutos e retirar a lâminuna de forma rápida da superfície do frasco 6. Colocar a lâminula sobre a lâmina corando com lugol e observar ao microscópio. OBSERVAÇÕES Ovo de ancilostomídeo Ovo de Trichuris trichiuria’ Daniela Luiza Dorini – Parasitologia Clínica – Farmácia Método de Faust FUNDAMENTO Centrifugo-flutuação em solução de sulfato de zinco. INDICAÇÃO Eficiente para detecção de estruturas mais leves, em particular cistos de protozoários. Útil também na demonstração de ovos e larvas de helmintos. MÉTODO 1. Coletar pequena amostra de fezes adicionar 10ml de água e homogeneizar. 2. Filtrar em gaze dobrada sobre tubo de centrifugação, completar volume do tubo com água 3. Centrifugar por 1 minuto a 250rpm. 4. Descartar sobrenadante 5. Acrescentar água e ressuspender o sedimento. 6. Centrifugar novamente. 7. Observar o sobrenadante, se houver sedimentos repetir o processo. 8. Caso o sobrenadante esteja limpo, completar com solução de sulfato de zinco a 33%. 9. Centrifugar a 2500 rpm por 1 minuto, 10. Colher alíquota do sobrenadante, dispor em uma lâmina acrescentar lugol, adicionar lamínula sobre e observar ao microscópio. ADICIONA-SE SOLUÇÃO DE SULFATO DE ZINCO 33%
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