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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS CURSO: Farmácia DISCIPLINA: NOME DO ALUNO: R.A: POLO: DATA: 2 INTRODUÇÃO: Em 1909, Sir Marc Armand Ruffer descreveu a presença de ovos de Schistosoma haematobium em cortes histológicos de tecido renal de um corpo mumificado, no Egito, datado de 3.200 anos a.C. (Ruffer, 1910). A infecção parasitária é caracterizada como uma doença onde o parasito passa uma de suas fases do ciclo biológico no trato gastrointestinal, ocasionando ou não alguma patologia. Seus agentes causadores são geralmente helmintos e/ou protozoários, que trazem aos seus hospedeiros sintomas de diarreia, dores abdominais, perda de sangue nas fezes, emagrecimento, alterações de humor, ansiedade, agitação e até mesmo alterações nos índices hematológicos, causando principalmente anemia e eosinofilia. (ANTUNES; MORAES, 2019). O desenvolvimento de métodos de diagnóstico para a parasitologia é de fundamental importância no estabelecimento da etiologia das infecções para correta intervenção terapêutica. O diagnóstico imunológico tem sido muito empregado no laboratório clínico pela simplicidade, rapidez de execução e baixo custo operacional. No entanto, existem dificuldades para a padronização dos testes imunológicos em relação à memória imunológica e à semelhança entre os antígenos constituintes dos parasitos, restringindo seu uso no diagnóstico de algumas patologias. (UECKER et al., 2007). Helmintos são parasitos multicelulares adaptados a viver em um hospedeiro vertebrado ou invertebrado. Algumas espécies necessitam de um estágio no ciclo de vida fora deste hospedeiro; podendo ser no solo, água, ou hospedeiro intermediário. Portanto, a infecção por estes parasitos ocorre pela exposição a algum dos fatores citados acima (KING, 2019). Enteroparasitoses são comumente diagnosticadas, apesar das medidas terapêuticas e profiláticas disponíveis. Ovos de helmintos e oocistos de protozoários gastrintestinais são eliminados nas fezes de cães, propiciando a contaminação ambiental e a transmissão de parasitoses para outros hospedeiros. (ANDRESIUK et al., 2003; SCAINI et al., 2003). Os parasitos intestinais estão entre os patógenos mais frequentes do ser humano. Afetam principalmente crianças e pessoas jovens e tendem a desencadear problemas gastrintestinais, diminuição do desenvolvimento corpóreo 3 e psíquico, além de sua direta associação ao atraso escolar. Dados atuais mostram que mais da metade das crianças brasileiras que permanecem em creche são poliparasitadas. Sabendo-se que as enfermidades parasitárias representam um freqüente problema de saúde pública e são apontadas como indicadores de desenvolvimento sócio-econômico de uma população, aponta-se a necessidade constante de se acompanhar as instituições pré-escolares quanto à prevalência de doenças parasitárias.(GIGONZAC et al, 2012). A Técnica de Sheather também conhecida como Técnica de Flutuação em Solução Saturada de Açúcar consiste na flutuação de ovos, cistos ou oocistos de parasitas através da saturação da solução fazendo com que ocorra a flutuação. No exame direto, se procede a diluição e análise nas objetivas supracitadas. As técnicas utilizadas no presente relato seguiram as metodologias descritas por (MONTEIRO, 2017). A técnica de centrífugo-flutuação com sulfato de zinco (Técnica de Faust) (FAUST et al., 1938) é técnica de escolha na detecção de estruturas leves (DUBEY, 1993), podendo também ser usada na detecção de ovos pesados (CARLETON & TOLBERT, 2004), o que sugere ser uma técnica com boa sensibilidade diagnóstica (DRYDEN, 2005; FAUST et al., 1938). Assim, avaliou- se a eficácia do uso da técnica de Faust no diagnóstico coproparasitológico de helmintíases em gatos domésticos. A técnica de sedimentação espontânea pelo método de Hoffmann, Pons e Janer foi desenvolvida para o diagnóstico das enteroparasitoses. Os principais objetivos das técnicas de sedimentação são o aumento da concentração de ovos operculados e não-operculados, larvas ou cistos e o isolamento de óleos e gorduras da maior parte dos detritos. Nessa técnica, os organismos são sedimentados por igual pela gravitação ou quando centrifugados. A sedimentação apresenta uma ação contrária quando comparada com a flutuação. Os cistos, oocistos, ovos e larvas são retidos no fundo do recipiente, enquanto os detritos são suspensos para a superfície,não interferindo no diagnóstico final, com ela podem ser encontrados ovos e larvas de helmintos,bem como cisto (DE CARLI, 2007). O método de Baermann, adaptado para a extração de larvas das fezes, constituí atualmente o processo de maior valor para o diagnóstico da estrongiloidíase. As investigações levadas a efeito por COUTINHO,CAMPOS e 4 AMATO NETO (1951, 1952) atestam claramente tal afirmação. No entanto, infelizmente, êsse recurso Iaboratoríal não tem sido largamente utilizado em nosso país nem mesmo no estrangeiro, fazendo com que muitos casos da parasitose passem despercebidos. Por outro lado, muitas investigações terapêuticas relativas à parasitose levam a conclusões completamente errôneas, por não ser o mencionado processo, empregado a propósito dos contrôles parasitológicos das curas. Método de exame semelhante, porém mais econômico, higiênico e simples, foi preconizado por RUGAI, MATTOS e BRISOLA (1954), que salientaram tratar-se de técnica bastante eficiente para a pesquisa de larvas nas fezes. Visando a avaliar devidamente o real valor do novo processo, efetuamos o presente estudo, comparando tal método ao de Baermann, adaptado para a evídenciação de larvas nas fezes. 5 Resultados e Discussão Aula 1 – Roteiro 1 ( Exame coproparasitológico para pesquisa de protozoários (Sheater ou Faust)). OBJETIVO: Mostrar ao aluno a técnica de exame de fezes para pesquisa de protozoários. Técnica de Sheater: Exame coproparasitológico para pesquisa de protozoários. Finalidade: Exame coproparasitológico qualitativo com princípio de centrífugo- flutuação para pesquisa de cistos e oocistos de protozoários intestinais. Procedimento: Para a realização desse experimento, seguimos rigorosamente as etapas conforme descritos no roteiro de aulas práticas. Exame macroscópico Consistência das fezes Massa homogênea. Cor das fezes Marrom Presença de elementos anormais Vestígios alimentares Exame microscópico: Figura 1 - Trofozoíto de Giardia spp. CONCLUSÃO: Presença de cistos de Giardia Lamblia. Giardíase é uma infecção no intestino delgado causada pelo protozoário Giardia lamblia. A infecção ocorre principalmente quando a pessoa ingere cistos do protozoário (forma que o parasita adquire para resistir a condições ambientais desfavoráveis até conseguir um hospedeiro) presentes em alimentos contaminados por fezes e água sem tratamento. Como uma das formas de se executar o diagnóstico da giardíase, o teste coproparasitológico é bastante indicado devido a sua eficácia no reconhecimento dos cistos. Essa técnica é realizada a partir da forma de flutuação fecal com a 6 utilização do sulfato de zinco. A eliminação das fezes pode ocorrer de forma intermitente e, por isso, os exames fecais devem ser feitos em intervalos de 4 a 5 dias. Metodo de Faust Concluimos que o método de Faust consiste em preparar amostras para análises microscópicas que possam ser analisadas com mais precisão sem muitas distrações que possam levar a observações ou interpretações errôneas. Observamos a presença de cistos de Giardia lamblia nas amostras de fezes. Aula 1 – Roteiro 2 (Identificação de lâminas de protozoários, helmintos e artrópodes emLâminas (microscópio)) OBJETIVO: Mostrar ao aluno a identificação dos protozoários em lâminas prontas. Procedimento: Para a realização desse experimento, seguimos rigorosamente os procedimentos conforme descritos no roteiro de aulas práticas. Exame macroscópico Consistência das fezes Massa homogênea. Cor das fezes Marrom Presença de elementos anormais Vestígios alimentares Exame microscópio Figura 2 - Fonte Própria CONCLUSÃO: Conseguimos observar nas lâminas, diversos tipos parasitas em variadas formas como ovos de Ancilostomídeo e Enterobius vermicularis. Conforme previmos o objetivo da aula foi alcançado com muito e proveito de modo muito satisfatório, pois conseguimos identificar os elementos ali propostos. 7 Aula 2 – Roteiro 1 (Exame coproparasitológico para pesquisa de helmintos (Willis)). OBJETIVO: Mostrar ao aluno a técnica de exame de fezes para a pesquisa de ovos de helmintos. Técnica de Willis Moolay: Exame coproparasitológico para pesquisa de ovos de helmintos. Finalidade: Exame coproparasitológico qualitativo com princípio de flutuação para pesquisa de ovos de helmintos. Procedimento: Para a realização desse experimento, seguimos rigorosamente os procedimentos conforme descritos no roteiro de aulas práticas. Exame macroscópico Consistência das fezes Massa homogênea. Cor das fezes Marrom Presença de elementos anormais Vestígios alimentares Exame microscópio Figura 3 - Fonte Própria CONCLUSÃO: Essa técnica se baseia na propriedade que alguns ovos de helmintos apresentam de flutuarem em uma superfície de uma soluça de densidade elevada e de aderirem ao vidro. Este procedimento é especifico para a pesquisa de ovos de Ancilostomideos. O método Willis Molay é tradicionalmente utilizado para ovos pesados e leves, sendo a técnica relatada por diversos autores por apresentar ótimos resultados em pesquisas de ovos, cistos e oocistos. Aula 3 – Roteiro 1 (Exame coproparasitológico direto a fresco) OBJETIVO: Mostrar ao aluno a identificação de trofozoítos, cistos e oocistos de protozoários e de ovos e larvas de helmintos. 8 Procedimento: Para a realização desse experimento, seguimos rigorosamente os procedimentos conforme descritos no roteiro de aulas práticas. Exame macroscópico Coloração das fezes Amarelas Consistência das fezes Sólida Presença de elementos anormais Resíduos alimentares Exame microscópio Figura 4 - Fonte Própria RESULTADO: Analisamos a presença de resíduos vegetais, fibras vegetais, gotículas de gordura também foram identificadas. Sem presença de sangue ou muco. Porem encontrou presença de larvas de strongyloides conforme mostra a imagem registrada na análise. Aula 3 – Roteiro 2 (Exame coproparasitológico para pesquisa de helmintos (Hoffman)). OBJETIVO: Proporcionar a realização da técnica de exame de fezes para pesquisa de ovos “pesados” de helmintos, em especial da classe Cestoda e Trematoda. Técnica de Hoffman: Exame coproparasitológico para pesquisa de ovos “pesados” de helmintos. Finalidade: Exame coproparasitológico qualitativo com princípio de sedimentação para pesquisa de ovos de helmintos Procedimento: Para a realização desse experimento, seguimos rigorosamente os procedimentos conforme descritos no roteiro de aulas práticas. Exame Microscópio 9 Coloração das fezes Marrom escuro Consistência das fezes Sólida Presença de elementos anormais Resíduos alimentares Exame Microscópio Figura 5 - Fonte Própria CONCLUSÃO: Observamos que a parasitologia é o estudo dos parasitas ou de doenças parasitárias humanas, bem como seus métodos de controle e diagnóstico. Através da aula prática podemos aprender a realizar exames de fezes como o exame direto e exame de Hoffman. E olhar na microscopia e analisar os resultados. Na amostra que utilizamos não foram vistos ovos de Ascaris Lumbricoides, Ancylostomatida, ovos de Schistosoma mansoni e cistos de parasitas. Porém analisamos outra amostra de fezes e nela conseguimos verificar a presença de larvas de strongyloides e ovos de helmintos alarvados. Aula 4- Roteiro 1 (Exame coproparasitológico para pesquisa de larvas.) OBJETIVO: Mostrar ao aluno a identificação de larvas de parasitas intestinais utilizando a técnica de Rugai. Procedimento: Para a realização desse experimento, seguimos rigorosamente os procedimentos conforme descritos no roteiro de aulas práticas. Exame macroscópico Consistência das fezes Massa homogênea. Cor das fezes Marrom Presença de elementos anormais Vestígios alimentares Exame microscópio 10 Figura 6 - Fonte Própria CONCLUSÃO: A identificação de alguns tipos de parasitas intestinais e de suas formas evolutivas é necessária o emprego de técnicas especiais específicas, já que os métodos de rotina empregados pelos laboratórios clínicos podem não ser capazes de recuperá-los satisfatoriamente. O método de Rugai se mostrou eficiente na pesquisa de larvas, observamos microscopicamente larvas de strongyloides na amostra de fezes analisada. Este método demonstrou ser econômico eficiente e de simples execução. 11 Referências Bibliográficas ANDRESIUK, M. V.; DENEGRI, G. M.; ESARDELLA, N. H.; HOLLMANN, P. Encuesta coproparasitológico canina realizado em plazas publicas de la ciudad de Mar del Plata, Bueno Aires, Argentina. Parasitología Latinoamericana, v.58, n.1-2, p.17-22, 2003. ANTUNES, Rafael Souza; MORAIS, Amanda Ferreira de. Correlação de alterações hematológicas em doenças parasitárias. RBAC, v. 51, n. 3, p. 191- 5, 2019. CARLETON, R.E.; TOLBERT, M.K. Prevalence of Dirofilaria immitis and gastrointestinal helminthes in cats euthanized at animal control agencies in northwest Georgia. Veterinary Parasitology, v.119, n.4, p.319-326, 2004. COUTINHO,J. O., R. CAMPOSe V. AMATONETO - 1951 - Notas sôbre diagnóstico e prevalência da estrongiloidose em São Paulo. Rev. Clín. S. Paulo 27: 1-10. DE CARLI, G. A.. Parasitologia clínica: Seleção de métodos e técnicas de laboratório para diagnóstico das parasitoses humanas. 2 ed. Rio de Janeiro: Atheneu, 2007. DRYDEN, M.W. Comparison of common fecal flotation techniques for the recovery of parasite eggs and oocysts. Veterinary Therapeutics, v.6, n.1, p.15- 28, 2005 DUBEY, J.P. Intestinal protozoa infections. Veterinary Clinics of North América: Small Animal Practice, v.23, n.1, p.37-55, 1993. FAUST, E.C. et al. A critical study of clinical laboratory technics for the diagnosis of protozoan cysts and helminth eggs in feces I. Preliminary communication. American Journal of Tropical Medicine, v.18, p.169-183, 1938. GIGONZAC, Marc Alexandre Duarte et al. Determinação da frequência de parasitos intestinais em crianças de uma Creche da cidade de Anápolis utilizando diferentes métodos laboratoriais. Revista Movimenta ISSN, v. 5, n. 2, p. 2012, 2012. King CH. Helminthiasis Epidemiology and Control: Scoring Successes and Meeting the Remaining Challenges. Advances in Parasitology. 2019; 103: 11- 30. MONTEIRO, SG. Parasitologia na Medicina Veterinária. 2° ed. Rio de Janeiro, Editora Roca, 2017. 370p. RUFFER, Marc Armand. Nota sobre a presença de “Bilharzia haematobia” em múmias egípcias da vigésima dinastia [1250-1000 aC]. British Medical Journal , v. 1, n. 2557, pág. 16 de 1910. 12 RUGAI,E., T. MATTOSe A. P. BRISOLA- 1954 - Nova técnica para isolar larvas de nematóides das fezes - modificação do método de Baermann. Rev. Inst. Adolfo Lutz 14: 5-8. UECKER, Marilei et al. Infecções parasitárias: diagnóstico imunológico de enteroparasitose. Rev. bras. anal. clin, p. 15-19, 2007.
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