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Bases Biológicas Aline de Camargo Manfredini <número> Prática 1: Extração do DNA OBJETIVO O objetivo dessa atividade prática é a identificação do DNA extraído a partir de material vegetal em solução de lise. Metodologia ETAPA 01 - Coloquei ¾ de água (natural) no copo, acrescentei uma colher de detergente líquido incolor e uma colher de chá de sal de cozinha e misturei bem com o auxílio de uma colher. Fiz uma solução de lise que usei para extrair o DNA do material vegetal. ETAPA 02 - Piquei a cebola em pequenos pedaços e coloquei tudo dentro de um copo com a solução de lise. Misturei tudo e cobri com plástico filme o copo. ETAPA 03 - Coloquei o copo com o material em água já aquecida (Banho Maria no fogo baixo) por 20 minutos. ETAPA 04 - Retirei o copo com material de dentro da água quente e filtrei o material utilizando o coador de café com papel filtro em um outro copo, coloquei até a metade do copo. Cobri com papel filme o copo com material coado e dei banho de gelo e deixei esfriar por cerca de 5 minutos. ETAPA 05 - Retirei o copo do gelo e adicionei o álcool gelado (coloquei no congelador um dia antes, não congelou) com muito cuidado e pela parede do recipiente e deixei descansar um pouquinho. ETAPA 06 - Observei o DNA precipitando como uma nuvem esbranquiçada na divisa entre a água e o álcool, levou de 5 a 10 minutos para o DNA ficar visível, finalizei assim a extração de DNA. PRÁTICA 1 Extração de DNA Vegetal Figura 1: Materiais Figura 2: Materiais Figura 3:Extração do DNA <número> PRÁTICA 1 Extração de DNA Vegetal Figura 4: Água quente mais clara de ovo Figura 5: Vinagre mais clara de ovo Figura 6: Álcool mais clara de ovo PRÁTICA 1 Extração de DNA Vegetal Conclusão -Usei o bulbo da cebola por apresentar células grandes (DNA ampliado), que se romperam quando a cebola foi picada. -O detergente dissolveu as membranas lipídicas e desintegrou os núcleos e os cromossomos das células da cebola, liberando o DNA que ficou disperso na solução. O detergente desnaturou as proteínas separando-as do DNA cromossômico. -O sal que foi adicionado contribuiu com íons positivos que neutralizaram a carga negativa do DNA, logo o DNA precipitou na solução. -O álcool gelado, proporcionou uma mistura heterogênia (duas fases), fez com que as moléculas de DNA se aglutinassem, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada. -O DNA não se dissolveu no álcool. Pelo fato do DNA ser menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares, ele se localiza na interface da fase alcoólica e aquosa. PRÁTICA 2 Desnaturação de Proteínas A desnaturação da Albumina (proteína da clara do ovo) Etapa 1 - Peguei 3 ovos, quebrei e reservei apenas a clara, adicionei uma clara em cada copo totalizando 3 copos com clara (ou recipientes transparentes). Etapa 2 - No primeiro copo já com a clara adicionei 2 colheres de água fervente. Etapa 3 - No segundo copo com a clara adicionei 2 colheres de vinagre. Etapa 4 - E no terceiro copo com a clara adicionei 2 colheres de álcool. Etapa 5 - Observei a proteína desnaturando em cada copo com a mistura do material, após alguns minutos observei a diferença na textura e foi ficando esbranquiçada, a clara do ovo sofreu uma alteração que é visível. A desnaturação da Caseína (proteína do leite) Etapa 1 – Coloquei 50 ml de leite integral em 2 copos. Etapa 2 - No primeiro copo já com os 50 ml de leite, adicionei 15 ou 20 gotas de suco de limão. Etapa 3 - No segundo copo já com os 50 ml de leite, adicionei 1 colher de vinagre. Etapa 4 - Posteriormente aguardei alguns minutos e observei que o leite vai coalhar, formando um resíduo que se separou do líquido e ao filtrá-lo consegui observar mais claramente, a desnaturação desta proteína. PRÁTICA 2 Desnaturação de Proteínas