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Bases Biológicas Jessica Emili Bejamim Almeida 1 PRÁTICA 1 Extração de DNA Vegetal OBJETIVO O objetivo dessa atividade prática é a identificação do DNA extraído a partir de material vegetal em solução de lise. METODOLOGIA Aula pratica realiza na cozinha de casa com materiais que tenho em casa. Materiais utilizados na aula pratica. 1 Cebola grande 2 Copos 1 Colher sopa 1 Colher de chá 1 Filtro de café 1 Coador de café Água Plástico filme Detergente incolor Sal de cozinha Panela com Água (Banho Maria) Descanso de panela de metal (que caiba dentro da panela Vasilha com gelo (Banho de gelo) Álcool 92% (gelado) 1 par de Luvas de Procedimento (látex) Figura 1- Materiais utilizados. 2 PRÁTICA 1 Extração de DNA Vegetal ETAPA 01 - Coloque ¾ de água (natural) no copo, acrescente uma colher de detergente líquido incolor (sem mexer muito para não espumar) e uma colher de chá de sal de cozinha e misture bem com o auxílio de uma colher. Essa é a solução de lise que vamos utilizar para extrair o DNA do material vegetal. Figura 2- processo de lise ETAPA 02 - Pique o material vegetal (cebola) em pequenos pedaços – quanto menor eles forem, melhor, e coloque tudo dentro do recipiente (copo) com a solução de lise. Misture tudo vagarosamente para evitar a formação de bolhas devido a presença de detergente na solução e cubra com plástico filme o copo. Figura 3 – mistura cebola com lise. PRÁTICA 1 Extração de DNA Vegetal ETAPA 03 - Coloquei o copo com o material em água já aquecida (Banho Maria no fogo baixo) por 20 minutos.(figura 4) Figura 4- banho maria ETAPA 04 - Retirei o copo com material de dentro da água quente e filtrei o material utilizando o coador de café com papel filtro em um outro copo, colocando até a metade do copo.(figura 5) Figura 5- Filtrando PRÁTICA 1 Extração de DNA Vegetal ETAPA 05 - Com o material coado, dei banho de gelo e deixei esfriar por cerca de 5 minutos.(figura 6) Figura 6- Banho de gelo ETAPA 06 - Retirei o copo do gelo e adicionei o álcool gelado (colocar no congelador24 horas antes) com muito cuidado e pela parede do recipiente. O volume de álcool adicionado deve ser aproximadamente o mesmo do material filtrado, e deixei descansar uns 10 minutos.(figura7) Figura 7- Adicionando Alcool PRÁTICA 1 Extração de DNA Vegetal ETAPA 07 - Observe o DNA precipitando como uma nuvem esbranquiçada na divisa entre a água e o álcool(figuras 8,9), leva de 5 a 10 minutos para o DNA ficar visível, finalizando assim a extração de DNA.(figura 10) Figuras 8,9 – precipitação DNA Figura 10- DNA visível 6 PRÁTICA 1 Extração de DNA Vegetal CONCLUSÕES Nesta atividade conseguimos extrair o DNA de um vegetal de uma forma simples e rápida, se os passos forem feitos com atenção. • Não encontrei nenhumas dificuldade em conseguir os materiais para realizar a atividade. • Todos os objetivos propostos foram alcançados, gostei muito da atividade proposta e consegui entender. • Uma dificuldade que tive foi apenas em tirar as fotos pois devido a falta de equipamento adequado não deu para ver nitidamente o DNA, ao finalizar o experimento. PRÁTICA 2 Desnaturação de Proteínas OBJETIVO O objetivo dessa atividade prática é observar as alterações sofridas nas proteínas do ovo (albumina) e do leite (caseína) submetendo elas a diferentes tratamentos para que o processo de desnaturação aconteça, ou seja, a estrutura de uma proteína sendo mudada. METODOLOGIA 6 copos ou recipiente de vidro transparente 3 Ovos Álcool Vinagre Água fervente 100 ml Leite Integral 1 Limão Vinagre 1 copo medidor 1 colher de sopa 30 cm fio de barbante 1 pedaço de pano 20x20 (tecido de fralda) 1 par de Luvas de Procedimentos (látex) 8 PRÁTICA 2 Desnaturação de Proteínas A desnaturação da Albumina (proteína da clara do ovo) Etapa 1 - Pegue 3 ovos, quebrando reserve apenas a clara adicione uma clara em cada copo totalizando 3 copos com clara (ou recipientes transparentes). Etapa 2 - No primeiro copo já com a clara adicione 2 colheres de água fervente Etapa 3 - No segundo copo com a clara adicione 2 colheres de vinagre Etapa 4 - E no terceiro copo com a clara adicione 2 colheres de álcool Etapa 5 - Observe a proteína desnaturando em cada copo com a mistura do material, após alguns minutos é possível observar a diferença na textura e vai ficando esbranquiçada, a clara do ovo sofre uma alteração que é visível. Vinagre Água Alcool PRÁTICA 2 Desnaturação de Proteínas A desnaturação da Caseína (proteína do leite) Etapa 1 - Coloque 50 ml de leite integral em 2 copos (ou recipientes transparentes). Etapa 2 - No primeiro copo já com os 50 ml de leite, adicione 15 ou 20 gotas de suco de limão. Etapa 3 - No segundo copo já com os 50 ml de leite, adicione 1 colher de vinagre. Leite coalhando Etapa 4 - Posteriormente aguarde alguns minutos e você irá observar que o leite vai coalhar, formando um resíduo que se separa do líquido e ao filtrarmos conseguimos observar mais claramente, a desnaturação desta proteína. Separação da coalha da proteína. PRÁTICA 2 Desnaturação de Proteínas Conclusões • Nesta atividade consegui compreender um pouco mais sobre a desnaturação. • Desnaturação é a perda da forma tridimensional de uma proteína, que ocorre por ação de qualquer fato capaz de destruir as estruturas secundárias, terciárias e ou quaternária. Como consequência da desnaturação proteica podemos observar os seguintes efeitos; diminuição de solubilidade, Perda da atividade biológica, alterações na viscosidade e coeficiente de sedimentação, etc. A desnaturação é o evento primário e importante. Outros efeitos como floculação ou coagulação são manifestações visíveis das alterações causadas pelos agentes desnaturantes. Aprendemos que cada proteína tem seu PH e temperaturas ideais para um pleno funcionamento. • Todos os objetivos foram alcançados, consegui desenvolver muito bem tudo que foi solicitado. Nos 2 experimentos aprendemos na prática formas de desnaturação proteica.
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