Microbiologia - Meios de Cultura, Provas de Controle de Qualidade, Isolamento e Identificação, Determinação de Sensibilidade

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MICROBIOLOGIA
Meios de Cultura, Provas de Controle de 
Qualidade, Isolamento e Identificação, 
Determinação de Sensibilidade
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Isolamento e Identificação, Determinação de Sensibilidade
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Pollyana Lyra
Sumário
Meios de Cultura, Provas de Controle de Qualidade, Isolamento e Identificação, 
Determinação de Sensibilidade ...............................................................................................................................3
1. Meios de Cultura, Condições Gerais de Preparo e Armazenamento ..............................................3
1.1. Classificação dos Meios de Cultura ...............................................................................................................4
1.2. Preparo de Meios de Cultura .............................................................................................................................5
1.3. Armazenagem ............................................................................................................................................................5
1.4. Meios de Cultura ......................................................................................................................................................6
2. Provas de Controle de Qualidade ......................................................................................................................7
3. Isolamento e Identificação de Bactérias e Fungos de Interesse Médico ...................................7
3.1. Diferenciação de Bactérias Gram Positivas .............................................................................................7
3.2. Diferenciação de Bactérias Gram Negativas .........................................................................................11
3.3. Diferenciação de Fungos ..................................................................................................................................12
4. Determinação de Sensibilidade das Bactérias aos Antimicrobianos.........................................14
Questões de Concurso ................................................................................................................................................17
Gabarito .............................................................................................................................................................................. 22
Gabarito Comentado ...................................................................................................................................................23
Referências ........................................................................................................................................................................31
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MEIOS DE CULTURA, PROVAS DE CONTROLE DE 
QUALIDADE, ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO, 
DETERMINAÇÃO DE SENSIBILIDADE
1. Meios de Cultura, Condições Gerais de PreParo e arMazenaMento
Meios de cultura são produtos preparados para análise de microrganismos que possuem, 
em suas fórmulas, nutrientes para o crescimento e desenvolvimento dos mesmos fora do seu 
habitat natural.
Por exemplo, os fungos e as bactérias, ao consumir esses produtos, são capazes de cres-
cer e se desenvolver em uma placa de petri para que sejam feitas análises relacionadas, espe-
cialmente com interesse clínico. Também podem ser utilizados para fins de controle de quali-
dade de medicamentos, sobretudo do ponto de vista de contaminações oriundas do processo 
de fabricação.
Cada tipo de meio de cultura é indicado para uma determinada função e um microrganismo 
específicos: alguns têm a função de nutrir e estimular o crescimento, outros inibem determina-
do microrganismo e conseguem indicar seu potencial hidrogeniônico.
Como comentei anteriormente, existem diversos meios de cultura e eles são usados em 
análises laboratoriais e estudos científicos em diversas áreas, principalmente em alimentos, 
água, cosméticos e microbiologia clínica.
A primeira coisa que precisamos entender é que antes de utilizar, precisamos preparar 
esses produtos para o uso.
Antes de preparar o meio de cultura para iniciar a análise, é necessário que se faça a coleta 
do material de forma adequada, já que se trata de uma etapa crítica.
Vejam alguns sítios de coleta comuns em laboratório clínico e observações relevantes para 
a prova e exemplo de agente pesquisado.
• Trato respiratório superior: isolar Streptococcus pneumoneae (alfa hemolíticos);
• Trato respiratório inferior: amostra (escarro) deve ser coletada em jejum (S. aureus);
• Trato urinário: jato médio em recipiente estéril (S. saprophyticus);
• Sangue: no momento da bacteremia (cocos Gram+ e bacilos Gram);
• Lesões cutâneas: evitar sangue (Leishmania);
• Trato gastrointestinal: fezes (pesquisa de ovos e parasitos);
• Líquor: coleta exige anestesia, feita pelo médico por punção lombar (N. meningitidis).
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1.1. ClassifiCação dos Meios de Cultura
Os meios podem ser classificados da seguinte forma:
Meios de Cultura de Transporte: utilizados para o transporte e manutenção de amostras 
biológicas como fezes e secreções. São inertes, pois permitem a viabilidade da maioria dos 
patógenos sem alterar a sua concentração.
Meios Enriquecidos são diferentes de Meios de Enriquecimento!
Os enriquecidos são os que proporcionam crescimento microbiano sem seletividade nenhu-
ma, já os de enriquecimento contêm produtos que proporcionam somente crescimento de 
determinado grupo de microrganismo, são os chamados diferenciais.
Os meios cromogênicos permitem a identificação direta de uropatógenos em 24 horas de 
incubação por meio da cor (E. coli, Klebsiela, P. mirabilis, Enterococos).
DICA
Vejam bem, são incontáveis os meios de cultura disponíveis 
na literatura, portanto, vamos destacar os mais frequente em 
provas, os quais você DEVE memorizar! Geralmente quando 
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cai um meio diferente em provas, você, sabendo esses que va-
mos ver, consegue resolver as questões por exclusão.
1.2. PreParo de Meios de Cultura
Pessoal, os meios de cultura, em sua maioria, são industrializados. Então, devem ser prepa-
rados de acordo com o rótulo do fabricante, mas basicamente cumpre-se o seguinte processo:
PESAGEM DO PÓ  TRANSFERÊNCIA PARA UM FRASCO  HIDRATAR 
 FUNDIR (SOB AQUECIMENTO) NO MICROONDAS OU BANHO MARIA 
 DISTRIBUIR NOS TUBOSESTÉREIS  AUTOCLAVAR (121ºC POR 15 
MINUTOS) COM A TAMPA SEMI ABERTA  PRONTO!
Observação: A tampa deve ficar dessa forma para evitar que 
forme trânsito de vapor para dentro do frasco.
1.3. arMazenaGeM
Em geral, os meios preparados devem ser guardados em geladeira (2º a 8ºC). O efeito no-
civo vinculado ao armazenamento é a desidratação (o que não se observa em meios líquidos, 
claro! Mas meios preparados em placa e que tem uso pouco frequente acabam perdendo a 
umidade e danificando seu potencial de nutricional.) Para minimizar o problema é recomendá-
vel armazenar dentro de sacos plásticos em posição invertida.
Os meios que ainda não estão preparados, estão em pó, assim, devem seguir as orienta-
ções do fabricante quanto ao armazenamento. Geralmente eles recomendam que seja em 
local fresco, protegido da luz e umidade.
Todos os meios devem ser levados à temperatura ambiente antes do seu uso.
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1.4. Meios de Cultura
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2. Provas de Controle de Qualidade
Para comprovar a esterilidade do meio, é recomendado que se reserve 10% do meio de 
cultura e incube a 35ºC por 24 horas. Após esse tempo, não deve haver crescimento. Já para 
comprovar a capacidade de cultivo do meio, podemos lançar mão de cepas bacterianas indus-
trializadas, que já são disponibilizadas de forma purificada (contém apenas o microrganismo 
de interesse) e liofilizada para controle de qualidade do meio de cultura.
001. (CESPE/UNIPAMPA/FARMACÊUTICO BIOQUÍMICO) Julgue o próximo item, que versa 
sobre meios de cultura.
A composição do meio de cultura independe da exigência nutricional do mi-
crorganismo.
Se a exigência nutricional não for observada, não haverá crescimento do mi-
crorganismo.
Errado.
002. (MUNICÍPIO DE SÃO GONÇALO DO RIO ABAIXO-MG/BIOQÚIMICO) Qual dos seguintes 
meios de cultura é indicado para o cultivo de fungos?
a) Ágar chocolate.
b) Ágar sangue
c) Sabouraud.
d) Mac Conkey.
e) Caldo tioglicolato.
Mesmo sabendo que o ágar sangue cultiva certas leveduras, o Ágar Sabouraud é 
o mais adequado para cultura de fungos.
Letra c.
3. isolaMento e identifiCação de BaCtérias e funGos de interesse MédiCo
3.1. diferenCiação de BaCtérias GraM Positivas
Memorize o esquema abaixo de diferenciação de Bactérias Gram positivas:
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Sobre o esquema anterior:
A identificação presuntiva começa com a inoculação primária na placa de ágar sangue de 
carneiro que deve ser incubada em 5% de tensão de CO² (método da vela ou estufa de CO2). As 
colônias de estafilococos são geralmente maiores, convexas, de coloração variando do bran-
co-porcelana a amarelo podendo apresentar hemólise ou não. Note que o desenvolvimento da 
cor amarelada no S. aureus ocorre somente após incubação prolongada (72h), à temperatura 
ambiente. As colônias de estreptococos tendem a serem menores (puntiformes), e com halos 
de hemólise total ou parcial (beta e alfa hemólise). A diferenciação entre os estreptococos e 
os estafilococos se dá, seguramente, pela prova da catalase.
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• Prova da Catalase
Com a alça bacteriológica ou com um palito coleta-se o centro de uma colônia suspeita 
e esfrega-se em uma lâmina de vidro. Colocar sobre este esfregaço uma gota de água oxige-
nada a 3% e observar a formação de bolhas. Para a família Microccocacea (estafilococos), 
a prova é geralmente positiva, enquanto para a família Streptococcacea (estreptococos) 
é negativa.
• Identificação de Estafilococos
O teste mais importante na identificação da família Micrococcaceae é a prova da catalase. 
Tal família é composta de quatro gêneros: Planococcus, Micrococcus, Stomatococcus e Sta-
phylococcus.
O gênero Staphylococcus apresenta 32 espécies e 14 subespécies, sendo que somente 15 
espécies são encontradas em amostras humanas. De uma maneira prática, os estafilococos 
são divididos em duas categorias: coagulase positivos e coagulase negativos, de acordo com 
a resposta ao teste da plasmo coagulase.
• Teste da Coagulase em Lâmina
A maioria das cepas de Staphylococcus aureus possui a coagulase ligada (ou fator agluti-
nante, clumping factor) na superfície da parede celular, que reage com o fibrinogênio do plasma 
causando a coagulação do mesmo.
−	 Colocar 2 gotas de salina em uma lâmina;
−	 Emulsionar uma colônia isolada a ser testada;
−	 Colocar uma gota de plasma e misturar com um palito de plástico ou 
madeira;
−	 Observar se há aglutinação em 10 segundos.
Não se pode executar este teste a partir de um ágar com grande concentração de sal, como 
ágar manitol.
• Teste da Coagulase em Tubo
Este teste baseia-se na presença da coagulase livre, que reage com um fator plasmáti-
co formando um complexo que atua sobre o fibrinogênio e forma a fibrina. O teste é melhor 
efetuado se:
−	 Adicionar 0,1 ml de caldo BHI, incubado por uma noite, com colônia 
suspeita a um tubo de ensaio com 0,5 ml de plasma;
−	 Incubar por 4 horas à 35ºC em estufa ou banho maria;
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−	 A formação do coágulo é observada pela inclinação suave do tubo de 
ensaio a 90 graus da vertical.
Um método alternativo é a emulsificação desta mesma colônia suspeita em um 0,5 plas-
ma, incubado da mesma forma. Qualquer coágulo indica uma prova positiva, porém, não con-
fundir com precipitados ou floculação. O melhor plasma a ser usado é o de coelho com EDTA, 
não devendo ser usado o plasma humano vindo do banco de sangue.
• Teste da Resistência à Novobiocina
A cepa é semeada de maneira semelhante ao antibiograma em placa de Muller Hinton 
acrescida de umdisco teste de novobiocina contendo 5 µg. As amostras resistentes mostram 
zonas de inibição de 6 a 12 mm, enquanto as susceptíveis apresentam halos de 16mm ou 
mais. As cepas de Staphylococcus saprophyticus são resistentes.
• Teste da Bile Esculina e do NaCl 6,5%
−	 Semear as provas de Bile Esculina e do caldo de NaCl a 6,5%;
−	 Incubar da mesma forma;
−	 Teste da bile esculina positiva apresenta cor marrom escuro, e o do 
caldo de NaCl a 6,5% deve mostrar turvação para ser considerado po-
sitivo.
Todos os estreptococos do grupo D de Lancefield apresentam a bile esculina positiva, seja 
Enterococcus sp ou Streptococcus do grupo D não enterococo (Streptococcus bovis). Quanto 
ao teste da tolerância ao NaCl a 6,5%, somente os enterococos são positivos.
• Identificação dos Estreptococos Não Beta Hemolíticos
Somente os estreptococos do grupo B (Streptococcus agalactiae) e D (Enterococcus spp. e 
Streptococcus bovis) podem não apresentar nenhuma hemólise, a denominada gama hemólise.
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• Identificação dos Estreptococos Alfa Hemolíticos
A identificação deste grupo não deve ser feita por métodos sorológicos, pois a maioria não 
possui os antígenos de Lancefield.
3.2. diferenCiação de BaCtérias GraM neGativas
Pessoal, esse espectro bacteriano é muito vasto, mas as principais bactérias Gram negati-
vas de interesse clínico podem ser facilmente identificadas após isolamento em meio seletivo 
para Gram negativas seguido de testes preparados no laboratório, desde que submetidos a 
controle de qualidade.
Os kits são adquiridos no comércio e são acompanhados dos respectivos esquemas de 
identificação.
Tabela de interpretação de provas bioquímicas para identificação de Gram negativas.
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Métodos rápidos, em geral, utilizam substratos cromogênicos para detecção de enzimas 
produzidas pelas bactérias e que se revelam após 4 a 6 horas de incubação.
Na rotina bacteriológica, existem várias alternativas e, com base em conjuntos ou sistemas 
simplificados de provas bioquímicas, é possível realizar a triagem e identificação presunti-
va dos principais gêneros de interesse clínico. Desse modo, das enterobactérias isoladas de 
amostras clínicas, cerca de 90% podem ser perfeitamente identificadas através desses esque-
mas, podendo o resultado ser entregue dentro de um espaço de tempo relativamente curto, 
geralmente entre 48 a 72 horas.
Os esquemas de identificação baseiam-se na determinação dos gêneros e espécies mais 
isolados na clínica e nas provas mais características de cada gênero e espécie, baseado em 
alguns critérios como: facilidade de execução, facilidade de interpretação, custo, rapidez para 
leitura etc.
3.3. diferenCiação de funGos
Os fungos se dividem em leveduras (seres unicelulares, ex. cândida) e bolores, que são 
filamentosos e pluricelulares (contém hifas que formam micélio e originam o bolor), então, a 
diferenciação deles pode ser feita por microscopia, analisando a morfologia, ou por cultivo em 
meios de cultura especiais para isolamento de fungos.
À esquerda leveduras, e à direita hifas (bolores).
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O Aspergilus é fungo de interesse médico, pois produz uma micotoxina chamada aflotoxi-
na. Ele está presente em alimentos.
Exames Microscópicos de Fungos
• Primeiro, precisamos separar o que é fungo e artefato da lâmina. Para isso é feita a 
coloração GRAM (que vimos anteriormente). Sabendo que todos os artefatos não têm 
camada de mureína (peptideoglicano densa), portanto não retém o corante Gram, o que 
ficar positivo na lâmina só pode ser fungo.
• Se a amostra tiver origem de material denso (por exemplo, pelos e unha), trata-se com 
KOH 20% e observa-se ao microscópio.
• Se a amostra for líquida, trata-se com tinta da China (nanquim) e observa-se ao microscópio.
• Para amostras específicas (medula, sangue, aspirados), utilizam-se colorações específi-
cas (Giemsa, Leishman, Wright).
Pessoal, existem fungos chamados de mórficos. Eles são filamentosos, mas assumem a for-
ma de leveduras em certas ocasiões (acima de 30ºC). A forma de comprovação é feita por 
microscopia, pois não se trata nem de leveduras e nem de bolor, mas sim das duas formas 
simultaneamente.
Veja a seguir uma questão do CESPE:
003. (CESPE/FUB) A respeito de microrganismos, julgue o item a seguir.
Leveduras e fungos filamentosos são seres multinucleados.
Leveduras são seres unicelulares.
Errado.
Para evitar confusão na hora de identificar morfologicamente ao microscópio, é recomen-
dado o uso de meios de cultura específicos para o microrganismo suspeito.
MEIO FINALIDADE
ASD (ágar sabouraud dextrose). O meio básico para fungos, contémcloranfenicol para inibir as bactérias.
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MEIO FINALIDADE
Ágar DTM (dermathophyte test medium); 
Ágar batata. Para dermatófitos.
Candida medium; Biggy agar; CHROM agar. Presuntivo para espécies deCândida.
BHI
Variedade de tipos de organismos, 
incluindo bactérias, leveduras e fungos 
filamentosos.
Ágar + compostos fenólicos. Cryptococus sp.
Obs.: � Os meios seletivos para fungos patogênicos têm cicloheximida, cujas 
funções são: isolar dermatófitos, inibir anemófilos e oportunistas.
4. deterMinação de sensiBilidade das BaCtérias aos antiMiCroBianos
Antibiograma é o ensaio in vitro que objetiva medir a susceptibilidade ou resistência de uma 
bactéria aos antibióticos por meio do espectro de sensibilidade observado na placa de cultura.
Os antibióticos são prescritos aos pacientes com base na sensibilidade do microrganismo 
suspeito, já que o objetivo é justamente eliminar o agente infeccioso. Todavia, várias bactérias 
apresentam resistência a certas classes de antibióticos, conferindo uma relativa dificuldade 
ao tratamento. Por isso, é muito importante na clínica a confirmação da sensibilidade por meio 
de ensaio.
Vejam agora o passo a passo para o antibiograma:
• Coleta da colônia;
• 2. Suspender com solução salina estéril;
• 3. Embeber swab e semear em 5 direções;
• Aguardar 15’ para secar;
• 5. Colocar os discos de antibióticos(quadro abaixo);
• 6. Incubar (36ºC por 18 a 24 horas).
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ANTIBIÓTICO USO CONTROLE DE QUALIDADE
BACITRACINA
Identifica Streptococcus Beta 
hemolítico do grupo A (S. 
pyogenis).
É + no caso  S. pyogenes
(sensível)
É – no caso  S. agalacteae
(resistente)
Não se mede o halo.
NOVOBIOCINA
Separa o Stafilococcus 
saprophyticus dos demais 
coagulase negativo (ele é o 
único resistente à novobiocina) 
 provoca infecção urinária.
É + se  o microrganismo for 
resistente será Stafilococcus 
saprophyticus
É – se  Der sensibilidade (S. 
epidermides).
OPTOQUINA
(vem da quinina)
Inibe S. pneumoniae em baixas 
concentrações, separando-
os dos Beta hemolíticos (halo 
maior que 14 a 16mm).
É + se  o microrganismo for 
sensível é S. pneumoniae
É – se  o microrganismo for 
resistente é Enterococcos fecale.
Interpretação dos Resultados
São três as possibilidades de resultados:
Placa com antibiograma evidenciando os halos de inibição.
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Além do método de difusão em discos, existe também o método da fita. O procedimento é 
bastante similar ao dos discos, porém, o antibiótico está impregnado em fitas de plásticos. O 
tempo de incubação é 48h, diferentemente da difusão em discos, que é de até 24h.
É basicamente isso que pode aparecer em provas sobre antibiograma, mas fique atento, 
pois existem alguns interferentes nessa leitura, como níveis de cálcio e magnésio, a espessura 
do meio de cultura, concentrações de timidina e timina, e pH.
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QUESTÕES DE CONCURSO
001. (IDECAN/PREF. MATIAS CARDOSO-MG/FARMACÊUTICO-BIOQUÍMICO) Qual dessas 
espécies bacterianas não está potencialmente associada a infecção no trato respiratório?
a) Streptococcus pneumoniae.
b) Helicobacter pylori.
c) Staphylococcus aureus.
d) Estreptococos beta-hemolíticos do grupo A.
e) Haemophilus influenza.
002. (CPCON/PREFEITURA DE CATOLÉ DO ROCHA/BIOMÉDICO) As infecções do trato ge-
niturinário podem ser caracterizadas pela invasão dos tecidos do sistema urinário (rins, bexiga, 
uretra e ureteres) por diversos tipos de microrganismos. Qual das bactérias abaixo NÃO se 
enquadra entre as principais causadoras de infecções do trato geniturinário?
a) Acinetobacter sp.
b) Pseudomonas sp.
c) Salmonella.
d) Klebsiella.
e) Escherichia coli.
003. (AOCP/PREF. FUNDÃO-ES/FARMACÊUTICO BIOQUÍMICO) As bactérias Gram-positi-
vas, especialmente os cocos, estão entre os microrganismos mais frequentemente isolados 
de amostras biológicas humanas em laboratórios de microbiologia. A prova da catalase e co-
agulase positiva é típica na identificação de
a) Streptococcus pyogenes.
b) Staphylococcus aureus.
c) Staphylococcus sp.
d) Streptococcus sp.
e) Staphylococcus epidermidis.
004. (CESPE/FUB) A respeito de microrganismos, julgue o item a seguir.
Leveduras e fungos filamentosos são seres multinucleados.
005. (CESPE/UNIPAMPA/FARMACÊUTICO BIOQUÍMICO) Com relação aos exames de diag-
nóstico em microbiologia, julgue o item que se segue.
Por meio do exame bacterioscópico gram, é possível estudar as características morfotinturiais 
de bactérias, fungos e leucócitos. Esse exame fornece, de maneira rápida, informações impor-
tantes para o início do tratamento do paciente.
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006. (IDECAN/PREF. GONÇALVES DIAS-MA/FARMACÊUTICO-BIOQUÍMICO) Uma bactéria é 
considerada sensível a um antimicrobiano quando seu crescimento é inibido in vitro por uma 
concentração 3 ou mais vezes inferior àquela que o antimicrobiano atinge no sangue. Se a con-
centração inibitória in vitro é igual ou superior àquela que o antimicrobiano atinge no sangue, a 
bactéria é considerada resistente. Acerca disso assinale a alternativa correta:
a) Quando se coloca um disco de papel impregnado com um antimicrobiano na superfície de 
um meio de cultura sólido, já semeado com uma bactéria, o crescimento bacteriano poderá ser 
inibido formando-se um halo de inibição em torno do disco, cujo diâmetro varia de acordo com 
a velocidade de difusão do antimicrobiano e a sensibilidade da bactéria.
b) Se a bactéria for muito resistente ao antimicrobiano haverá halo de inibição proporcional a 
resistência.
c) O diâmetro do halo de inibição é diretamente proporcional à concentração inibitória mínima 
do antimicrobiano.
d) A resistência natural dá-se por alterações genéticas ou alterações dos mecanismos quími-
cos das bactérias, no qual apenas uma parte da população microbiana apresenta.
007. (CESPE/MS/FARMACÊUTICO) Os antibióticos reduziram drasticamente as doenças e as 
mortes causadas por infecções bacterianas. Durante décadas, eles foram utilizados de forma 
indiscriminada, o que levou ao aumento da resistência dos microrganismos a esses antibióti-
cos e gerou um grave problema de saúde pública. Nos últimos anos, vários grupos de pesquisa 
têm dedicado especial esforço na identificação de novas moléculas com capacidade antimi-
crobiana ou na mudança das suas formulações farmacêuticas para melhorar a biodisponibili-
dade do princípio ativo no paciente. Considerando a importância dos antibióticos para a vida 
humana, julgue o item:
A partir da avaliação da sensibilidade de microrganismo aos antibióticos in vitro, é possível 
determinar o sucesso terapêutico do uso de drogas no tratamento de infecções causadas pelo 
microrganismo a ser testado.
008. (CESPE/MS/FARMACÊUTICO) Julgue o item a seguir.
O método de difusão com discos para a determinação da sensibilidade dos microrganismos 
fornece um resultado quantitativo, uma vez que, a partir do halo formado, é possível determinar 
a concentração inibitória mínima.
009. (IDECAN/PREF. SANTO ANTÔNIO DO ITAMBÉ-MG/FARMACÊUTICO-BIOQUÍMICO) A 
identificação definitiva dos membros das Enterobacteriaceae pode exigir uma bateria de testes 
bioquímicos. É possível evitar uma considerável perda de tempo e possível identificação incor-
reta se forem feitas algumas observações preliminares para assegurar que o microrganismo 
queestá sendo investigado pertença a esse grupo. Com poucas exceções, as bactérias da fa-
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mília Enterobacteriaceae possuem características próprias para identificação. De acordo com 
as identificações preliminares, assinale a alternativa INCORRETA.
a) As bactérias fermentam a glicose.
b) Ocorre redução de nitrato a nitrito.
c) Fermentam manitol em Ágar Chapman.
d) O teste é negativo para citocromo-oxidase.
010. (CESPE/SESA-ES/FARMACÊUTICO BIOQUÍMICO) As micoses superficiais são causa-
das por fungos que infectam a pele e regiões adjacentes. Os locais mais afetados são as 
unhas, a pele e os cabelos. Com relação às micoses superficiais e aos métodos utilizados para 
sua detecção, assinale a opção correta.
a) As micoses superficiais são identificadas como ceratofitoses, dermatofitoses e candidíase.
b) Um exame microscópico direto é o método de identificação de micose superficial mais fácil 
de ser realizado; nesse tipo de exame, o fungo deve ser corado com corante de Gram.
c) No meio de cultura de tecidos a serem analisados, é desnecessário o acréscimo de antibió-
tico, pois se utiliza meio seletivo para fungos.
d) Devido à complexidade dos componentes da parede celular, os fungos cutâneos induzem a 
uma forte reação de hipersensibilidade.
e) Quando presente no organismo humano, a Malassezia furfur encontra-se na pele ou no cabe-
lo. A identificação desse fungo ocorre com coloração com tinta da China, sendo desnecessária 
a clarificação com KOH.
011. (MUNICÍPIO DE SÃO GONÇALO DO RIO ABAIXO-MG/BIOQUÍMICO) Estreptococos são 
bactérias responsáveis por infecções de pele. Acerca disso, assinale a alternativa INCORRETA:
a) Os estreptococos são cocos gram-negativos que, frequentemente, crescem 
em cadeias.
b) Os estreptococos são classificados de acordo com suas enzimas hemolíticas e an-
tígenos da parede celular.
c) A erisipela e o impetigo são infecções de pele causadas por estreptococos.
d) Os estreptococos beta-hemolíticos do grupo A invasivos causam destruição teci-
dual severa e rápida.
012. (MUNICÍPIO DE SÃO GONÇALO DO RIO ABAIXO-MG/BIOQUÍMICO) Para uma análise 
microbiológica eficiente, o tempo entre a coleta e a entrega no laboratório deve ser o menor 
possível: algumas amostras devem ser entregues imediatamente, enquanto outras podem de-
morar um pouco mais. Qual desses tipos de amostras possui o maior tempo crítico de entrega, 
sem perda de qualidade?
a) Líquor.
b) Líquido pleural.
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c) Swab.
d) Suspeita de anaeróbios.
e) Urina.
013. (MUNICÍPIO DE SÃO GONÇALO DO RIO ABAIXO-MG/BIOQUÍMICO) As amostras cita-
das a seguir NÃO são recomendadas para o exame microbiológico por fornecerem resultados 
questionáveis, EXCETO:
a) Swab de amostra de queimadura.
b) Vômito.
c) Material de colostomia
d) Biópsia de lesão periodontal.
e) Ponta de cateter de Foley.
014. (HPSP/FARMACÊUTICO/HSPSP) A reduzida capacidade de aderência de algumas bac-
térias às válvulas cardíacas nativas explica, em parte, a baixa taxa de endocardites bacterianas 
causadas por:
a) Estreptococos do grupo viridans.
b) Streptococcus bovis.
c) Enterococos.
d) Staphylococcus aureus.
e) Escherichia coli.
015. (INSTITUTO AOCP/EBSERH/HU-UFJ) A Escherichia sp tem grande importância clínica 
em septicemias e choques, infecções do trato urinário, infecções de pneumonias (pacientes 
hospitalizados), meningites (neonatos) e gastroenterites. A Escheria coli enterotoxigenica 
pode causar:
a) Síndrome diarreica com reação inflamatória local, alterando a absorção da mucosa.
b) Diarreia crônica em crianças, sendo assintomática e se aderindo à mucosa.
c) Diarreia sanguinolenta com produção de toxinas e invasão da mucosa intestinal.
d) Diarreia do viajante, causando náusea, dor abdominal, febre baixa e diarreia aquosa.
e) Diarreia inflamatória (ulceração) e invasão da mucosa intestinal.
016. (INSTITUTO AOCP/2021/PREFEITURA DE JOÃO PESSOA – PB/TÉCNICO DE LABO-
RATÓRIO) Assinale a alternativa que apresenta respectivamente como se denominam os 
meios de cultura que permitem o crescimento de certos tipos de microrganismos e inibem o 
crescimento de outros e um exemplo desses meios de cultura.
a) Seletivo / Ágar sangue.
b) Seletivo / Ágar SS.
c) De enriquecimento / Ágar sangue.
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d) De enriquecimento / Ágar SS.
e) De antibiograma / Ágar sangue.
017. (FUNDEP/PREF. DE ERVÁLIA-MG/AUXILIAR DE LABORATÓRIO/2018) Para o preparo 
do Ágar Sangue, meio de cultura diferencial não seletivo, é utilizado, além da água e do meio 
de cultura em si, 5% de sangue de carneiro desfibrinado. O Ágar Sangue é um meio de cultura 
extremamente útil para a análise, especificamente, de bactérias
a) do tipo Streptococcus spp.
b) com capacidade beta-hemolítica.
c) do tipo Staphylococcus ssp.
e) com teste de coagulase negativa.
018. (ITAME/PREF. DE SENADOR CANEDO-GO/ASSISTENTE DE SAÚDE-TÉCNICO DE LA-
BORATÓRIO/2019) Os meios de cultura são utilizados para estimular o cultivo de micro-orga-
nismos a serem analisados, e sua função é tornar adequado o crescimento da bactéria. Dos 
diversos meios de cultura, o que normalmente é utilizado para os testes de sensibilidade aos 
antimicrobianos (antibiograma) é:
a) Ágar Sangue.
b) Ágar Mueller Hinton.
c) Ágar Batata dextrose.
d) Ágar Cérebro Coração (BHI).
019. (PREFEITURA DE ITABIRA-MG) Todas as provas abaixo são empregadas no isolamento 
e identificação das espécies de estafilococos, EXCETO
a) coagulase.
b) resistência a novobiocina.
c) susceptibilidade a bacitracina.
d) crescimento em manitol salgado.
020. (IBADE/IAPEN-AC/MICROSCOPISTA/2020) Mycobacterium tuberculosis apresenta um 
crescimento lento, o que dificulta o seu isolamento e diagnóstico. Qual meio pode ser utilizado 
para o isolamento dessa bactéria?
a) Agar manitol hipertônico.
b) Agar MacConkey.
c) Thayer-Martin.
d) Lowenstein-Jensen.
e) Meio de Rugai.
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GABARITO
1. b
2. c
3. b
4. E
5. C
6. a
7. C
8. E
9. c
10. a
11. a
12. e
13. d
14. e
15. d
16. b
17. a
18. b
19. c
20. d
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GABARITO COMENTADO
001. (IDECAN/PREF. MATIAS CARDOSO-MG/FARMACÊUTICO-BIOQUÍMICO) Qual 
dessas espécies bacterianas não está potencialmente associada a infecção no trato 
respiratório?
a) Streptococcus pneumoniae.
b) Helicobacter pylori.
c) Staphylococcus aureus.
d) Estreptococos beta-hemolíticos do grupo A.
e) Haemophilus influenza.
H. pylori é uma bactéria responsável pela gastrite.
Letra b.
002. (CPCON/PREFEITURA DE CATOLÉ DO ROCHA/BIOMÉDICO) As infecções do trato ge-
niturinário podem ser caracterizadas pela invasão dos tecidos do sistema urinário (rins, bexiga, 
uretra e ureteres) por diversos tipos de microrganismos. Qual das bactérias abaixo NÃO se 
enquadra entre as principais causadoras de infecções do trato geniturinário?
a) Acinetobacter sp.
b) Pseudomonas sp.
c) Salmonella.
d) Klebsiella.
e) Escherichia coli.
Salmonella é uma enterobactéria causadora de gastroenterites, não do trato urinário.
Letra c.
003. (AOCP/PREF. FUNDÃO-ES/FARMACÊUTICO BIOQUÍMICO) As bactérias Gram-positi-
vas, especialmente os cocos, estão entre os microrganismos mais frequentemente isolados 
de amostras biológicas humanas em laboratórios de microbiologia. A prova da catalase e co-
agulase positiva é típica na identificação de
a) Streptococcus pyogenes.
b) Staphylococcus aureus.
c) Staphylococcus sp.
d) Streptococcus sp.
e) Staphylococcus epidermidis.
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S. aureus é positiva para todas as provas de identificação às quais ela é submetida (Gram po-
sitiva, coagulase positiva, catalase positiva e manitol positiva).
Letra b.
004. (CESPE/FUB) A respeito de microrganismos, julgue o item a seguir.
Leveduras e fungos filamentosos são seres multinucleados.
Leveduras são predominantemente unicelulares.
Errado.
005. (CESPE/UNIPAMPA/FARMACÊUTICO BIOQUÍMICO) Com relação aos exames de diag-
nóstico em microbiologia, julgue o item que se segue.
Por meio do exame bacterioscópico gram, é possível estudar as características morfotinturiais 
de bactérias, fungos e leucócitos. Esse exame fornece, de maneira rápida, informações impor-
tantes para o início do tratamento do paciente.
O método de Gram diferencia bactérias Gram+ das –, e os fungos de artefatos, como vi-
mos em aula.
Certo.
006. (IDECAN/PREF. GONÇALVES DIAS-MA/FARMACÊUTICO-BIOQUÍMICO) Uma bactéria é 
considerada sensível a um antimicrobiano quando seu crescimento é inibido in vitro por uma 
concentração 3 ou mais vezes inferior àquela que o antimicrobiano atinge no sangue. Se a con-
centração inibitória in vitro é igual ou superior àquela que o antimicrobiano atinge no sangue, a 
bactéria é considerada resistente. Acerca disso assinale a alternativa correta:
a) Quando se coloca um disco de papel impregnado com um antimicrobiano na superfície de 
um meio de cultura sólido, já semeado com uma bactéria, o crescimento bacteriano poderá ser 
inibido formando-se um halo de inibição em torno do disco, cujo diâmetro varia de acordo com 
a velocidade de difusão do antimicrobiano e a sensibilidade da bactéria.
b) Se a bactéria for muito resistente ao antimicrobiano haverá halo de inibição proporcional a 
resistência.
c) O diâmetro do halo de inibição é diretamente proporcional à concentração inibitória mínima 
do antimicrobiano.
d) A resistência natural dá-se por alterações genéticas ou alterações dos mecanismos quími-
cos das bactérias, no qual apenas uma parte da população microbiana apresenta.
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a) Certa.
b) Errada. Erra ao afirmar que o halo de inibição é proporcional à resistência.
c) Errada. Erra ao afirmar que é proporcional à concentração inibitória mínima. Ora, o halo é 
proporcional à sensibilidade do microrganismo frente ao antibiótico.
d) Certa. Resistência adquirida que é caracterizada por apenas uma parte da população obter.
Letra a.
007. (CESPE/MS/FARMACÊUTICO) Os antibióticos reduziram drasticamente as doenças e as 
mortes causadas por infecções bacterianas. Durante décadas, eles foram utilizados de forma 
indiscriminada, o que levou ao aumento da resistência dos microrganismos a esses antibióti-
cos e gerou um grave problema de saúde pública. Nos últimos anos, vários grupos de pesquisa 
têm dedicado especial esforço na identificação de novas moléculas com capacidade antimi-
crobiana ou na mudança das suas formulações farmacêuticas para melhorar a biodisponibili-
dade do princípio ativo no paciente. Considerando a importância dos antibióticos para a vida 
humana, julgue o item:
A partir da avaliação da sensibilidade de microrganismo aos antibióticos in vitro, é possível 
determinar o sucesso terapêutico do uso de drogas no tratamento de infecções causadas pelo 
microrganismo a ser testado.
A assertiva descreveu a finalidade do antibiograma.
Certo.
008. (CESPE/MS/FARMACÊUTICO) Julgue o item a seguir.
O método de difusão com discos para a determinação da sensibilidade dos microrganismos 
fornece um resultado quantitativo, uma vez que, a partir do halo formado, é possível determinar 
a concentração inibitória mínima.
O resultado é qualitativo, como vimos na aula (sensível, resistência intermediária e resistente), 
e não quantitativo.
Errado.
009. (IDECAN/PREF. SANTO ANTÔNIO DO ITAMBÉ-MG/FARMACÊUTICO-BIOQUÍMICO) A 
identificação definitiva dos membros das Enterobacteriaceae pode exigir uma bateria de testes 
bioquímicos. É possível evitar uma considerável perda de tempo e possível identificação incor-
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reta se forem feitas algumas observações preliminares para assegurar que o microrganismo 
que está sendo investigado pertença a esse grupo. Com poucas exceções, as bactérias da fa-
mília Enterobacteriaceae possuem características próprias para identificação. De acordo com 
as identificações preliminares, assinale a alternativa INCORRETA.
a) As bactérias fermentam a glicose.
b) Ocorre redução de nitrato a nitrito.
c) Fermentam manitol em Ágar Chapman.
d) O teste é negativo para citocromo-oxidase.
As bactérias fermentadoras de manitol são Gram positivas.
Letra c.
010. (CESPE/SESA-ES/FARMACÊUTICO BIOQUÍMICO) As micoses superficiais são causa-
das por fungos que infectama pele e regiões adjacentes. Os locais mais afetados são as 
unhas, a pele e os cabelos. Com relação às micoses superficiais e aos métodos utilizados para 
sua detecção, assinale a opção correta.
a) As micoses superficiais são identificadas como ceratofitoses, dermatofitoses e candidíase.
b) Um exame microscópico direto é o método de identificação de micose superficial mais fácil 
de ser realizado; nesse tipo de exame, o fungo deve ser corado com corante de Gram.
c) No meio de cultura de tecidos a serem analisados, é desnecessário o acréscimo de antibió-
tico, pois se utiliza meio seletivo para fungos.
d) Devido à complexidade dos componentes da parede celular, os fungos cutâneos induzem a 
uma forte reação de hipersensibilidade.
e) Quando presente no organismo humano, a Malassezia furfur encontra-se na pele ou no cabe-
lo. A identificação desse fungo ocorre com coloração com tinta da China, sendo desnecessária 
a clarificação com KOH.
O Exame direto é feito com corantes (KOH ou Tinta da china), método Gram não é direto.
No meio de cultura de fungos existe antibiótico (cloranfenicol) que inibe crescimento bacteriano.
Letra a.
011. (MUNICÍPIO DE SÃO GONÇALO DO RIO ABAIXO-MG/BIOQUÍMICO) Estreptococos são 
bactérias responsáveis por infecções de pele. Acerca disso, assinale a alternativa INCORRETA:
a) Os estreptococos são cocos gram-negativos que, frequentemente, crescem em cadeias.
b) Os estreptococos são classificados de acordo com suas enzimas hemolíticas e antígenos 
da parede celular.
c) A erisipela e o impetigo são infecções de pele causadas por estreptococos.
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d) Os estreptococos beta-hemolíticos do grupo A invasivos causam destruição tecidual seve-
ra e rápida.
Estreptococos são Gram positivos, logo, já achamos a errada na primeira opção.
Letra a.
012. (MUNICÍPIO DE SÃO GONÇALO DO RIO ABAIXO-MG/BIOQUÍMICO) Para uma análise 
microbiológica eficiente, o tempo entre a coleta e a entrega no laboratório deve ser o menor 
possível: algumas amostras devem ser entregues imediatamente, enquanto outras podem de-
morar um pouco mais. Qual desses tipos de amostras possui o maior tempo crítico de entrega, 
sem perda de qualidade?
a) Líquor.
b) Líquido pleural.
c) Swab.
d) Suspeita de anaeróbios.
e) Urina.
O tempo maior entre a coleta e a entrega é o da urina, pela menor complexidade da coleta 
(no caso de ter que coletar novamente), por ter naturalmente população bacteriana baixa e 
outros fatores.
Letra e.
013. (MUNICÍPIO DE SÃO GONÇALO DO RIO ABAIXO-MG/BIOQUÍMICO) As amostras cita-
das a seguir NÃO são recomendadas para o exame microbiológico por fornecerem resultados 
questionáveis, EXCETO:
a) Swab de amostra de queimadura.
b) Vômito.
c) Material de colostomia
d) Biópsia de lesão periodontal.
e) Ponta de cateter de Foley.
Biópsia de lesão periodontal é a única alternativa que traz uma amostra representativa, ade-
quada à análise sem interferentes e que permite obtenção de resultados adequados.
Letra d.
014. (HPSP/FARMACÊUTICO/HSPSP) A reduzida capacidade de aderência de algumas bac-
térias às válvulas cardíacas nativas explica, em parte, a baixa taxa de endocardites bacterianas 
causadas por:
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a) Estreptococos do grupo viridans.
b) Streptococcus bovis.
c) Enterococos.
d) Staphylococcus aureus.
e) Escherichia coli.
e) coli é uma enterobactéria do TGI, não provocando endocardite, mas sim gastroenterites.
Letra e.
015. (INSTITUTO AOCP/EBSERH/HU-UFJ) A Escherichia sp tem grande importância clínica em 
septicemias e choques, infecções do trato urinário, infecções de pneumonias (pacientes hospita-
lizados), meningites (neonatos) e gastroenterites. A Escheria coli enterotoxigenica pode causar:
a) Síndrome diarreica com reação inflamatória local, alterando a absorção da mucosa.
b) Diarreia crônica em crianças, sendo assintomática e se aderindo à mucosa.
c) Diarreia sanguinolenta com produção de toxinas e invasão da mucosa intestinal.
d) Diarreia do viajante, causando náusea, dor abdominal, febre baixa e diarreia aquosa.
e) Diarreia inflamatória (ulceração) e invasão da mucosa intestinal.
A letra d é a única alternativa que descreve corretamente os sintomas das gastroenterites pro-
vocadas pela E. coli enterotoxigenica.
Letra d.
016. (INSTITUTO AOCP/2021/PREFEITURA DE JOÃO PESSOA – PB/TÉCNICO DE LABO-
RATÓRIO) Assinale a alternativa que apresenta respectivamente como se denominam os 
meios de cultura que permitem o crescimento de certos tipos de microrganismos e inibem o 
crescimento de outros e um exemplo desses meios de cultura.
a) Seletivo / Ágar sangue.
b) Seletivo / Ágar SS.
c) De enriquecimento / Ágar sangue.
d) De enriquecimento / Ágar SS.
e) De antibiograma / Ágar sangue.
Os meios seletivos são elaborados para impedir o crescimento de bactérias indesejadas e 
favorecer o crescimento dos micro-organismos de interesse. Agar SS (Salmonella Shigella 
Agar) é um meio diferencial seletivo utilizado no isolamento de bacilos entéricos patogênicos, 
especialmente os que pertencem ao gênero Salmonella, provenientes de amostras clínicas.
Letra b.
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017. (FUNDEP/PREF. DE ERVÁLIA-MG/AUXILIAR DE LABORATÓRIO/2018) Para o preparo 
do Ágar Sangue, meio de cultura diferencial não seletivo, é utilizado, além da água e do meio 
de cultura em si, 5% de sangue de carneiro desfibrinado. O Ágar Sangue é um meio de cultura 
extremamente útil para a análise, especificamente, de bactérias
a) do tipo Streptococcus spp.
b) com capacidade beta-hemolítica.
c) do tipo Staphylococcus ssp.
e) com teste de coagulase negativa.
O ágar sangue (que contém hemácias) é um meio utilizado com frequência para identificar es-
pécies bacterianas que destroem hemácias. Essas espécies, como o Streptococcus pyogenes, 
a bactéria que causa infecção de garganta, mostram um anel claro ao redor de suas colônias 
(β-hemólise), onde elas têm lisadas as hemácias circundantes.
Letra a.
018. (ITAME/PREF. DE SENADOR CANEDO-GO/ASSISTENTE DE SAÚDE-TÉCNICO DE LA-
BORATÓRIO/2019) Os meios de cultura são utilizados para estimular o cultivo de micro-orga-
nismos a serem analisados, e sua função é tornar adequado o crescimento da bactéria. Dos 
diversos meios de cultura, o que normalmente é utilizado para os testes de sensibilidade aos 
antimicrobianos (antibiograma) é:
a) Ágar Sangue.
b) Ágar Mueller Hinton.
c) Ágar Batata dextrose.
d) Ágar Cérebro Coração (BHI).
O Agar Mueller Hinton (MH) é um meio de cultura utilizado para realizar testes de sensibilidade 
aos antimicrobianos (TSA). Esse teste também é conhecidocomo antibiograma, difusão em 
disco ou ainda teste de suscetibilidade Kirby-Bauer.
Letra b.
019. (PREFEITURA DE ITABIRA-MG) Todas as provas abaixo são empregadas no isolamento 
e identificação das espécies de estafilococos, EXCETO
a) coagulase.
b) resistência a novobiocina.
c) susceptibilidade a bacitracina.
d) crescimento em manitol salgado.
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Isolamento e Identificação, Determinação de Sensibilidade
MICROBIOLOGIA
Pollyana Lyra
O teste da bacitracina é utilizado para identificação do Streptococcus pyogenes (grupo A).
Letra c.
020. (IBADE/IAPEN-AC/MICROSCOPISTA/2020) Mycobacterium tuberculosis apresenta um 
crescimento lento, o que dificulta o seu isolamento e diagnóstico. Qual meio pode ser utilizado 
para o isolamento dessa bactéria?
a) Agar manitol hipertônico.
b) Agar MacConkey.
c) Thayer-Martin.
d) Lowenstein-Jensen.
e) Meio de Rugai.
O meio Löwenstein Jensen é um meio de cultura utilizado no isolamento inicial de micobac-
térias. Constituído por ovos integrais e uma série de outros componentes, sua positividade é 
indicada por um crescimento de bom a excelente. Sua cor normal é verde claro e o crescimento 
de colônias amareladas é indicativo de positividade. Não existindo crescimento de colônias, o 
resultado da cultura é negativo. Este meio contém glicerol, fécula de batata, sais e ovos (para 
coagular e solidificar o meio). O verde malaquita é adicionado para inibir o crescimento de ba-
térias gram positivas.
Letra d.
FORÇA! Espero vocês nas próximas aulas!
Professora Pollyana Lyra
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Pollyana Lyra
REFERÊNCIAS
ALTERTHUM, Flávio. e TRABULSI, Luiz B. Microbiologia. 5 ed. Atheneu, 2009.
MURRAY, PR. et al. Microbiologia Médica. 5. ed. Rio de Janeiro: Elsevier, 2006. 
992 p.
http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/microbiologia/mod_5_2004.pdf.
http://www.biomedicinabrasil.com/2011/04/meio-ial-rugai.html.
Pollyana Lyra
Farmacêutica, Especialista em Farmacologia, Professora Universitária e Analista da Fundação Hemocentro 
de Brasília.
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http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/microbiologia/mod_5_2004.pdf
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	Meios de Cultura, Provas de Controle de Qualidade, Isolamento e Identificação, Determinação de Sensibilidade
	1. Meios de Cultura, Condições Gerais de Preparo e Armazenamento
	1.1. Classificação dos Meios de Cultura
	1.2. Preparo de Meios de Cultura
	1.3. Armazenagem
	1.4. Meios de Cultura
	2. Provas de Controle de Qualidade
	3. Isolamento e Identificação de Bactérias e Fungos de Interesse Médico
	3.1. Diferenciação de Bactérias Gram Positivas
	3.2. Diferenciação de Bactérias Gram Negativas
	3.3. Diferenciação de Fungos
	4. Determinação de Sensibilidade das Bactérias aos Antimicrobianos
	Questões de Concurso
	Gabarito
	Gabarito Comentado
	Referências
	AVALIAR 5: 
	Página 32: