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O trato genital feminino possui uma microbiota rica e variada. Dentre as bactérias colonizadoras se destacam as produtoras de ácido lático, os Lactobacillus, que propiciam um meio ácido, o qual é uma barreira de defesa para bactérias infecciosas. Outros microrganismos também podem ser encontrados normalmente e em menor quantidade fazendo parte desta microbiota, como: Candida, Enterococcus, Corynebacterium, Streptococcus e Staphylococcus. Os Streptococcus do grupo B (Streptococcus agalactiae) são encontrados na microbiota vaginal de aproximadamente 20% das mulheres. Entretanto a presença desta bactéria na microbiota vaginal em mulheres gestantes é um fator determinante para a infecção do recém-nascido. Durante o pré-natal, gestantes na 35ª a 37ª semana são submetidas a uma pesquisa de colonização por S. agalactiae no canal vaginal. Neste exame um swab com secreção é coletado e inoculado em meios de cultura adequados para crescimento de S. agalactiae, como o ágar sangue. Porém, devido à diversidade de bactérias que podem ser encontradas no canal vaginal e que se desenvolvem em meio ao ágar sangue, é necessário identificar as colônias suspeitas. Desse modo, diga como pode ser realizada a identificação de S. agalactiae em amostras de secreção vaginal. Padrão de resposta esperado O primeiro passo para a identificação é a observação da morfologia da colônia em ágar sangue. Colônias de S. agalactiae possuem tamanho médio, formato circular e convexo, são translúcidas e com uma pequena hemólise beta (total) ao redor da colônia no meio de cultura. Posteriormente, devemos confirmar que essa colônia suspeita é de um Streptococcus, mas para tal será necessário visualizar as células pela coloração de Gram, observando cocos gram- positivos e realizando o teste da catalase, que deverá ser negativo. Por fim, para identificação da espécie S. agalactiae, deve-se realizar o teste de CAMP, que será positivo. A realização desses testes na sequência indicada é essencial para a correta identificação fenotípica, pois outras bactérias, que podem ser isoladas no canal vaginal, podem se apresentar com resultados parecidos, como exemplo da Listeria monocytogenes, positiva ao teste de CAMP. 1. O teste da catalase é um método simples e rápido de avaliação fenotípica de alguns grupos microbianos. Selecione abaixo a afirmação que indica os gêneros diferenciados pelo resultado deste teste. B. Staphylococcus e Streptococcus. O teste da catalase é a técnica fenotípica sugerida para diferenciação destes gêneros, que compreendem cocos gram- -positivos, sendo Staphylococcus positivos para a enzima e Streptococcus negativos para a enzima. 2. Algumas bactérias ao crescerem em meios suplementados com sangue podem produzir toxinas e substâncias que lisam as hemácias ou interagem com a hemoglobina presente no meio de cultura. Selecione abaixo a opção que relaciona de maneira adequada o tipo de hemólise com seu aspecto. C. Beta-hemólise, lise total das hemácias, o meio de cultura fica transparente. Beta-hemólise é denominada quando há produção de exotoxinas bacterianas que lisam totalmente as hemácias dando um aspecto amarelado e transparente ao meio de cultura. 3. Durante a identificação das bactérias gram-negativas aeróbias, é essencial definir a reação ao teste da oxidase. Selecione abaixo qual a resposta mais adequada a respeito desse teste. A. Verifica a presença de um transportador de elétrons. 4. A presença de flagelos e observação da motilidade bacteriana é utilizada na identificação de diversas bactérias. Qual das informações abaixo NÃO é adequada de ser considerada para esta avaliação? E. Crescimento difuso na superfície de um ágar. 5. Os meios OF (oxidação fermentação) são essenciais para a identificação de bacilos gram- negativos não fermentadores de glicose. A respeito destes testes, selecione a mais adequada. C. Podemos observar bactérias que são negativas em meios OF glicose. 1. O meio de cultura ágar sal manitol possui na sua composição elevada concentração de sal e vermelho de fenol que permite identificação das bactérias fermentadoras de manitol. Como esse meio de cultura pode ser classificado? D. Seletivo e diferencial. 2. Para o adequado cultivo de bactérias, é necessário que as condições ambientais sejam ajustadas para os microrganismos esperados. Ao realizar uma cultura de rotina com incubação de meios de cultura em aerobiose, qual das bactérias abaixo obrigatoriamente NÃO irá se desenvolver nos meios? D. Anaeróbias estritas. 3. Os meios de cultura podem ser classificados de acordo com a consistência e apresentação em tubos ou placas de petri. Selecione a afirmação de apresentação e consistência mais adequada para avaliação da morfologia de uma colônia bacteriana. B. Sólido em placas. 4. Qual das opções abaixo NÃO é indicada para as técnicas de inoculação de meios por esgotamento? A. Uso de alças bacteriológicas calibradas. 5. A técnica asséptica é um conjunto de procedimentos que contribuem para reduzir a contaminação dos espaços com microrganismos, assim como impedir a contaminação das culturas com microrganismos indesejados. Abaixo são listados alguns procedimentos. Selecione aquele que você considera NÃO ser adequado numa técnica microbiológica asséptica. C. Colocação das tampas de tubos sobre a bancada de trabalho. Infecções gastrointestinais acometem um grande número de indivíduos, especialmente crianças e idosos, sendo uma importante causa de morbidade e mortalidade. Há uma ampla diversidade de agentes causadores de infecções gastrointestinais (bactérias, vírus e parasitas) e em algumas condições esses agentes devem ser investigados. Entre as bactérias, destacam- se a família das enterobactérias (Salmonella, Shigella e Escherichia coli) que são microrganismos anaeróbios facultativos que colonizam o trato gastrointestinal humano, podendo causar infecções, assim como a Campylobacter, que são microrganismos microaerófilos, geralmente encontrados em aves que possuem uma temperatura corporal próxima a 42°C. Um dos exames utilizados para definição da etiologia das infecções gastrointestinais é a cultura de fezes. Nas culturas rotineiras é indicada apenas a pesquisa dos principais patógenos bacterianos, mas deve-se levar em consideração que as fezes são intensamente colonizadas pela microbiota gastrointestinal, havendo até 1012 UFC/g de bactérias contaminantes. Isso torna essencial uma escolha cuidadosa dos meios de cultura, técnicas de inoculação e condições de incubação para isolamento dos patógenos de rotina. Desse modo, há diversas escolhas que devem ser realizadas para um adequado cultivo de amostras de fezes. Explique as seguintes necessidades para esse cultivo: a) Tipos de meios de cultura indicados. b) Técnica de inoculação dos meios. c) Condições de incubação dos meios. Padrão de resposta esperado Para o adequado cultivo de amostras de fezes, veja as escolhas que devem ser realizadas: a) Devem ser selecionados meios seletivos para enterobactérias e diferenciais para os principais gêneros patogênicos, assim reduzindo o número de contaminantes no cultivo e permitindo uma avaliação inicial dos principais patógenos no cultivo. Exemplo: ágar MacConkey, seletivo para bactérias gram-negativas sem exigência nutricional e diferencial para fermentação de lactose; ágar Salmonella-Shigella, mais seletivo que o MacConkey e diferencial para as bactérias pela produção de sulfetos; caldo Selenito, meio enriquecido para isolamento de Salmonella. Para isolamento de Campylobacter, deve ser utilizado um meio seletivo, como ágar Campy, que é acrescido de vários antimicrobianos para inibir outras bactérias. b) Para a cultura de fezes é indicada a realização de inoculação dos meios em placas por técnica de esgotamento, a fim de poder visualizar as colônias isoladas e suas características em cada meio de cultura.c) Os meios de cultura para enterobactérias devem ser incubados invertidos em estufas bacteriológicas com temperatura de 35°C, em aerobiose. Já o meio para Campylobacter deve ser mantido invertido em estufa bacteriológica a 42°C, em jarras de microaerofilia (atmosfera rica em CO2). 1. A técnica de coloração de Gram compreende o uso de um corante principal, mordente, descorante e corante secundário. Caso seja esquecida a aplicação do descorante como irão se apresentar as bactérias gram-positivas e gram-negativas, respectivamente? A. Ambas coradas de violeta. 2. Ao preparar um esfregaço para ser corado por técnica de Gram, devemos ter alguns cuidados. Selecione abaixo a alternativa que indica um cuidado importante. B. Fixar a lâmina com calor. 3. Qual das afirmações abaixo é VERDADEIRA a respeito da coloração de Gram? C. Diferencia as bactérias pela estrutura da parede celular. 4 Ao visualizar a imagem corada pela técnica de Gram, podemos afirmar que: E. Há a presença de bacilos gram-negativos Bacilos gram-negativos são células bacterianas em formato retangular, coradas de rosa. 5- Ao visualizar a imagem corada pela técnica de Gram, podemos afirmar que: B. Há presença de estafilococos gram-positivos. As piodermites são condições infecciosas da pele, geralmente com formação de coleções de pus causadas por bactérias, principalmente os cocos gram-positivos. Nesse contexto, um homem de 52 anos, diabético, foi encaminhado ao laboratório para realização de exame microbiológico de lesão eritematosa infiltrada e com uma pústula na coxa direita. O homem relatou que havia suspeitado de ter sido picado por algum inseto, mas com a piora e dor no local procurou um médico. Foram coletadas amostras da pústula e realizado exame bacteriológico e bacterioscópico. Nas imagens abaixo estão representadas a cultura em ágar sangue e o bacterioscópico da pústula. Desse modo, responda aos seguintes questionamentos: a) Qual a sua suspeita de bactéria isolada? b) Como você pode confirmar a espécie bacteriana suspeita? c) Quais complicações podem ocorrer por esta bactéria? Padrão de resposta esperado a) As infecções de pele que acometem os folículos pilosos (foliculites) e seu agravamento (furúnculos) são causadas principalmente pela espécie de cocos gram- positivos Staphylococcus aureus. As colônias em ágar sangue apresentam-se com tamanho grande, opacas, com zona de hemólise. Na coloração de gram é possível observar os cocos gram-positivos em aglomerados. b) Sabendo-se tratar de um coco gram-positivo, a confirmação do gênero Stahylocococcus se dá pela positividade no teste da catalase (produção de gás em contato com peróxido de hidrogênio). Dentro do gênero há dezenas de espécies e a identificação de S. aureus pode ser obtida por meio de um ou mais dos seguintes testes: positividade para coagulase, positividade para DNAse, fermentação do manitol ou aglutinação com testes imunológico para S. aureus. c) O S. aureus é um colonizante da nasofaringe de aproximadamente 30% dos indivíduos, sendo mais conhecido como um importante patógeno humano e por possuir diversos fatores de virulência. No estabelecimento de um processo infeccioso, não tratado adequadamente, pode evoluir com diversas complicações. A partir de um furúnculo pode ocorrer evolução para carbúnculo, piomiosite, fascite e osteomielites, ainda pode haver disseminação para a corrente circulatória com o desenvolvimento de bacteremias, endocardites e pneumonias. Algumas cepas podem produzir toxinas que são relacionadas ao desenvolvimento de choque tóxico. 1. Normas técnicas definem o limite de contaminação de alimentos com Staphylococcus aureus devido ao risco de intoxicação alimentar. Qual dos fatores de virulência citados abaixo está diretamente relacionado a esse quadro? C. Enterotoxinas. 2. Selecione a conduta abaixo mais adequada ao isolar um Staphylococcus coagulase negativa de uma amostra de urina de uma paciente jovem com sintomas de infecção urinária. B. Devemos realizar teste de suscetibilidade à novobiocina. 3. Os testes para identificação de S. aures podem ser realizados por diversas metodologias. Selecione abaixo a afirmação CORRETA sobre o que é detectado no teste da coagulase executado em lâmina ou em tubo, respectivamente. A. Fator de agregação e enzima livre. 4. Em um exame microbiológico com crescimento de S. aureus, em qual das alternativas abaixo é mais provável de o isolamento estar relacionado com processo infeccioso? D. Sangue periférico. ] 5. A resistência a antimicrobianos tem sido uma grande preocupação quando tratamos de Staphylococcus. Selecione abaixo a alternativa que melhor se enquadra ao termo MRSA. D. Isolados de S. aureus que possuem a proteína PBP2a. As infecções do sistema urinário são um dos processos infecciosos frequentes na população, variando sua incidência de acordo com fatores, como gênero, hospitalização e idade. As causas desses processos infecciosos são principalmente bacterianas, sendo que os principais grupos de patógenos são os cocos gram-positivos e os bacilos gram-negativos. Desse modo, responda aos seguintes questionamentos: a) Qual a sua suspeita de bactéria isolada na urina? b) Como você pode confirmar a espécie bacteriana suspeita? c) Qual a relação dessa bactéria com infecções urinárias? Padrão de resposta esperado a) Aproximadamente 80% das infecções urinárias são causadas por enterobactérias. Essas bactérias são bacilos gram-negativos que se desenvolvem em meio ágar MacConkey. A evidência de colônias grandes, opacas, secas e de cor rosa intensa em meio ágar MacConkey indicam suspeitas de Escherichia coli, principal uropatógeno. b) A confirmação deve ser realizada por teste de fermentação da glicose em meios como o TSI (triple sugar iron). Se for positiva, indica tratar-se de uma entrobactéria. Para confirmação da espécie E. coli é necessária a avaliação do perfil metabólico. Podem-se utilizar os meios de cultura: ágar citrato de Simmons, ágar fenilalanina, SIM (sulfeto-indol-motilidade), ágar lisina, ágar ureia de Christensen, ou o meio Rugai, entre outros. c) A espécie E. coli é a principal bactéria causadora de infecções urinárias, sendo isolada em 70% dos casos. O principal hábitat dessa espécie é o sistema gastrointestinal, fazendo parte da microbiota humana. Pela proximidade do trato gastrointestinal e genital feminino, essas bactérias podem ser facilmente translocadas para a uretra e algumas cepas possuem a capacidade de expressar estruturas de adesão aos tecidos e produção de citotoxinas, as quais permitem a invasão da bexiga e o desenvolvimento de processos infecciosos. 1. Em condições específicas, as espécies de enterobactérias podem ser relacionadas a uma grande diversidade de processos infecciosos. Abaixo estão listadas algumas condições infecciosas. Selecione a opção em que há menor probabilidade de a causa ser uma enterobactéria. D. Faringites. ] 2. Selecione abaixo a alternativa CORRETA com características das enterobactérias. A. Oxidase negativa. 3. Qual das espécies de enterobactérias abaixo é considerada um patógeno intestinal obrigatório? C. Shigella sonnei. 4. O meio ágar MacConkey é um dos meios de escolha para isolamento de enterobactérias, devido à seleção de gram-negativos sem exigências nutricionais. Esse meio permite a diferenciação de bactérias pela fermentação da lactose (colônias rosa). Selecione abaixo a alternativa que apresenta apenas enterobactérias que apresentam colônias rosa em ágar MacConkey. B. Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter sp. 5. Algumas cepas de Escherichia coli podem ser causa de diarreias. Selecione abaixo a resposta mais adequada. C. A toxina da cepa entero-hemorrágica pode levar ao quadro de falência renal. A sepse é uma das manifestações maisgraves de uma infecção generalizada, caracterizada por sintomas sistêmicos e elevada mortalidade. A sepse puerperal é aquela ocorrida após o parto, sendo causa importante de morte materna. As bactérias frequentemente associadas são aquelas que normalmente colonizam a microbiota materna. Nesse contexto, uma paciente de 20 anos foi transferida dois dias após o parto sem intercorrências para um hospital de alta complexidade por suspeita de sepse. A paciente foi internada em unidade de terapia intensiva com quadro de sepse severa e síndrome do choque tóxico. No momento da internação foram coletados dois frascos de hemocultura que evidenciaram crescimento do mesmo microrganismo. A paciente foi tratada com penicilina e clindamicina, sobreviveu e teve alta após 20 dias de internação. Abaixo estão as imagens das colônias em ágar sangue da bactéria obtida das hemoculturas, assim como uma coloração de Gram da colônia. Desse modo, você foi desafiado a responder aos seguintes questionamentos: a) Qual a sua suspeita de bactéria isolada? b) Como você pode confirmar a espécie bacteriana suspeita? c) O que explica as complicações apresentadas? Padrão de resposta esperado a) A imagem apresenta cocos gram-positivos em cadeia, sugestivo de estreptococos, e na placa de ágar sangue é possível evidenciar uma zona de hemólise total do tipo beta. Duas espécies de estreptococos beta-hemolíticos são associados às complicações puerperais: S. agalactiae, associado a infecções em recém-nascidos e mulheres pós-parto, e S. pyogenes, associado a endometrite e bacteremias pós-parto. b) A diferenciação das espécies S. pyogenes e S. agalactiae pode ser realizada pela avaliação de diversos testes. Sendo os achados do S. pyogenes sensibilidade à bacitracina, teste de PYR positivo, aglutinação com grupo A de Lancefield, resistência ao sulfametoxazol- - trimetropima, e teste de CAMP negativo. E os achados do S. agalactiae, teste de CAMP positivo, teste de PYR negativo, aglutinação com grupo B de Lancefield e resistência ao sulfametoxazol-trimetropima. c) Provavelmente ocorreu uma infecção por S. pyogenes, pois este pode causar a síndrome semelhante ao choque tóxico pela liberação de exotoxinas pirogênicas que agem como superantígenos e induzem liberação maciça de citocinas e mediadores inflamatórios. O tratamento instituído é adequado, uma vez que até o momento consideramos os S. pyogenes e S. agalactiae sensíveis às penicilinas e com baixa resistência à clindamicina. Cabe ressaltar que, embora menos frequente, há relatos de quadros da síndrome semelhante ao choque tóxico causadas por isolados de S. agalactiae. 1. A sorologia de Lancefield permite a identificação de importantes estreptococos por meio da avaliação do tipo de antígeno de parede celular expresso pela bactéria. Selecione abaixo a alternativa que indica o antígeno presente em Streptococcus agalactiae. B. Grupo B 2. Os estreptococos do grupo A possuem diversos fatores que contribuem para sua virulência e abaixo estão relacionados alguns. Selecione qual é considerado o principal e possibilita a tipagem de isolados. C. Proteína M. 3. Os estreptococos do grupo B (S. agalactiae) são importantes causas de infecções em recém- nascidos, sendo indicada a pesquisa de gestantes portadoras. Selecione abaixo a alternativa que indica os materiais que devem ser pesquisados para colonização. D. Swab vaginal e anal. 4. Foi isolado um estreptococo do exudato de um paciente com faringite, porém ele não aglutinou-se com o grupo A de Lancefield e apresentou sensibilidade ao sulfametoxazol- trimetropima. Selecione abaixo qual o grupo bacteriano que você considera mais provável de ser relacionado ao caso. C. Streptococcus dysgalactiae sub. equisimilis, que apresenta antígenos do grupo C e G. 5. O teste de CAMP é utilizado para identificação presuntiva de estreptococos do grupo B. Selecione abaixo a alternativa que está CORRETA a respeito do teste. E. Detecta a presença de uma proteína que interage com a beta- -hemolisina do Staphylococcus aureus. As pneumonias são condições infecciosas que acometem os pulmões. As causas são diversas (bactérias, vírus, fungos e parasitas) e a definição da etiologia do processo infeccioso é determinante para uma abordagem terapêutica adequada e direcionada. Desse modo, responda aos seguintes questionamentos: a) Visto que o escarro é uma amostra do trato respiratório inferior que é contaminada pela passagem pela via respiratória superior e boca, como você poderia confirmar que esta bactéria isolada é relevante? b) Como você poderia confirmar qual a espécie bacteriana presente? c) Quais complicações, além do derrame pleural, podem ocorrer secundárias a uma pneumonia por esta bactéria? Padrão de resposta esperado a) A avaliação microbiológica de escarro deve ser cuidadosa, uma vez que para a obtenção espontânea do muco da árvore brônquica obrigatoriamente haverá passagem pela via respiratória superior e contaminação com a microbiota residente. Nos exames microbiológicos de escarro é sugerida a avaliação da qualidade da amostra por observação no bacterioscópico. A observação de muco e mais de 25 leucócitos por campo de 100 vezes são indicativos de amostra adequada, enquanto que a observação de mais de 10 células epiteliais é um indicativo de contaminação. Na imagem em aumento de 100 vezes, pode ser observado o muco corado de rosa ao fundo, dois leucócitos indicados pela flecha e diplococos gram-positivos sugestivos de pneumococo. b) A observação de colônias alfa-hemolíticas (com zona esverdeada) no ágar sangue é frequente em amostras de escarro e, para sua identificação, devemos primeiramente realizar o teste da catalase, que, para os estreptococos, deverá ser negativa. Para identificação da espécie S.pneumoniae, devemos avaliar um dos seguintes testes: optoquina sensível, bile- solubilidade positiva ou reação de Quellung positiva. c) As infecções por S. pneumoniae podem evoluir para quadros severos. Estima-se que 25% dos casos apresentam bacteremia e a mortalidade nestes casos é de 30%. A partir de uma bacteremia estabelecida, pode ocorrer endocardite, meningite e artrite séptica. 1. Os estreptococos alfa-hemolíticos são extremamente relacionados, e a identificação das espécies é um desafio mesmo para as técnicas mais avançadas, sendo que, entre os testes fenotípicos, o teste de solubilidade em bile é considerado o mais confiável. Selecione abaixo qual o mecanismo detectado por esse teste. B. Ativação da autolisina LytA. 2. O teste da sensibilidade à optoquina é frequentemente utilizado na diferenciação dos estreptococos grupo viridans e de Streptococcus pneumoniae. Para realização deste teste, a incubação deve ser realizada em atmosfera rica em CO2. Selecione abaixo a alternativa que justifica essa afirmação. A. Incubações em aerobiose podem resultar em falsa sensibilidade. 3. A espécie Streptococcus pneumoniae é considerada a principal causa de mortes por doenças prevenidas por vacinação. Selecione abaixo qual a estrutura utilizada como alvo para as vacinas disponíveis atualmente. ] E. Polissacarídeos capsulares. 4. Os estreptococos do grupo viridans são intensamente relacionados à ocorrência de endocardites. Selecione abaixo a alternativa que possui menor relação com esse quadro infeccioso. E. Infecções virais respiratórias. 5. Selecione abaixo a alternativa que cita corretamente processos infecciosos associados ao Streptococccus pneumoniae. D. Sinusites, otites e meningites. As infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS) são conceituadas como aquelas que se manifestam após 48 horas da admissão em serviços de saúde. As IRAS ocorridas em unidades de terapia intensiva (UTI) são graves, uma vez que os pacientes são portadores de doenças severas, são submetidos a procedimentos invasivos e há seleção debactérias resistentes aos antimicrobianos pelo uso prolongado desses fármacos. Neste contexto, avalie o caso abaixo: Paciente, sexo masculino, 65 anos , diagnóstico de acidente vascular cerebral isquêmico, internado em UTI. Após 6 dias evolui com piora, sendo necessária intubação traqueal e ventilação mecânica. No dia seguinte foi isolado Escherichia coli, >105 UFC/mL, na urina da sonda vesical e imediatamente iniciado tratamento com ciprofloxacino. No 10º dia foi obtido aspirado de secreção traqueal para cultura havendo crescimento de 106 UFC/mL em ágar sangue e ágar MacConkey de uma bactéria identificada como Pseudomonas aeruginosa. Abaixo está o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos observado: Amicacina – Resistente Aztreonam – Resistente Ceftazidima – Resistente Cefepima – Resistente Ciprofloxacino – Resistente Imipenem – Resistente Piperacilina+Tazobactam – Resistente Em virtude do perfil de resistências, o paciente foi tratado empiricamente com polimixina, porém o paciente evoluiu para óbito no 14º dia de internação. Deste modo, responda aos seguintes questionamentos: a) Quais achados e testes podem ter sido realizados para a identificação do isolado como sendo Pseudomonas aeruginosa? b) Quais eventos ocorridos favoreceram a presença da bactéria na secreção traqueal? c) Qual o motivo de quantificar estas bactérias no aspirado de secreção traqueal? Padrão de resposta esperado a) Na coloração de Gram, Pseudomonas aeruginosa se apresenta como bacilos gram negativos retos. A espécie se desenvolve na maioria dos meios de cultura, sendo as colônias em ágar sangue grandes, de cor cinza-esverdeada (aspecto metálico), e em ágar MacConkey, grandes, lactose negativa de cor verde e odor frutificado. Esses achados associados ao teste de oxidase positiva permitem a identificação presuntiva desta espécie, entretanto podem ser realizados testes adicionais para confirmação, como a observação de crescimento a 42°C, presença de motilidade e desnitrificação de nitratos e nitritos. b) As Pseudomonas são o gênero de bacilo gram-negativo não fermentador mais frequentemente isolado em amostras clínicas, sendo que as infecções costumam ocorrer em locais com maior umidade, como as vias respiratórias. Esta bactéria apresenta distribuição ampla nos solos, águas e plantas, sendo com frequência encontrada contaminando dispositivos e soluções no ambiente hospitalar. A contaminação de tubos de respiradores é um importante meio de transmissão. Esta bactéria possui um estreito espectro de agentes para tratamento de infecções e pode transportar plasmídios com múltipla resistência, o que leva ao surgimento de isolados com resistência a todos os antimicrobianos testados. O uso prévio de antimicrobianos promove a seleção de bactérias resistentes, como as Pseudomonas. c) A secreção traqueal é um espécime clínico obtido do trato respiratório de pacientes em ventilação mecânica. Em virtude da presença do tubo endotraqueal, as secreções orais acabam por contaminar a secreção traqueal e as culturas realizadas deste material frequentemente apresentam uma grande diversidade de microrganismos. Em virtude deste fato e de que pacientes ventilados sofrem infecções mesmo por bactérias do ambiente ou da microbiota humana é necessário que sejam utilizadas técnicas quantitativas para avaliação das bactérias isoladas. Pontos de corte ≥106 UFC/mL aumentam a especificidade, mas reduzem a sensibilidade, sendo que estes microrganismos devem ser identificados e ter o teste de sensibilidade aos antimicrobianos realizado. Pontos de corte de ≥105 UFC/mL podem ser utilizados, porém com baixa especificidade. 1. A família das Pseudomonas é ampla, sendo subdividida em grupos de acordo com a homologia RNAr/DNA. Porém uma característica permite a diferenciação de Pseudomonas aeruginosa das demais. Selecione abaixo a resposta que indica essa característica. B. Presença de pigmento que se difunde no ágar. 2. A P. aeruginosa produz várias substâncias que favorecem a colonização e infecção de hospedeiros. Selecione abaixo qual afirmação é CORRETA a respeito desses elementos. C. A piocianina inibe outras bactérias e reduz atividade ciliar respiratória. 3. A maioria das infecções por BGN-NF é relacionada à hospitalização ou a doenças crônicas de base, porém algumas síndromes infecciosas, como a melioidose e o mormo, podem acometer indivíduos na comunidade que forem expostos aos agentes infecciosos. Selecione abaixo qual afirmativa CORRETA que cita os agentes da melioidose e mormo, respectivamente. A. Burkholderia pseudomallei e Burkholderia mallei. 4. A espécie Stenotrophomas maltophilia é uma integrante da família das < i> , porém pode ser facilmente diferenciada das demais em virtude de apresentar qual característica abaixo? D. Teste de DNAse positiva. O teste da DNAse é utilizado para identificação presuntiva de Stenotrophomas maltophilia, uma vez que as demais < i> mais frequentes são negativas neste teste. 5. A espécie Acinetobacter baumannii é associada a infecções hospitalares, porém o isolamento desta em amostras de líquido cefalorraquidiano e de secreção uretral podem ser erroneamente identificado como Neisseria em virtude de frequentemente as células apresentarem morfologia de cocos gram-negativos. Nessa situação, qual característica abaixo apresentada pode identificar corretamente o isolado como sendo Acinetobacter baumannii? E. Teste de oxidase negativa. As doenças sexualmente transmissíveis (DSTs) são condições infecciosas transmitidas de uma pessoa para outra por meio do contato sexual. São condições muito comuns; estima-se que, anualmente, 500 milhões de pessoas são infectadas por alguma DST, e há uma grande diversidade de agentes infecciosos relacionados (vírus, bactérias, parasitas e fungos). Muitas condições podem se apresentar assintomáticas, o que dificulta o diagnóstico e facilita a disseminação das doenças, enquanto outras apresentam um quadro clínico característico. Nesse contexto, avalie o caso a seguir: Responda aos seguintes questionamentos: a) A imagem A apresenta os achados presentes no bacterioscópico por Gram. Indique o que está sendo observado. b) Após a coleta, o swab foi imediatamente inoculado em meio ágar Thayer-Martin e incubado por 48 horas, 35°C em atmosfera de 5% de CO2. Esse procedimento está correto? Justifique. c) Na cultura houve crescimento de colônias pequenas. Indique os testes de identificação e os resultados esperados para o caso. a) Na imagem são visualizados diversos leucócitos polimorfonucleares (seta 1) e diplococos gram-negativos intracelulares (seta 2). As células bacterianas apresentam um formato que lembra “grãos de café” ou “riniformes”. Tais achados são sugestivos de gonococo. b) O procedimento citado está correto, uma vez que o paciente apresenta suspeita de gonorreia. O agente etiológico, Neisseria gonorrhoeae, é uma bactéria extremamente sensível ao dessecamento e a alterações de temperatura, portanto, as amostras devem ser mantidas em swabs com meios de cultura ou imediatamente inoculadas em meios de cultura específicos. A espécie N. gonorrhoeae é uma exigente nutricional apenas crescendo em meios ricos em cisteína. O meio ágar Thayer-Martin é basicamente um ágar chocolate acrescido de antimicrobianos para crescimento seletivo de Neisseria, indicado para cultura de amostras não estéreis com as de secreções genitais. Apesar de serem microrganismos aeróbicos, a incubação em atmosfera rica em CO2 facilita seu crescimento, assim como a atmosfera, que deve ser mantida úmida. c) O meio Thayer-Martin é seletivo para Neisseria; assim sendo, toda colônia é suspeita. Há grande diversidade de morfologia, sendo em geral de tamanho pequeno, brilhantes e elevadas. Algumas ficam fortemente aderidas ao ágar devido à produção de fímbrias. Nos testes da oxidase e catalase, apresentam resultados positivos, sendo negativopara DNAse. 1. Na rotina de microbiologia clínica, alguns isolados de gram-negativas não fermentadoras, como Acinetobacter baumannii, podem ter aspecto semelhante às Neisseria. Selecione o teste indicado para diferenciação. C. c) Teste de oxidase. 2. Algumas espécies do gênero Neisseria e a espécie Moraxella catarrhalis são consideradas os únicos cocos gram-negativos verdadeiros, ou seja, que não se apresentam com aspecto bacilar ao serem expostos a concentrações subinibitórias de penicilina. Selecione qual característica é indicada para sua diferenciação. A. a) Resultado da DNAse. 3. As colônias de Neisseria podem apresentar grande variedade de aspecto, isto é, de pequenas, brilhantes e elevadas até colônias grandes, achatadas e opacas. Essa variedade se deve à intensidade de um fator de virulência bem reconhecido. Selecione a alternativa que indica esse fator. D. d) Fímbrias. 4. A meningite causada pela Neisseria meningitidis é uma infecção de caráter epidêmico pela rápida disseminação na população. Atualmente há vacinas disponíveis a fim de erradicar o estado portador de alguns grupos capsulares. Selecione a alternativa que indica o reservatório dessa bactéria. B. b) Epitélio da nasofaringe humana. 5. A espécie Moraxella catarrhalis é encontrada como parte da microbiota humana, podendo ser causa de infecções respiratórias oportunistas. Selecione que condição infecciosa é menos relacionada a essa bactéria. E. e) Artrites. As doenças transmitidas pelos alimentos (DTAs) são, de acordo com a Organização Mundial da Saúde (OMS), um dos principais problemas de saúde pública. Há muitas DTAs e algumas se destacam pelas graves consequências da infecção. Responda: a) Como pode ter sido realizada a identificação do isolado bacteriano? b) Como o paciente pode ter entrado em contato com o microrganismo e quais as possíveis formas de transmissão dessa bactéria? c) Qual a relação entre a infecção por HIV e a listeriose? Padrão de resposta esperado a) A Listeria monocytogenes cresce em ágar sangue com colônias branco-acinzentadas com hemólise fraca. Na coloração de Gram são evidenciados bacilos curtos gram-positivos. As colônias são catalase-positivas, com motilidade, e resultado positivo no teste de CAMP. Esses achados são suficientes para uma identificação presuntiva da espécie. b) Essa bactéria pode ser colonizadora de uma grande variedade de animais, assim como do solo e dos alimentos. Geralmente, a transmissão se dá pela ingestão de alimentos de origem animal contaminados, o que é uma possível via de transmissão do caso, uma vez que houve a manifestação de sintomas gastrintestinais dias antes de a bacteremia ser diagnosticada. Outra importante via de transmissão é de gestante para feto, que pode ocorrer dentro do útero ou pela passagem no canal vaginal de mulheres contaminadas. c) A L. monocytogenes é um patógeno intracelular com capacidade de invadir as células do hospedeiro. O principal mecanismo de eliminação é via resposta imunológica celular, que está prejudicada em pacientes infectados pelo vírus HIV. A listeriose é uma doença que acomete principalmente crianças recém-nascidas, idosos e pacientes imunodebilitados. 1. Colônias de Listeria monocytogenes e Streptococcus agalactiae são muito semelhantes em ágar sangue, sendo essencial a capacidade de diferenciação dessas duas bactérias. Qual alternativa cita o teste que pode ser utilizado para fazer a diferenciação? B. b) Teste da catalase. 2. O gênero Corynebacterium é composto por uma grande diversidade de bactérias que se apresentam como células em formato de clava e catalase positiva. A diferenciação das espécies é problemática, mas podem ser facilmente diferenciadas da Listeria devido a uma característica. Selecione a alternativa que indica essa característica. A. a) Motilidade negativa. 3. A espécie Corynebacterium diphtheriae é a mais patogênica do grupo, sendo causa da difteria. Selecione a afirmativa CORRETA a respeito dessa bactéria. E. e) É uma bactéria toxigênica. 4. O gênero Bacillus compreende bactérias gram-positivas com esporo. As colônias em ágar sangue apresentam aspecto peculiar. Porém, para diferenciação presuntiva da espécie B. anthracis, qual teste pode ser utilizado? C. c) Motilidade. 5. Selecione a alternativa que CORRETAMENTE cita o agente infeccioso e o fator de virulência correspondente. B. b) Corynebacterium ulcerans – toxina diftérica. Meningites são infecções do sistema nervoso central caracterizadas por inflamação das meninges e da medula espinal. Os grupos de risco para essa condição infecciosa são os extremos de idade (crianças e idosos) e pacientes imunodebilitados, aglomerações de pessoas, infecções (sinusites e otites), traumas ou malformações das meninges, entre outras condições. A classificação pode ser em asséptica (viral) ou piogênica (bactérias e fungos). Se as piogênicas não forem tratadas, tendem a evoluir com danos permanentes ou fatalidade. O exame bacterioscópico foi negativo. Ao ser questionada, a mãe não soube dizer se a criança havia realizado todas as vacinas para a faixa etária e informou morar em uma casa de dois cômodos com seu marido e mais cinco filhos. Foi imediatamente iniciada a administração de antimicrobianos. Após 24 horas, foram evidenciadas na cultura poucas colônias em ágar chocolate, identificadas como Haemophilus sp. A criança apresentou melhora, tendo alta em 15 dias. Com base no quadro relatado acima, responda: a) Como deve ser realizado o exame microbiológico de líquido cerebrospinal? b) Como pode ter sido realizada a identificação do Haemophilus influenzae? c) Qual a provável explicação para a criança ter desenvolvido essa infecção? Padrão de resposta esperado a) As meningites são infecções graves, e o laboratório deve estar pronto para realizar um diagnóstico rápido e preciso. Os resultados de exames citológicos e bioquímicos são importantes na definição inicial da doença. Porém, o exame padrão-ouro para definição da etiologia é o microbiológico. Uma vez que a quantidade de microrganismos no líquido cerebrospinal é baixa, deve-se centrifugar a amostra e realizar uma coloração de Gram do sedimento – o bacterioscópico é positivo em 60-90% dos casos –, e a inoculação em meios enriquecidos (ágar sangue, ágar chocolate e caldo tioglicolato) deve ser realizada com incubação por 24 até 48 horas em atmosfera com 5% de CO2, em temperatura de 35°C. Essas condições são necessárias, pois os principais agentes etiológicos das meningites são exigentes nutricionais e microaerófilos (Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae). b) O gênero Haemophilus compreende bactérias gram-negativas pleomórficas, geralmente cocobacilos, na coloração de Gram. Apenas conseguem se desenvolver em meios suplementados com Hemina (fator X) e NAD+ (fator V), como o ágar chocolate – que possui sangue hemolisado. Em meio ágar sangue não consegue hemolisar as hemácias e obter esses nutrientes, não crescendo nesses meios. Um teste simples de identificação é a prova do satelitismo positiva ou a observação da necessidade de fator X e/ou V para crescimento. c) A espécie Haemophilus influenzae faz parte da microbiota da nasofaringe de 85% da população, sendo transmitida através do contato com indivíduos portadores. O contato com crianças em idade escolar é um fator de risco para aquisição. Algumas cepas podem ser encapsuladas (sorotipos a, b, c, d, e, f). O Hib (H. influenzae tipo b) é uma das principais causas de meningites, principalmente em populações não vacinadas. Desde 1999 está disponível no Brasil a vacinação para crianças contra o Hib, o que contribuiu para uma grande mudança na epidemiologia das meningites. Na era pré-vacinação, até 60% das crianças eram colonizadas pelo Hib. Atualmente,estima-se 2 a 10%. 1. O Haemophilus influenzae recebeu sua nomenclatura em virtude da necessidade de sangue para seu crescimento. Porém, a maioria não consegue se desenvolver em ágar sangue sem a presença de um Staphylococcus aureus inoculado em conjunto. Qual alternativa justifica a afirmação? C. As hemolisinas do S. aureus liberam fatores do interior das hemácias. 2. Um dos principais fatores de virulência do Haemophilus influenzae é a cápsula composta por uma substância denominada polirribosil-ribitol-fosfato (PRP). Há vacina disponível para qual tipo capsular? B. Hib. 3. A tularemia, causada pela Francisella tularensis, pode se desenvolver como várias síndromes infecciosas, por vezes com sintomas inespecíficos. Selecione a alternativa menos provável de ser relacionada à tularemia. B. Otite. 5. Qual achado é o mais indicado para identificação presuntiva de Brucella spp.? A. Teste de urease rápida em isolado de sangue. As pneumonias atípicas são as que ocorrem em pacientes na comunidade e são causadas por microrganismos diferentes da pneumonia bacteriana típica, como Chlamydia, Mycoplasma e Legionella. Essas condições ocorrem em 10 a 40% dos casos de pneumonias comunitárias. Avalie o caso a seguir: Paciente do sexo masculino, 9 anos, apresenta febre e dores de cabeça há quatro dias, sendo tratado para sinusite com amoxacilina. A consulta com o otorrinolaringologista excluiu a possibilidade de sinusite ou meningite. Por apresentar sintomas de pneumonia, foi realizada investigação e mantida a amoxacilina. Foram solicitados exames bacterioscópicos e bacteriológicos de escarro, os quais foram negativos. Após dois dias com persistência da febre, trocou-se a amoxacilina por azitromicina e solicitou-se pesquisa de micoplasmas. O paciente apresentou melhora e a sorologia para M. pneumoniae demonstrou altos títulos de anticorpos. Responda: a) Qual a explicação mais plausível para os exames microbiológicos serem negativos? b) Qual a explicação para a manutenção da febre, mesmo o paciente estando em tratamento com antimicrobiano? c) Que exames podem ser realizados para confirmação da suspeita do caso? Padrão de resposta esperado a) Os micoplasmas são bactérias desprovidas de parede celular e de tamanho diminuto, com aproximadamente 0,2-0,3 µm, não sendo corados pela coloração de Gram e não podendo ser visualizados através de microscópio ótico, o que explica a ausência de achados no exame bacterioscópico. São exigentes nutricionais, pois necessitam de meios enriquecidos com lipídios e precursores de ácidos nucleicos. São muito sensíveis às condições ambientais, devendo ser colocados imediatamente em meios apropriados após a coleta da amostra. O tempo de incubação deve ser prolongado, de um a quatro dias. O exame bacteriológico de rotina para escarro visa à pesquisa dos agentes bacterianos típicos, não provendo as condições necessárias para isolamento de Mycoplasma pneumoniae. b) A amoxacilina é um antimicrobiano da classe dos betalactâmicos, que atua inibindo a síntese da parede celular. Micoplasmas são bactérias atípicas e desprovidas de parede celular, sendo então intrinsecamente resistentes ao tratamento com betalactâmicos. A alteração do medicamento para azitromicina, um macrolídio de amplo espectro que atua na inibição da síntese proteica, é acompanhada de melhora clínica em virtude da ação desse fármaco sobre o Mycoplasma pneumoniae, assim como de outras bactérias atípicas. c) O padrão ouro para confirmação de pneumonias por Mycoplasma pneumoniae é cultura e isolamento em meios de cultura específicos. Para tal, podem ser utilizadas amostras do trato respiratório (swabs, escarro, aspirado traqueal, lavado broncoalveolar e biópsia pulmonar), imediatamente inoculadas em meio de transporte, como o caldo tripticase-soja com soro bovino ou meio de cultura específico para micoplasmas. Uma vez que o cultivo nem sempre é disponível, outras técnicas são sugeridas para confirmação da suspeita, como as técnicas de amplificação de ácidos nucleicos (NAAT) realizadas diretamente de materiais clínicos com elevada sensibilidade e especificidade em comparação à cultura. Devido à disponibilidade limitada dos testes de cultura e NAAT, o diagnóstico frequentemente é realizado por meio de achados clínicos e sorológicos. A detecção de anticorpos IgM é o exame mais utilizado, pois, nas primeiras semanas da doença, títulos elevados são encontrados e vão reduzindo ao longo de meses. 1. O gênero Ureaplasma, assim como o Mycoplasma hominis, pode ser isolado em secreções genitais. Qual característica não é indicada para a diferenciação deles? C. c) Utilização de glicose. 2. Algumas espécies de micoplasmas podem ser colonizantes e outras podem ser encontradas em portadores assintomáticos ou associadas a infecções. Nas mucosas genitais, a prevalência de alguns micoplasmas é relacionada com a atividade sexual, sendo causa de vaginoses e uretrites. Selecione a alternativa que, se isolada em secreção endocervical, é indicativa de uma condição infecciosa. D. d) NAAT positivo para Mycoplasma genitalium. 3. A seguir estão listadas condições infecciosas causadas por micoplasmas. Selecione a alternativa com menor relação com a espécie Mycoplasma pneumoniae. E. e) Febre puerperal. 4. Os micoplasmas são os menores seres de vida livre conhecidos. Abaixo estão listadas algumas características. Selecione a que não se aplica aos micoplasmas. B. b) São bactérias gram-positivas. 5. No caso de um processo infeccioso causado por micoplasmas genitais, qual das alternativas cita a indicação mais adequada de fármaco? A. a) Uso de fluoroquinolonas e tetraciclinas.
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