BASES NITROGENADAS DUPLICAÇÃO DO DNA PCR

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RESUMO GÉNETICA 
 
MENDEL: utilizou ervilhas devido à alta taxa de replicação e fácil manuseio. 
Foto 51: foi a descoberta a estrutura dupla hélice do DNA pela difração de raio X. 
DNA único, mesmo que 99,9% sejam iguais, o 0,1% o deixam único. 
EUCARIONTE PROCARIONTE 
Núcleo definido Núcleo disperso 
DNA linear no núcleo e 
mitocondrias/cloropl. 
DNA circular e disperso no citoplasma 
Ribossomos complexos Ribossomos simples 
Membranas internas nas organelas Não possuem 
GENE X DNA: gene é a parte funcionante do DNA, que contém as informações 
genéticas. 
Nível de enrolamento: 
Alfa-hélice >>> nucleossoma (DNA+histonas)>>>solenoide>>> cromossomo 
DNA BARCODING: usa DNA mitocondrial para diferenciar especies 
ESTRUTURA DNA: 
ELE TEM DUPLA FITA, ANTIPARALELA, REPLICAÇÃO SEMI-CONSERVATIVA, FITAS 
COMPLEMENTARES - NÃO SÃO IDENTICAS!! 
BASES NITROGENADAS: 
PURINAS: ADENINA E GUANINA, 2 ANEIS AROMATICOS 
PIRIMIDICAS: CITOSINA, TIMINA E URACILA (RNA), 3 ANEIS AROMATICOS 
ADENINA COM TIMINA: LIGAÇÃO DUPLA 
CITOSINA E GUANINA: LIGAÇÃO TRIPLA 
NUCLEOTIDEOS: 1 FOSFATO, 1 PENTOSE (RIBOSE - RNA/ DESOXIRRIBOSE -DNA) 
LIGAÇÕES: 
N-GLICOSÍDICA -> BASE NITROGENADA COM PENTOSE (C1) 
FOSFOESTER-> PENTOSE COM FOSFATO DO PROPRIO NUCLEOTIDEO (C5) 
FOSFODIESTER-> PENTOSE COM FOSFATO DO OUTRO NUCLEOTIDEO (C3) 
SEMPRE O SENTIDO DA FORMAÇÃO É 5’--->3’ 
SULCO MAIOR E SULCO MENOR 
FORMAS: A, B, Z 
A: DESIDRATADA, RODA PRA DIREITA 
B: NORMAL, RODA PRA DIREITA 
Z: MUDA AS BASES NITROGENADAS, RODA PRA ESQUERDA 
PARTE HIDROFOBICA INTERNA ENTRE AS BASES NITROGENADAS 
PARTE HIDROFILICA EXTERNA PELA PENTOSE E FOSFATO 
O DNA SE DUPLICA PARA FORMAR NOVAS CÉLULAS 
FASES: INTÉRFASE: G1 CRESCIMENTO SEM DUPLICAÇÃO / S: DUPLICAÇÃO DO DNA 
/ G2: INÍCIO DA PRÓFASE 
O DNA SE DUPLICA EM PONTOS ESPECÍFICOS CHAMADOS REPLICONS 
OS EUCARIONTES POSSUEM VÁRIOS REPLICONS CHAMADOS ORCS 
OS PROCARIONTES SÓ TÊM 1 CHAMADO ORIC 
FASES DA DUPLICAÇÃO: 
1: HELICASE QUEBRA AS LIGACOES DE HIDROGENIO ENTRE AS BASES 
NITROGENADAS 
2: TOPOISOMERASE DESENROLA E TIRA A TENSÃO DAS FITAS 
3: PROTEINAS SSB MANTEM AS FITAS SEPARADAS 
4: PRIMER SE LIGA AS FITAS COMO SUBSTRATO DA DNA POLIMERASE 
5: A DNA POLIMERASE CONSTROI A FITA NOVA A PARTIR DO PRIMER 
6: DNA LIGASE UNE AS FITAS POR LIGAÇOES FOSFODIESTER 
OBS: PRIMER FEITO DE RNA, FITA ATRASADA PRODUZ FRAGMENTOS DE OKASAKI 
QUE SERÃO UNIDOS PELA DNA LIGASE 
 
 
 
 
 
 
PCR: REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE 
AMPLIFICAÇÃO DO DNA EXPONENCIAL 
USADO PARA ESTUDAR O DNA DE DIVERSAS MANEIRAS 
CUIDADO AO EXTRAIR O DNA PARA NÃO CONTAMINAR 
3 FASES: DESNATURAÇÃO >>> ANELAMENTO >> EXTENSÃO 
COMPONENTES: NUCLEOTIDEOS (A, G, C, T), PRIMER, TAQ POLIMERASE, Mg, ÁGUA 
MILLE, SOLUÇÃO TAMPÃO, TERMOCICLADOR 
ETAPAS: 
1: OCORRE AUMENTO DA TEMPERATURA PRA QUEBRAR AS PONTES DE 
HIDROGENIO E SEPARAR AS FITAS POR DESNATURAÇAÕ 
2: ADICIONA OS PRIMERS (ANELAMENTO) 
3: Mg ativa a TAQ polimerase pra sintetizar a nova fita (usa a TAQ por ela suportar 
altas temperaturas, ela é de uma bacteria) 
4: ADICIONA OS NUCLEOTIDEOS 
5: SOLUÇÃO TAMPAO, AGUA MILLE 
6: COLOCA NO TERMOCILADOR PRA OSCILAR A TEMPERATURA (GERALMENTE 
DEIXA POR 30 CICLOS) 
 
ELETROFORESE 
TÉCNICA PRA FRAGMENTAR OS PEDAÇOES DE DNA PARA COMPARAR COM 
OUTROS 
USADO EM TESTE DE PATERNIDADE, INVESTIGAÇÕES 
UTILIZA CORRENTE ELÉTRICA, OS PEDAÇOES MENORES E MENOS PESADOS 
TENDEM A IR MAIS RÁPIDOS, SEMPRE NA DIREÇÃO DO POLO NEGATICO AO 
POSITIVO 
PODE SER UTILIZADO GEL DIFERENTE COMO O DE AGAROSE E POLIACRILAMIDA 
AGAROSE POLIACRILAMIDA 
FRAGMENTOS LONGOS FRAGMENTOS CURTOS 
CUBA HORIZONTAL CUBA VERTICAL 
BROMETO DE ETÍDIO NITRATO DE PRATA 
COR AZUL COR AMARELA 
EXTRAIDO DE ALGA MARINHA NEUROTOXICO 
 MELHOR VISUALIZAÇAO 
ETAPAS: 
1: ESCOLHER O GEL 
2: COLOCA AS AMOSTRAS 
3: ELETROFORESE (CORRENTE ELÉTRICA) 
4: COLORAÇÃO 
5: ANÁLISE DO RESULTADO